李属植物DNA提取及RAPD反应体系的优化

以1号李,6号李和公主红为试材,对李属植物DNA提取方法进行改良并进行RAPD反应体系的优化.结果表明:改良CTAB(3%)法提取的DNA产量高,可满足RAPD扩增的需要.25 μL反应体系中,DNA聚合酶、Mg2 、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0 U、2.0mmol/L、10 pmol/L、20 ng和1.0mmol/L.     

硅胶干燥胡杨叶片DNA提取与RAPD反应体系的建立

以塔里木河流域胡杨(Populus euphratica)硅胶干燥叶片为材料,采用改进CTAB法提取胡杨基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplif ied polymorphic DNA),随机扩增多态性DNA分析的胡杨基因组DNA。通过单因素优化试验,得到胡杨RAPD分析的最佳反应体系为:40 ng模板DNA,0.8 U rTaqDNA聚合酶,2.5 mmol/L Mg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L随机引物,1×buffer缓冲液,ddH2O补足至10μL。扩增反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,38℃复性30 s,72℃延伸120 s,35个循环,最后72℃延伸7 min。     

杏叶片DNA提取和荧光AFLP反应体系的建立

以杏嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的杏叶片总DNA,通过优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了高效稳定的杏荧光AFLP反应体系;筛选出多态性好的12对引物组合,均获得稳定、清晰的扩增图谱,可进行杏品种鉴定、种质资源的遗传多样性和亲缘关系分析等研究。     

番荔枝DNA的提取和AFLP体系的建立

以7份番荔枝品种为试材,通过对DNA的提取、酶切、连接、预扩增和选择性扩增等分析,建立并研究番荔枝的AFLP分析体系,以其找出番荔枝品种间的亲缘关系,为番荔枝的杂交育种的亲本选择和嫁接砧中砧穗选择提供理论基础.结果表明:利用该体系对7份番荔枝的样品进行了分析,可以获得清晰的条带,表明所建立的体系可使用于番荔枝AFLP分析.     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

观赏竹芋DNA的提取与RAPD体系优化

文章用多种方法对观赏竹芋进行DNA的提取和RAPD体系优化研究,结果表明CTAB法较适合于观赏竹芋DNA的提取,RAPD体系优化还有待进一步确定。     

岩虱子RAPD反应体系的研究

利用RAPD（随机扩增多态DNA）技术对濒危植物岩虱子进行了RAPD反应体系的研究.以岩虱子叶片为材料,采用改良的CTAB法提取其基因组DNA,进行RAPD反应条件的优化试验.通过单因子试验分别研究了模板DNA用量、Mg^2＋浓度、dNTPS浓度、Taq酶的用量和引物浓度对RAPD反应的影响,建立了适于岩虱子RAPD分析的有效的稳定的反应体系,即在25μL总反应体系中,模板DNA的最适用量为10 ng、Mg^2＋的适宜浓度为2.0 mmol/L、dNTPs的适宜浓度2.2 mmol/L、Taq酶的用量以1 U、随机引物的浓度以2.5 μmol/L为佳.     

番木瓜DNA提取与SRAP反应体系优化

对番木瓜基因组DNA的提取及SRAP反应体系的模板、引物、dNTP、Taq聚合酶等条件进行了优化。结果表明,在20μL反应体系中,最优反应体系为模板DNA 40 ng,引物浓度0.4μmol/L,Taq聚合酶0.4 U/20μL,dNTPs 0.2 mmol/L。番木瓜的SRAP-PCR程序为94℃预变性4分钟;94℃变性1分钟,35℃复性1分钟,72℃延伸1.5分钟,5个循环;94℃变性1分钟,52℃复性1分钟,72℃延伸1.5分钟,35个循环;最后72℃延伸10分钟,4℃保存。     

