南方鲇幼鱼细菌性败血症病原与组织病理

从天然患病南方鲇(Silurus meridionalis Chen)幼鱼的肝脏中分离获得1株优势菌,命名为SCL1.用该菌株人工感染健康南方鲇幼鱼,发现菌株SCL1的感染致死率高,且患病症状与自然发病症状一致.再从人工感染的患病鱼肝脏中分离病原菌,再次感染健康南方鲇幼鱼,其症状与自然发病症状一致,确认分离菌株为南方鲇"败血症"的致病菌.该菌株形态学、生理生化特征和16S rDNA基因序列显示其为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).药敏试验结果表明,该菌对土霉素、链霉素、氧氟沙星、氟哌酸、卡那霉素和庆大霉素高度敏感,而对青霉素钠、麦迪霉素、罗红霉素、甲氧苄啶、乙酞螺旋霉素不敏感.组织病理研究显示患病南方贴肝组织严重坏死,肝细胞排列紊乱,部分肝细胞核肿胀、崩解;脾脏细胞间界限不清,细胞核膨大,核内染色质疏松;肾小管上皮细胞肿胀,肾小囊腔间隙增大,可见该菌主要损伤南方鲇幼鱼肝、肾和脾.本研究旨在为南方站细菌性败血症的诊断与防治提供科学依据.     

暴发性鱼病菌苗的灭活条件及免疫效果的研究

０．０５％－１．０％的福尔马林、０．０１％－０．１％的新洁尔灭、３．０％－４．０％的氯仿以及６３℃高温均对嗜水气单胞菌灭活作用。温度对嗜水气单胞菌的灭活无明显影响，但低温灭活有利于菌苗抗原性的保持，受试鱼产生的保护作用更强，故以低温４℃时用３．０％－４．０％的氯仿、０．１％－０．２％的福尔马林，０．０３％－０．０５％的新洁尔灭制备的菌苗免疫效果最好。     

银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答研究

以绵羊红细胞为载体,建立了检测银鲫血清抗体的间接血球凝集试验。用该方法研究了银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答一般规律。研究结果表明,疫苗免疫组在免疫７天后可以测到血凝抗体,２１天达到高峰值４０９６,然后开始下降,３５天时抗体滴度降为１６。加弗氏不完全佐剂疫苗免疫组亦在７天时可以测到血凝抗体,２１天达到１０２４,３５天时为２０４８,抗体维持在较高的水平。对鱼体免疫后的保护力进行测定,结果表明,两个免疫组分别在７天左右和１４天左右开始产生保护力。免疫保护力在鱼体免疫初期随着抗体滴度的增加而加强,随后在一段时间内保持在较强的水平,并不随抗体滴度的下降而减弱。浸泡免疫试验的结果亦表明,银鲫可以通过浸泡免疫获得免疫保护力。     

灭活菌苗免疫的中华倒刺鲃外周血免疫指标的变化

以温和气单胞菌灭活菌苗为免疫原,平均体重(100±25)g的健康中华倒刺鲃为实验对象,免疫组腹腔注射0.2mL浓度为1.0×108CFU/mL的免疫原,对照组注射等量灭菌生理盐水,分别在单次注射0、1、2、4、7、14、21、28、35d后随机从两组各取6尾实验鱼,尾静脉采血,测定外周血的血细胞数量、白细胞分类计数、吞噬活性、抗体效价和蛋白质含量等免疫指标的变化,第35天活菌攻毒。结果表明:温和气单胞菌灭活菌苗(F-AS)可诱导中华倒刺鲃红细胞和白细胞数量增加,并引起各种白细胞分类百分比变化,提高吞噬活性和抗体效价,血清中总蛋白及球蛋白含量增加,红细胞也具有免疫功能,灭活茵苗的相对免疫保护力达65.21%。免疫早期(第1周)主要是红细胞、单核细胞和中性粒细胞数量明显增加,吞噬细胞的吞噬活性迅速提高,吞噬百分比和吞噬指数第4天达峰值;随后则是淋巴细胞大量增殖,第21天淋巴细胞、抗体效价及球蛋白达峰值。可见灭活菌苗通过促进中华倒刺鲃血细胞增殖、提高吞噬细胞的吞噬活性、产生特异性抗体等方式提高免疫保护力;免疫早期非特异性细胞免疫起重要作用,之后特异性免疫起主要作用。     

白鲢对嗜水气单胞菌疫苗的免疫应答

用嗜水气单胞菌9120株制备了鱼类出血性败血症疫苗。用该疫苗分二组对白鲢进行免疫，检测免疫后白鲢血清中的抗体水平，其中加佐剂免疫组获得了较高滴度的凝集抗体，不加佐剂免疫组产生的凝集抗体滴度较低，但用间接血球凝集试验可以检出。     

