解偶联蛋白及其基因多态性与能量代谢

解偶联蛋白（uncoupling proteins,UCPs）是线粒体内膜蛋白质, 目前已至少发现有5种（UCP1、UCP2、UCP3、UCP4和UCP5）,这个家族的蛋白质已经在人类、哺乳动物、禽类、鱼,甚至在植物的不同组织线粒体的内膜上被发现。UCPs 具有调节能量代谢, 促进脂肪酸的氧化作用,UCPs的基因多态性与脂肪代谢相关。     

解偶联蛋白与动物的冷适应

动物的脂肪组织为棕色脂肪组织(brow n ad ipose tissue,BAT)和白色脂肪组织(w h ite ad ipose tissue,W AT)。棕色脂肪组织中含有大量线粒体,是哺乳动物非颤抖产热的主要器官,对动物的体温控制和能量平衡调节起重要作用,位于线粒体内膜的解偶联蛋白(uncoup ling prote in,UCP)的含量和活性是决定其功能的关键因素。作者综述了UCP的结构、UCP基因的多态性及其与肥胖的关系、影响UCPmRNA表达的因素,并对UCP进行了讨论与展望。     

利用荧光实时定量PCR法测定猪肌肉中解偶联蛋白3 mRNA丰度

用SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR技术,以β-actin为参照基因,建立了猪肌肉中解偶联蛋白3(UCP3)基因mRNA丰度的定量分析方法。UCP3基因片段的PCR产物测序与GenBank中该基因的序列一致,定量PCR过程中UCP3的熔解曲线也表明该PCR过程为特异性扩增。猪肌肉样品UCP3 mRNA样品的批内和批间变异系数分别<2%和<11%,标准曲线R2=0.998,线性范围涵盖样品的Ct值。由此,实验建立的猪肌肉UCP3基因mRNA丰度测定方法是可靠的、准确的,可以用于猪肌肉中UCP3 mRNA丰度的测定。     

冷环境中解偶联蛋白对动物体温的调节作用

解偶联蛋白属线粒体内膜载体蛋白,存在动物体的棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）、白色脂肪组织（white adipose tissue,WAT）、骨胳肌以及各种器官中。这些组织器官是哺乳动物及禽类非颤抖产热（NST）及其它产热作用的主要点位,对动物的体温维持和能量平衡调节起重要作用。     

冷环境中解偶联蛋白对动物体温的调节作用

解偶联蛋白属线粒体内膜栽体蛋白,存在动物体的棕色脂肪组织(brown adiposetissue,BAT)、白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)、骨胳肌以及各种器官中.这些组织器官是哺乳动物及禽类非颤抖产热(NST)及其它产热作用的主要点位,对动物的体温维持乖能量平衡调节起重要作用.     

关岭牛解偶联蛋白3基因5’侧翼区克隆和生物信息学分析

本试验对贵州关岭牛解偶联蛋白3（uncoupling protein,UCP3）基因5'侧翼区进行克隆,并利用生物信息学软件对其1080 bp的克隆序列进行分析,以研究UCP3基因5'侧翼区特异性转录调控元件的调控机制。软件分析发现关岭牛UCP3基因5'侧翼区含有6个可能的转录起始点和33个潜在转录因子结合位点,与东北虎、家猫、印度水牛、藏羚羊、山羊、绵羊UCP3基因5'侧翼区（-196～+100 bp）序列相似性分别为82%、82%、98%、95%、96%和98%;该区域保守性较强,推测转录起始点上游-200～+1 bp可能是其核心启动子区域,该区域在调控基因转录和翻译方面具有共同的作用。试验成功克隆了UCP3基因5'侧翼区序列1080 bp,初步预测了该基因的核心启动子区。     

调节禽类体内产热作用的候选基因--禽解偶联蛋白质基因

禽体产热主要有两种类型,食物导致的产热作用(即食后体增热),和寒冷导致的非颤抖产热作用。国内外大量的科研报道,禽体产热量的高低直接影响禽的饲料转化效率,由于禽体产热增加基础代谢,与产热低的禽相比,产热高的禽需要摄入大量的饲料用于维持能量需要。禽产热的作用机制尚未完全证实。Serge Raimbault和他研究小组(2001年)进行了禽解偶联蛋白质基因cDNA的克隆,并构建了禽解偶联蛋白质基因的cDNA文库。他们通过分析不同品系(饲料转化效率高的和转化效率低)的鸡和不同条件(温度、胰高血糖处理)下禽类解偶联蛋白质的基因表达水平,建议鸡和小鸭的解偶联蛋白质基因参与产热作用的调控。     

瘦蛋白研究进展及其在养猪业上的应用展望

瘦蛋白是脂肪细胞分泌的一种分子量为16kDa的调节体脂沉积的重要因子，具有控制摄食、新陈代谢、繁殖等作用。本文从其作用机理、表达调控、生物学功能等方面综述了疫蛋白的研究进展，并对疫蛋白在瘦肉型猪生产中的应用进行了展望。     

