利用颗粒细胞筛选绵羊VEGFR有效干扰片段的研究

为了进一步探究血管内皮生长因子(VEGF)对绵羊卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,试验采用电穿孔技术(Electroporation)将针对血管内皮生长因子受体(VEGFR)中的两个受体FLT1和KDR/FLK-1设计的6条双链小RNA导入到绵羊颗粒细胞内,通过实时定量PCR检测FLT1和KDR/FLK-1表达量的变化,筛选出针对VEGFR的有效干扰片段。结果表明:试验组F2(FLT1-siRNA-2)第1~3天的FLT1 mRNA相对表达量分别为7.17×10~(-6)±4.97×10~(-8)、5.92×10~(-6)±4.73×10~(-8)和1.14×10~(-5)±2.84×10~(-7),极显著低于其他FLT1试验组(P0.01),且FLT1 mRNA相对表达量相差100倍或10倍;试验组K1(KDR/FLK-1-siRNA-1)第1~3天KDR/FLK-1 mRNA相对表达量分别为1.46×10~(-7)±6.08×10~(-9)、2.80×10~(-7)±1.82×10~(-8)和7.99×10~(-7)±2.60×10~(-8),极显著低于其他KDR/FLK-1试验组(P0.01),且KDR/FLK-1 mRNA相对表达量相差100倍或10倍。从第4天开始试验组F2 FLT1 mRNA相对表达量和试验组K1 KDR/FLK-1 mRNA相对表达量逐渐增加,到达第9天与其他组趋于相近。最终确定针对FLT1和KDR/FLK-1最有效的干扰片段分别是FLT1-siRNA-2和KDR/FLK-1-siRNA-1。     

养鸭喂稀土好

在鸭日粮中添加稀土,具有稳定的增产效果.稀土作为养鸭饲料添加剂,在日粮中添加180×10~(-6)(180ppm),肉鸭增重可提高16%～25%,性成熟提早5～7天,添加60×10~(-6)(60ppm),蛋鸭产量可提高12%～15%,并能延长产蛋高峰持续期,投入产出比为1:20～40.稀土用于养鸭,在鸭肉、鸭肝中的残留量低于0.1×10~(-6)～0.2×10~(-6)(0.1～0.2ppm),蛋品中含量为痕量级水平,符合国家卫生标准要求.养殖业专用稀土STV—2每克可拌鸭饲料6公斤,蛋鸭饲料16公斤,持续均匀投喂即可增重增蛋.     

美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及受体介导机制探究

为了探究美洛托宁对猪卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制,试验采集健康母猪卵巢中的卵母细胞,采用免疫荧光检测猪卵母细胞MT受体表达情况;在体外成熟培养液中分别加入不同浓度的美洛托宁(0,1×10~(-5),1×10~(-6),1×10~(-7) mol/L),筛选对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的最适浓度;根据最佳美洛托宁添加浓度,成熟液中分别添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁、MT受体激动剂、 MT受体颉颃剂和1×10~(-6) mol/L MT受体颉颃剂+1×10~(-6) mol/L美洛托宁,检测美洛托宁及其受体激动剂和颉颃剂对猪卵母细胞成熟和胚胎发育的影响;收集添加1×10~(-6) mol/L的美洛托宁24 h处理组、空白对照组、MT受体颉颃剂处理组、美洛托宁和MT受体颉颃剂组母猪卵母细胞复合物,利用试剂盒检测卵母细胞cAMP和cGMP含量。结果表明:当美洛托宁浓度为1×10~(-6)mol/L时,猪卵母细胞的分裂率和囊胚率均达到最高,分别为76.26%和31.48%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L美洛托宁和1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂,两组细胞极体排出率均较高,与空白对照组相比差异显著(P0.05),1×10~(-6)mol/L MT受体激动剂和1×10~(-6)mol/L美洛托宁的分裂率分别为75.16%和75.33%,囊胚率分别为30.04%和30.36%,与空白对照组相比差异显著(P0.05);在成熟液中添加1×10~(-6)mol/L的美洛托宁可以显著降低cAMP的含量和显著升高cGMP的含量(P0.05)。说明美洛托宁通过与细胞膜G蛋白偶联受体结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进猪卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