南方鲇的饲料营养

南方鲇（Silurus metidionalis Chen）原名南方大口鲇,俗称河鲇、大口鲇等,隶属于鲇形目,鲇科,鲇属。该鲇广泛分布于我国长江及其以南的江河,是一种肉食性的大型名贵经济鱼类。南方鲇的含肉率高达61．07％,     

嗜水气单胞菌灭活疫苗免疫后大鲵外周血免疫指标的变化

以福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)作为免疫原(F-AH), 通过腹腔注射免疫健康大鲵(Andrias davidianus), 分别于免疫后的第1、4、7、14、21、28天采集血液样品, 进行大鲵外周血液的血细胞计数与白细胞组成分析, 测定吞噬细胞的吞噬活性以及血清中和抗体效价, 于免疫28 d后进行攻毒感染试验。结果表明, 与对照组相比, 在免疫后第4、7、14和第21天, 免疫大鲵外周血中血细胞数量显著增加, 其中, 红细胞和白细胞数量均于第4天达峰值, 分别为7.83×10⁷个/mL和6.74×10⁶个/mL; 嗜中性粒细胞百分比也在第4天达峰值, 为28.60%, 单核细胞百分比在第7天达峰值, 为10.53%; 吞噬细胞活性显著提高, 且吞噬百分比和吞噬指数均在第4天达到最高值, 分别为34.09%和3.73。随后, 淋巴细胞百分比和中和抗体效价显著增加, 均在第21天达峰值, 分别为75.30%和1︰426.67。攻毒感染实验结果表明, 免疫组的相对免疫保护率为69.23%。由此可见, F-AH免疫原能够通过促进血细胞数量的增加、吞噬细胞吞噬活性增强以及特异性抗体的产生等方式提高大鲵的免疫保护力。

     

嗜水气单胞菌灭活苗对林蛙免疫效果的初步研究

用分离于患红腿病的长白山中国林蛙的嗜水气单胞菌,采用热灭活的方法制成嗜水气单胞菌灭活苗,通过不同的途径免疫接种林蛙,通过测定受免林蛙血清中凝集抗体效价,探讨林蛙对热灭活的嗜水气单胞菌菌苗的免疫应答状况.结果表明,受免林蛙血清中凝集抗体效价可达到27,明显高于对照组.通过检测免疫林蛙的免疫保护率发现受免林蛙中口服免疫组、浸泡免疫组、腹腔注射组、肌肉注射组的免疫保护力可达71%、76%、59%、47%.     

南方鲇仔鱼饥饿致死时间的研究

研究了不同饲养水温条件下刚能开口摄食的南方鲇4日龄仔鱼的饥饿致死时间。18℃、20℃、24℃和28℃组的50%致死时间分别为饥饿9～10d、6d、3～4d和2～3d；100%致死时间分别为饥饿16d、11d、9d和7d。     

嗜水气单胞菌对鲫三项血液指标的影响

用嗜水气单胞菌(浓度9×108CFU/mL)感染健康鲫(剂量为0.3mL/尾),4d后观察鲫的发病情况,并对鲫三项血液生化指标进行测定。结果表明:感染鲫表现出典型的嗜水气单胞菌引起的败血症症状,与对照组比较甘油三酯含量极显著下降,总蛋白含量显著下降,而谷丙转氨酶活性极显著升高。     

不同摄食状态下南方鲇幼鱼肠道黏液细胞的量化分析

量化分析了南方鲇(Silurus meridionalis)幼鱼在正常摄食节律下摄食前(S0d)、摄食后64 h(S0d-64h)、饥饿16d(S16d)、饥饿32 d(S32d)以及饥饿后首次恢复摄食64 h(S16d-64h,S32d-64h)肠道各类型黏液细胞的反应特征。结果发现,摄食后肠道各部位黏液细胞总数均有一定程度减少,其中前肠减少最为显著(P<0.05);中肠和后肠II型黏液细胞数量显著减少(P<0.05),中肠的III型黏液细胞数量显著增多(P<0.05);肠腔中黏液增多,黏液细胞呈空泡结构。S16d组和S16d-64h组前肠和中肠的I型细胞数量显著减少(P<0.05),III型细胞数量显著增多(P<0.05)。S32d组和S32d-64h组前肠各类型细胞数量以及黏液细胞总数变化不明显(P>0.05);中肠的II型细胞数量显著增多(P<0.05),IV型细胞数量显著减少(P<0.05);饥饿和恢复摄食后肠各类型黏液细胞数目变化不明显(P>0.05)。研究表明,南方鲇幼鱼肠道黏液细胞的摄食反应明显;饥饿胁迫以及恢复摄食后肠道黏液细胞的反应特征与肠道各段的生理功能相适应;面对营养胁迫时,肠道前段能迅速调节黏液细胞的数目,而后肠基本不变,可能是该鱼应对营养缺乏的保护性适应机制。     