瘦蛋白及其在动物繁殖中的研究进展

瘦蛋白（Leptin)是肥胖基因（ob基因）表达的蛋白质产物，主要产生于脂肪组织，向大脑反馈能量储存的信息并激活下丘脑中枢，调节进食和能量的消耗。此外，Leptin还可以通过直接或间接地影响下丘脑－垂体－性腺轴来调控动物的繁殖性能。笔者从Leptin的生物学基础、作用机理及繁殖调控等方面予以综述，并指出了其在家畜繁殖上的应用前景。     

持续冷热环境对肉鸡生产性能、糖代谢和解偶联蛋白mRNA表达的影响

本试验研究了不同环境温度(10~30℃)持续14 d对肉鸡生产性能、糖代谢和禽类解偶联蛋白(av UCP)mRNA表达的影响。试验选取21日龄爱拔益加(AA)肉鸡288只,随机分到6个人工环境控制舱中,每个舱饲养6笼,每笼8只鸡作为1个重复。预试期7 d,温度22℃,相对湿度60%。28日龄时将各环境控制舱温度分别逐渐(1 h内)调到10、14、18、22、26和30℃,相对湿度60%,温湿度均保持恒定直至试验结束。正试期14 d。结果表明:1)试验期内,30℃组的体重(BW)显著低于14~26℃组(P<0.05);22~30℃组平均日采食量(ADFI)随温度升高而显著下降(P<0.05);10~30℃组平均日增重(ADG)随温度升高出现先升高后下降的趋势,在22℃时最高;料重比(F/G)随温度升高呈现先下降后升高的趋势,22℃时最低;平均日饮水量(ADWC)在10℃组最低。2)试验第14天,26℃组血糖水平显著低于18℃组(P<0.05);肝糖原水平在各组之间差异不显著(P>0.05);22℃组肌糖原水平显著低于10、26和30℃组(P<0.05)。3)试验第14天,18、22℃组av UCP mRNA相对表达量显著高于其他组(P<0.05)。结果提示:在本试验条件下,从生产性能和能量利用效率考虑,28~42日龄AA肉鸡的适宜养殖温度为22~26℃。     

脂联素对体外培养新生牛脂肪细胞ADPN、HSL mRNA表达的影响

取单层生长状态良好的犊牛脂肪细胞,分别添加0、2.5、5、15、30、50、100 μg/mL外源牛重组脂联素（adiponectin,ADPN）,培养12 h后提取总RNA,采用荧光定量PCR方法检测外源脂联素对脂肪细胞ADPN mRNA和HSL mRNA表达水平的影响。结果显示,随着ADPN添加量的增多,ADPN mRNA相对表达量呈下降趋势;添加ADPN 15 μg/mL时,HSL mRNA的表达量达到峰值,之后呈下降趋势。结果表明体外培养的脂肪细胞中ADPN mRNA表达量受自身的负调节,而添加适量的ADPN可刺激脂肪细胞HSL mRNA的表达。     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响

试验在单层培养的新生犊牛脂肪细胞中,分别添加胰岛素（INS）与胰高血糖素（GN）,每个激素设置6个梯度3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测2种激素对ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明,胰岛素抑制了脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,胰高血糖素促进了ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,且ADPNmRNA与HSL mRNA存在相关性。     

瘦蛋白(Leptin)对体外培养新生牛脂肪细胞Leptin、HSL基因表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、2.5、5、10、50、100μg/L的外源牛重组瘦蛋白(Leptin),培养12h后提取总RNA,每个处理3个重复(孔),应用半定量PCR方法检测外源Leptin对脂肪细胞Leptin mRNA和HSL mRNA水平的影响.结果表明,Leptin对脂肪细胞内Leptin mRNA表达具有抑制作用,但一定浓度的Leptin能提高脂肪细胞内HSL mRNA水平,其中以5μg/L Leptin的作用最为明显;当Leptin的质量浓度超过5μg/L,HSL mRNA表达水平呈下降趋势.     

猪各组织器官内肌生成抑制素基因mRNA表达谱的研究

用Trizol试剂法提取军牧一号猪的骨骼肌、心肌、肝、肾、肺、脾、胰、脂肪的总RNA做RT-PCR和嵌套PCR,结果在军牧一号猪骨骼肌、心肌和脂肪组织内检测到了肌生成抑制素mRNA的表达,而在其他组织中未检测到.     

