罗尔斯通氏菌菌株H16新毒素蛋白Reu理化性质的研究

为深入研究罗尔斯通氏菌H16新毒素蛋白Reu的理化性质,以初孵菜青虫四龄幼虫为试虫,进行Reu胃毒毒力测定,计算其LD50,检测Reu的热稳定性及其对蛋白酶的敏感性,通过非变性梯度凝胶电泳测定Reu的分子量;SDS-PAGE电泳分析Reu的亚基组成;等电聚焦电泳测定Reu的等电点等。结果表明,Reu对菜青虫四龄幼虫毒力LD50为110.84μg/g;此毒素蛋白经80℃处理10min和蛋白酶K处理后,基本丧失了对菜青虫幼虫的毒杀作用;Reu的分子量为221.3kDa,由64.4kDa和57.5kDa2种亚基组成,等电点为7.08。     

罗尔斯通氏菌菌株H16新杀虫蛋白的纯化及活性测定

利用(NH4)2SO4盐析、超滤、Sephacryl-400HR凝胶过滤层析及DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析等方法,从罗尔斯通氏菌菌株H16(Ralstonia eutropha H16)中分离纯化出一种新的杀虫毒素蛋白.生物活性测定结果表明,此杀虫毒素蛋白存在于胞内和胞外上清液中,电泳结果显示胞内和分泌到胞外的杀虫毒素可能是同一种物质.此毒素对菜青虫初孵幼虫有较强的口服毒性,LD50为2.7mg/头.SDS-PAGE图谱显示此杀虫毒素是由两个亚基组成的复合蛋白.     

嗜线虫致病杆菌杀虫毒素对棉铃虫的中肠组织病理学研究

 嗜线虫致病杆菌HB310菌株与小卷蛾斯氏线虫HB310共生，对多种昆虫均具有较高生物活性。本实验通过盐析和非变性凝胶电泳等方法从嗜线虫致病杆菌HB310菌株的细胞内分离纯化出具胃毒活性的蛋白毒素Ⅱ。经毒素Ⅱ处理的棉铃虫幼虫，中肠组织的病理学变化类似于发光杆菌Tca毒素和Btδ-内毒素。棉铃虫4龄幼虫口服毒素Ⅱ 6 h后中肠组织开始发生变化：首先围食膜前端破碎，中肠柱状细胞伸长；随着时间推移，12 h后整个围食膜被破坏消失，中肠组织病变加重，肠壁细胞排列疏松混乱；随着毒素作用的逐渐减弱，处理72 h后棉铃虫中肠围食膜又重新出现。毒素Ⅱ离体处理棉铃虫围食膜，同样可以导致围食膜破碎。     

无色杆菌毒蛋白对菜粉蝶中肠的组织病理学影响

无色杆菌毒蛋白经口进入菜粉蝶幼虫体内 6、12、18、2 4h以后 ,菜粉蝶幼虫的中肠组织逐渐遭到破坏 ,开始有些肠壁细胞伸长 ,在顶端形成囊泡 ,以后囊泡和细胞核脱落进入肠腔 .处理后期临近死亡的幼虫中肠肠壁组织被严重破坏 ,仅残留基层细胞 ,并形成一些空腔 ,从而影响昆虫的正常取食 .表明这种毒蛋白能引起菜粉蝶幼虫肠道严重的病理变化     

无色杆菌毒蛋白对菜粉碟中肠的组织病理学影响

无色杆菌毒蛋白经口进入菜粉碟幼虫体内６、１２、１８、２４ｈ以后,菜粉蝶幼虫的中肠组织逐渐遭到破坏,开始有些肠壁细胞伸长,在顶端形成囊泡,以后囊泡和细胞核脱落进入肠腔,处理后期临近死亡的幼虫中肠肠壁组织被严重破坏,仅残留基层细胞,并形成一些空腔,从而影响昆虫的正常取食,表明这种毒蛋白能引起菜蝶幼虫肠道严重的病理变化。     

鰤鱼诺卡氏菌感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

从阳江闸坡海水网箱养殖的患病卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)病灶中分离出病原鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae),并人工回接感染卵形鲳鲹,病鱼的脾脏、肾脏、肝脏、鳃、心脏等器官出现直径为0.1-0.3 cm的白色结节,对患病卵形鲳鲹进行病理组织学观察,发现脾脏出血,淋巴细胞增生;肾小管上皮细胞变性、坏死,淋巴细胞增生;肝脂肪变性;鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起棒状化;心肌细胞肿胀,断裂,溶解。     

肠结肠耶新氏菌毒力因子血清的研制及其特异性研究

致病性肠结肠耶新氏菌有与组织侵入性密切相关，由毒力质粒编码的、温度依赖的特异性外膜蛋白。用含有这种特异性外膜蛋白的毒力株免疫家兔，制备抗血清，经无毒衍生株吸收，即成毒力因子血清，用此血清做菌落凝集试验，检查了２６株各种来源、不同血清型的肠结肠耶新氏菌，其结果与ＶＷ－抗原测定、自凝性试验和毒力质粒检测的结果一致。     