山葡萄基因组DNA提取及RAPD鉴定

以雌花山葡萄（７３０６４）冷藏幼叶、香妃葡萄新鲜幼叶为试材,分别采用修改的ＣＴＡＢ法、高盐法、ＳＤＳ法提取基因组ＤＮＡ。结果表明,三种方法所提的ＤＮＡ纯度及产率有差别,从综合结果看,以ＣＴＡＢ法为好,所得ＤＮＡ不需经氯化艳梯度离心或柱层析,可直接用于ＲＡＰＤ分析。     

适于宁夏枸杞RAPD分析的DNA高效提取方法

采用优化的CTAB法提取枸杞叶片基因组DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行了RAPD初步扩增分析.DNA浓度在300 μg /mL,可达400 μg/g(叶片鲜重).OD260/OD280比值为1.44～1.6(理想值为1.8).结果表明:优化CTAB法所提取枸杞总DNA的纯度高、完整、量大,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定,并且提取操作的程序快速、简便,试验成本低、效率高.优化的CTAB法高效提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析.     

利用正交设计建立洋桔梗RAPD最佳反应体系

利用正交设计法对影响洋桔梗RAPD反应的Mg2 、dNTPs、Taq DNA 聚合酶、引物和模板等主要因素的作用进行了比较分析,建立了洋桔梗RAPD的最佳反应体系:即在25 μL反应体积中,10×PCR buffer为2.5 μL ,Mg2 浓度为2.0 mmol/L,dNTPs浓度为0.4 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L,模板浓度为50 ng/μL,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U;在此基础上,比较了不同退火温度对RAPD扩增产物的影响,退火温度经筛选选定为41℃;最后再将该反应体系应用于不同引物,结果表明该优化结果具有较好的稳定性和通用性.     

板栗SSR和RAPD技术体系的建立

主要从板栗DNA提取、PCR条件的优化等环节对SSR和RAPD的反应条件进行了优化。结果表明,采用PVP和β-巯基乙醇联合除酚,用多次洗涤和高盐相结合进行除糖提取高质量板栗基因组DNA,所获得的DNA完整,无降解,分子量在23kb以上,可扩增、可酶切,D260nm/D230nm在2.0以上,D260nm/D280nm为1.8～2.0,产率为40～300μgDNA/g叶组织,完全满足SSR、RAPD、AFLP等分子标记技术分析的需要。采用单因素对PCR反应体系中各个影响因素进行优化,结果表明对PCR结果影响最为明显的是退火温度和Mg2+浓度的变化。对退火温度和Mg2+浓度进行优化,确定RAPD的PCR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/LMgCl2,退火温度38℃;SSR反应体系Mg2+浓度为2.0mmol/L,退火温度56℃。建立了一套完善的适用于板栗的SSR和RAPD分析的稳定技术体系。     

苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明,ＲＡＰＤ反应体系中,ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０ Ｕ、０．２ｕｍｏｌ·Ｌ－１和３．０ｕｍｏｌ·Ｌ－１。采用该优化体系,以 ＯＰＪ０３为引物,构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个品种的ＲＡＰＤ指纹图谱,分析了其遗传多样性,区分了供试的２８个苹果品种中的１５个,区分率达５３．６％。讨论了ＲＡＰＤ鉴定苹果品种的应用及其主要影响因素。     

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件,建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系,并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定,效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株,体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数,可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。     

辣椒基因组DNA提取及RAPD-PCR体系的优化

以改良的SDS法提取辣椒基因组DNA,利用正交设计优化辣椒RAPD-PCR反应体系中几个重要成分的浓度,建立了辣椒基因组适用的简单、稳定和重复性较好的RAPD-PCR反应体系.     

DNA提纯方法对9种菊属植物RAPD的影响

菊属植物组织中所含的多酚类、单宁、色素及多糖类物质是干扰RAPD扩增反应的主要成份。通过比较试验,使用十二烷基硫酸钠(SDS)法提取,DNA,并补加非水溶性聚乙烯吡咯烷酮(insoluble PVP),有效地去除了上述杂质,经纯化的DNA能很好地用于RAPD分析。试验还发现,4月上旬至5月中旬植物材料处于旺盛的营养生长状态时取材提取DNA较为适宜。