日粮类型对猪肌肉组织HSL mRNA和Obese mRNA基因表达的影响

选用20 kg左右的"杜×长×大"外三元杂交仔猪20头,随机分为2组,分别饲喂豆粕型和杂粕(双低菜籽粕+豆粕)型2种不同类型的日粮,饲养猪至体重达到100 kg左右时屠宰测定瘦肉率,取背最长肌肌肉组织,采用RT-PCR技术检测分析HSL mRNA和Obese mRNA表达情况,以探索出日粮类型与基因表达的关系。结果显示,杂粕日粮较豆粕日粮可显著增加HSL mRNA表达量、减少Obese mRNA表达量(P<0.05),2种日粮类型虽对猪瘦肉率无显著性影响,但是从实际值来看,杂粕日粮表现出提高趋势,较豆粕日粮提高3.5%(P>0.05)。     

不同小麦日粮对肉仔鸡肉质、脂肪酸合成酶mRNA与脂蛋白脂肪酶mRNA表达的影响

本文旨在研究不同小麦日粮对肉仔鸡生长、肉质及脂肪酸合成酶(FAS)mRNA与脂蛋白脂肪酶(LPL)mRNA表达的影响。选用300只艾维因肉仔鸡公雏,随机分为5组,每组4个重复,每个重复15只鸡,5组分别饲喂玉米日粮和4种水溶性阿拉伯木聚糖(WSAX)含量不同的小麦日粮,试验期为6周。结果表明:①随着小麦日粮中WSAX含量的增加,肉仔鸡的生长明显降低;②小麦日粮显著增加了肌肉持水力,并随小麦WSAX含量增加而升高的趋势显著(P<0.01),剪切力也随之增加(P<0.05)。饲喂小麦日粮的肉仔鸡其肉色显著低于玉米日粮组(P<0.01),各小麦日粮组间差异不显著。当小麦WSAX含量较高时,小麦日粮可以显著降低肉仔鸡肌肉脂肪和胆固醇含量(P<0.05)。各处理间胸肌、腿肌含水量无差异(P>0.05);③小麦日粮显著降低FASmRNA在肉仔鸡肝中的表达量(P<0.01),并且随日粮WSAX含量增加而表达水平降低的趋势明显。各处理间LPLmRNA表达量的差异不显著(P>0.05)。本研究表明:①当小麦中WSAX含量较低时,对肉仔鸡增重和肉质的影响较小,是玉米理想的替代品;②当小麦中WASX含量较高,则会严重影响肉仔鸡的增重、肉质及FASmRNA在肝脏中的表达,不宜在肉仔鸡日粮中大量添加。     

不同耐药水平大肠杆菌acrA和marA基因转录水平的比较

为阐明大肠杆菌耐药菌株药物敏感性变化与acrA和marA的mRNA水平之间的关系。用定量RT—PCR方法比较了多重耐药菌株、单药耐药菌株以及质控株ATCC25922的actA和marA的mRNA水平。结果。actA mRNA水平。多重耐药菌株SEMR是单药耐药菌株SEICI、SEICH和质控株ATCC25922的16倍；／natA mRNA水平。SEMR是SEICH的4倍、SEICI和ATCC25922的8倍；SEICI和SEICH的actA mRNA、marA mRNA水平与ATCC25922的无明显差异；同一菌株actA mRNA和marA mRNA水平的变化保持了较为稳定的一致性。结论：大肠杆菌多重耐药菌株的actA mRNA和marA mRNA水平与其耐药水平存在相关性。     

仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量与其血浆睾酮水平关系研究

对不同时期仔猪血浆睾酮含量和睾丸组织c-jun mRNA表达量进行了检测,以初步推测c-jun mRNA表达与睾酮分泌的关系,为进一步体外研究原癌基因c-jun对睾酮分泌的影响奠定基础。试验选择1、3、5周龄仔猪作为研究对象,利用睾酮ELISA检测试剂盒检测血浆中睾酮含量;采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测睾丸组织c-jun mRNA的表达。结果表明,仔猪血浆睾酮水平随周龄增加而显著升高,其中3周龄时睾酮含量最高;c-jun在各周龄睾丸组织中均有表达,其中3周龄仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量最高。因此,仔猪睾酮分泌与c-jun mRNA表达量可能存在相关性。     

鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性研究

运用相对定量RT-PCR方法，研究不同肠段Arbor Acre（AA）肉鸡肠道葡萄糖吸收转运主要载体SGLT1和GLUT2mRNA表达的组织特异性。结果发现。随着肠道空间位置的后移，SGLT1 mRNA的表达量逐步降低。十二指肠SGLT1 mRNA的丰度比结直肠高76．19Vo，差异极显著（P〈0．01）；而空肠和回肠SGLT1 mRNA的表达量分别比结直肠高42．86％和38．10％，差异不显著（P〉0．05），但有提高的趋势（P值分别为0．06和0．07）。十二指肠与空肠和回肠相比，SGLTlmRNA的表达量虽然分别高23．33％和27．59％，但差异不显著（P值分别为0．18和0．10）。相对定量分析表明，十二指肠和空肠GLUT2 mRNA丰度非常接近，差异不显著（P〉0．05）。定性研究显示，十二指肠与空肠GLUT2 mRNA丰度高于回肠和结直肠。鸡肠道SGLT1和GLUT2 mRNA表达的组织特异性之生理功能，有待于进一步研究。