鰤鱼诺卡氏菌感染斑马鱼模型的建立与组织病理学研究

鱼类诺卡氏菌病近年来在我国南方省份不断蔓延,对水产行业造成巨大影响,鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,危害约20种海、淡水养殖鱼类。本研究以斑马鱼为模式动物,腹腔接种不同稀释度的强毒株鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503,通过临床症状观察、病理剖检、病原菌分离鉴定、Kaplan-Meier生存曲线分析、半数致死剂量(LD_(50))统计和组织病理学研究,初步建立了鰤鱼诺卡氏菌-斑马鱼模型。研究发现攻毒后斑马鱼出现明显的发病症状,鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503对斑马鱼的LD50为3.39×106CFU·尾,斑马鱼感染后,肾脏、肝脏、胰脏、鳃、皮肤和肌肉等组织出现明显病理学变化。结果表明,斑马鱼是鰤鱼诺卡氏菌良好的动物感染模型,该动物模型的建立将有助于诺卡氏菌病致病机理的研究和疫苗的研制。     

绿僵菌对菜青虫的毒力及其引起的虫体组织病变

研究结果表明,绿僵茵对菜青虫有较强的毒杀作用,虫体感染绿僵茵孢子后出现一系列的组织病理变化,虫体变黑、变形,茵丝侵染各种组织器官,脂肪组织崩解,肌肉组织、中肠、马氏管、消化道等遭到破坏,并在虫体内形成大量的真菌孢子.     

马桑毒素B对试虫马氏管及中肠组织的影响

采用中性红染色及石蜡切片法,研究了马桑毒素B(Tutin=CLB)对粘虫和苹掌舟蛾的马氏管及中肠组织的影响。结果表明,CLB可引起试虫马氏管壁肌肉的持续收缩,使进入管内的物质积累,降低其排泄能力,导致马氏管的皱褶数增多、马氏管及其基部的球体直径增大;同时,试虫取食CLB后可导致中肠围食膜消失,对中肠的肠壁细胞层也有伤害作用。     

非寄主植物及其提取物对菜粉蝶的产卵忌避作用

在室内测定了几种非寄主植物干粉及其提取物对菜粉蝶的产卵忌避活性.结果表明,番茄、茴香和万寿菊茎叶及其提取物对幕粉煤产卵有明显的忌避作用,其中番茄和万寿莉茎叶干粉1 d后非选择性产卵忌避率分别为50.02%和48.11%:番茄、茴香和万寿菊茎叶提取物1 d后非选择性产卵忌避率分别为72.04%,70.06%和67.34%,选择性产卵忌避率分别为78.93%,77.32%和75.88%.在供试非寄主植物中,菜粉蝶对茴香提取物的反应最敏感,选择性试验忌避中质量浓度仪为3.7470 g·mL~(-1).     

北京寄生菜粉蝶的盘绒茧蜂种类鉴定

1979-1980年,中国从加拿大引进微红盘绒茧蜂(Cotesia rubecular (Marshall))防治菜粉蝶(Pieris rapae L.),尔后,北京寄生菜粉蝶的一个土著种被误定为微红盘绒茧蜂.进一步检查两国的盘绒茧蜂标本,认为虽然两者形态相似,但仍有很明显的不同,差异在于前翅翅痣及后翅后肘室形状、雄性外生殖器抱器背突形状、齿数、阳茎基侧突形状等.为此,将北京菜粉蝶幼虫育出的盘绒茧蜂定名为拟微红盘绒茧蜂(Cotesia sp.(nr.rubecula Marshall)).     

菜粉蝶幼虫空间分布型及几种杀虫剂对其防效的研究

运用5种聚集度指标和2种回归分析方法对甘蓝地菜粉蝶幼虫的空间分布型进行了研究,结果表明菜粉蝶幼虫在一定密度下呈均匀分布.应用6种杀虫剂对甘蓝上的菜粉蝶幼虫进行药效试验,结果1%阿维菌素乳油和0.3%印楝素乳油持效性最好;25g/L溴氰菊酯乳油、2.5%敌杀死乳油、2.5%功夫水乳剂、1%阿维菌素乳油的触杀性较强,所供试6种药剂均可作为田间防治菜粉蝶的轮换药剂使用.     

苏云金杆菌H3136菌株防治菜青虫、小菜蛾试验

 用苏云金杆菌H3136菌株制成的粉剂兑水1 000倍液喷雾防治菜青虫和小菜蛾,具有很好的防治效果,防治高峰分别在药后5～7 d,2～5 d,最高防效分别达97.5%,79.8%,都比氧化乐果防效高,同时苏云金杆菌制剂不污染环境,因此可完全取代化学农药用于蔬菜的无公害生产上。     

番茄茎叶提取物对菜粉蝶的生物活性研究

以乙醇、乙醚、苯、石油醚和丙酮为溶剂对番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)茎叶进行浸提,测试各溶剂提取物对菜粉蝶5龄幼虫的触杀、拒食和胃毒活性。结果表明,各溶剂提取物对菜粉蝶(Pieris rapae L.)主要表现为拒食活性和胃毒活性,其中乙醇提取物的拒食和胃毒活性最强。     

苏云金杆菌WP防治菜青虫田间药效试验

进行苏云金杆菌WP防治菜青虫的田间药效试验,结果表明:药后3～7d每667 m2使用苏云金杆菌WP不同剂量处理对菜青虫的校正防效均高于4.5％高效氯氰菊酯EC 30.0 mL.药后1d苏云金杆菌WP 33.3 g处理的平均校正防效仅为26.41％,速效性较差;但药后3d和7d其校正防效分别为83.18％和74.80％,防效较持久与稳定.生产上建议每667 m2苏云金杆菌WP的使用剂量以33.3 g为佳,施药期应比使用化学农药提前2～3d.