嗜水气单胞菌灭活疫苗对虹鳟免疫力和抗病力的影响

为研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)灭活疫苗对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)(250 g±12 g)免疫力和抗病力的影响,给试验鱼腹腔注射0.2 mL的灭活嗜水气单胞菌悬液(1.0×108cfu/mL)。分别在注射前(0 d)和注射后7、14、21、28、35、42 d取样,测定血液白细胞吞噬活性、血清溶菌酶(LZM)活力、补体C3含量以及头肾和脾脏中IgM、IgT基因表达情况。结果表明:注射嗜水气单胞菌疫苗能显著提高白细胞吞噬率(PP)和吞噬指数(PI)、LZM活力和补体C3含量,注射后21 d达峰值,PI、LZM和补体C3在42 d仍显著高于对照组。免疫后21 d头肾和脾脏中IgM基因上调表达,35 d达峰值(分别上升24倍和26倍),42 d下降但仍极显著高于对照组。头肾和脾脏中IgT的上调表达比IgM弱得多,头肾35 d达峰值(上升6.2倍),脾脏28 d达峰值(上升6.1倍)。免疫42 d后嗜水气单胞菌攻毒结果表明,嗜水气单胞菌灭活疫苗对虹鳟有较高的免疫保护作用,免疫保护率达到71.43%。     

Effect of dietary composition on specific dynamic action in southern catfish Silurus meridionalis Chen

The effect of dietary macronutrient composition on specific dynamic action (SDA) in southern catfish Silurus meridionalis Chen juveniles (39.0±2.8 g) was studied. A control diet (40% protein, 10% lipid and 15% carbohydrate) was the optimal dietary profile for growth in this catfish according to a previous study. Based on this, two diets were formulated by substituting protein and lipid for one another, referred to as LPHL (30% P:15% L) and HPLL (50% P:5% L), and two diets were formulated by substituting protein and carbohydrate for one another, referred to as LPHC (30% P:30% C) and HPLC (50% P:0% C). The results showed that dietary composition affected the peak metabolic rate, duration and SDA coefficient. The peak metabolic rate in the LPHC group (211.5 mgO₂ kg^?1 h^?1) was significantly lower than catfish in the control (265.2 mg O₂ kg^?1 h^?1) and the HPLC (257.7 mg O₂ kg^?1 h^?1) group. The SDA duration in the control group (26.8 h) was significantly shorter than those of the HPLL (38.0 h), LPHC (33.8 h) and HPLC (33.8 h) groups. The SDA coefficient in the LPHL group (11.1%) was significantly lower than those of the control and the other groups (13.2–15.4%). The results suggest that in southern catfish, the SDA response to dietary carbohydrate is similar to that of dietary protein, and that the SDA may not be affected solely by an increase in the amount of protein ingested, but may be influenced by interaction of other dietary components.     

脂肪酶对南方鲇生长性能、消化酶活性及血液生化指标的影响

在基础饲料中分别添加0、0.1、0.3 g/kg的脂肪酶,饲喂平均体重(57.6±0.02)g的南方鲇(Silurus meridionalis Chen)60 d,测定南方鲇的生长性能、饲料表观消化率、消化酶活性及血液生化指标。结果显示:添加0.1 g/kg和0.3 g/kg的脂肪酶,增重率比对照组分别提高了4.0%和5.8%,但差异不显著(P>0.05),饲料系数分别下降了5.0%和6.6%,差异显著(P<0.05),肥满度和粗脂肪消化率显著提高(P<0.05),对内脏指数、肝脏指数、肠脂指数、胰蛋白酶活力、肠蛋白酶活力、肠脂肪酶活力及血液生化指标均没有显著影响(P>0.05)。添加0.3 g/kg的脂肪酶显著提高胰脂肪酶活力(P<0.05),添加0.1 g/kg的脂肪酶对胰脂肪酶活力没有显著影响(P>0.05)。结果表明,在脂肪水平为10%的饲料中添加0.3 g/kg的脂肪酶可以提高胰脂肪酶活力,提高脂肪消化率,改善饲料利用率。     

南方鲇胰腺组织结构及胰腺泡的超微结构

南方鲇 (Silurusmeridionalis)具有独立而发达的胰腺 ,为致密型。光镜观察可见 ,胰腺外被覆明显的被膜 ,厚度 5～ 2 2 μm ,发达的结缔组织纤维伸入胰腺内部 ,将腺体分隔成明显的小叶 ;胰腺组织包括外分泌部和内分泌部 ,其外分泌部是 1种管泡状腺 ,包括胰腺泡和排泄管 ;其内分泌部即胰岛 ,细胞中有甲细胞、乙细胞和丁细胞 ,核径分别为 4 .2、5 .0和 5 .3μm ,胞质颗粒分别呈红色、桔黄色和淡蓝色。超微结构观察到 ,胰腺细胞呈锥形 ,细胞中具有大而明显的核仁 ,分布着异常发达的粗面内质网、线粒体和核糖体 ,有丰富的酶原颗粒 ,胰腺细胞排列紧密 ,细胞间界限明显 ,连接复合体、泡心细胞和成纤维细胞非常清晰     

口服嗜水气单胞菌生物被膜疫苗的动物免疫试验

将热灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)生物被膜(biofilm,BF)菌苗和浮游(freecell,FC)菌苗口服免疫小鼠和剑尾鱼,通过测定抗体效价、相对保护率、小鼠的淋巴细胞转化和肠道sIgA浓度,评价免疫效果。免疫20d后,BF菌苗组50尾剑尾鱼的相对保护率为68%;FC菌苗组为42%。BF菌苗组12只小鼠的相对保护率为70%;FC菌苗组为50%;对照组为17%。BF菌苗组小鼠外周血淋巴细胞转化率是7.28、FC菌苗组为3.87、对照组为2.36。BF菌苗组小鼠肠道sIgA浓度是1.22μg/mL;FC菌苗组为0.73μg/mL;对照组为0.465μg/mL。免疫30d后,小鼠的血清凝集抗体达到最高,BF组抗体达128:1,FC组为32:1,对照组为2:1。各组间差异显著(P<0.01)。结果表明,BF菌苗较FC菌苗能更有效地刺激机体的免疫系统,尤其是肠道淋巴组织的免疫应答,对剑尾鱼和小鼠具有较好的保护力。     

嗜水气单胞菌疫苗免疫效果研究

选取对鲤鱼毒力强的嗜水气单胞菌菌株制成灭活疫苗,研究疫苗的免疫保护效应.采用甲醛灭活制备疫苗,分别对鲤鱼进行注射和浸泡试验,测定白细胞吞噬活性、淋巴细胞转化能力、血清、皮肤黏液的抗体效价及活菌攻毒后的免疫保护率.结果表明,受免鱼各项指标均明显高于对照组,注射组免疫保护率达90%,其中浸泡组各项略低于注射组.嗜水气单胞菌灭活疫苗对鲤鱼有显著免疫保护效应,可作为预防细菌性败血症感染的疫苗.     

An experimental vaccine against Aeromonas hydrophila can induce protection in rainbow trout,Oncorhynchus mykiss (Walbaum)

A candidate vaccine against Aeromonas hydrophila in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss, was developed using a bacterial lysate. To test the strength of protection, A. hydrophila challenge models were compared using injection into both the intraperitoneal (IP) cavity and the dorsal sinus (DS) with selected doses of live bacteria washed in saline or left untreated. Unlike the IP route, injection into the DS with either saline washed or unwashed cells resulted in consistent cumulative mortality and a dose response that could be used to establish a standard challenge having an LD₅₀ of approximately 3 × 10⁷ colony forming units per fish. Survivors of the challenge suffered significantly lower mortality upon re‐challenge than naïve fish, suggesting a high level of acquired resistance was elicited by infection. Passive immunization using serum from hyper‐immunized fish also resulted in significantly reduced mortality indicating protection can be transferred and that some portion of resistance may be antibody mediated. Vaccination of groups of rainbow trout with A. hydrophila lysate resulted in significant protection against a high challenge dose but only when injected along with Freund’s complete adjuvant. At a low challenge dose, mortality in all groups was low, but the bacterial lysate alone appeared to offer some protection.     

鳜浸泡嗜水气单胞菌全菌疫苗后皮肤黏液抗体的变化

应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗浸泡免疫后鳜(Siniperca chuatsi)皮肤黏液中抗体消长规律,以揭示鳜局部黏膜免疫在免疫保护中的作用及浸泡免疫的保护效果。结果表明,鳜皮肤黏液中抗体滴度在免疫后第7天达到峰值211,抗体从开始形成到消失持续21 d;添加佐剂(IMS1312、葡聚糖、莨菪碱、食盐)可以提高鳜皮肤黏液及血清中抗体滴度和相对免疫保护率,其中添加IMS1312组免疫保护率最高,达77.8%,免疫保护与抗体滴度成正相关(R2=0.79,P<0.05);以溶菌酶为代表的非特异性免疫在免疫后1周内即抗体未形成时,对鱼体起主要保护作用。此外,通过比较鳜血清与皮肤黏液中的抗体消长规律,发现血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第14天),抗体持续时间较长(42 d),初步推断鳜皮肤黏膜中可能存在相对独立于全身免疫系统的局部黏膜免疫系统。