4种常用药物对罗氏沼虾溞状幼体的毒性试验

通过4种常用药物对罗氏沼虾溞状幼体进行浸泡,运用简单回归线性方程求得4种药物对溞状幼体的的半致死浓度分别为:CuSO_4 4.0×10~(-4)%,CuSO_4∶FeSO_4(5∶2)4.0×10~(-4)%,KMnO_4 3.5×10~(-4)%,HCHO 25×10~(-4)%;4种药物对溞状幼体96 h的安全浓度分别为:CuSO_4 0.4×10~(-4)%,CuSO_4∶FeSO_4合剂(5∶2)0.4×10~(-4)%,KMnO_4 0.35×10~(-4)%,HCHO 25×10~(-4)%。     

遵义市畜禽养殖业粪便排放量估算及对环境的影响

通过遵义市统计年鉴(2000~2015年)中畜牧业数据对其产生的废弃物进行了评估。结果表明遵义市近16年畜牧业粪尿年平均产生污染物分别为:化学耗氧量(COD)1.43×10~8 kg、五日生化需氧量(BOD_5)9.89×10~7 kg、氨氮(NH_3-N)9.97×10~6 kg、总磷(TP)7.82×10~6 kg、总氮(TN)5.30×10~7 kg、锌(Zn)8.19×10~5 kg、铜(Cu)4.89×10~5 kg、铬(Cr)2.18×10~4 kg、铅(Pb)1.72×10~4 kg、镉(Cd)1.04×10~3 kg、镍(Ni)1.79×10~3 kg、砷(As)1.04×10~4kg和汞(Hg)123.50kg。该研究结果为遵义市畜牧业治理提供了科学依据。     

AA肉鸡生产指标间的相关性分析

为了研究AA肉鸡生产指标间的相关关系,试验采用相关和回归分析的方法,对河南省滑县某养鸡场16.59万只AA肉鸡的周龄(x_1)、全群存栏数(x_2)、全群成活率(x_3)、全群周耗料量(x_4)、全群累计耗料量(x_5)、全群只耗料量(x_6)、全群只累计耗料量(x_7)、全群周末体重(x_8)、全群周增重(x_9)、全群周效率(x_(10))和全群累计效率(x_(11))等生产指标进行了相关系数计算和回归分析。结果表明:全群存栏数(x_2)和全群成活率(x_3)之间呈极显著正相关(P0.01),二者与其他各指标间呈负相关关系,其余各生产指标间均呈正相关关系。生产指标间的回归方程为:x_8=59.536-3.698×10~(-3)x_4+0.098 x_5-15.125 x_7(R~2=0.999 9),x_9=-66.988+134.224 x_1+0.053 x_4-8.408 x_6(R~2=0.995 9),x_(10)=1.217+1.543×10~(-3)x_6+1.507×10~(-3)x_7-2.757×10~(-3)x_8(R~2=0.979 8),x_(11)=-19.009+0.041 x_1+0.199 x_3+2.499×10~(-6)x_5(R~2=0.996 4)。说明这些生产指标间存在不同程度的相关关系,某些生产指标间存在显著的回归关系。     

盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定

为进一步建立克伦特罗(CL)残留检测方法,给制备CL残留检测试剂盒打下基础,进行了CL单克隆抗体(McAb)的制备研究。以重氮反应,将CL与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和检测原,并通过杂交瘤技术,获得了5株能稳定分泌特异结合CL小分子的单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E9A9、2A9C1、3F2E9、6G2E9、6E10D9)。这5株细胞株经过体外传代培养和冻存复苏后均能稳定分泌抗体。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的这5株细胞上清液抗体效价分别为1:1.28×10~5、1:5.12×10~5、1:1.28×10~5、1:5.12×10~5、1:2.56×10~5;选用3F2E9、6E10D9细胞株,制备CL单克隆抗体腹水并纯化,其纯化后的腹水抗体效价分别为1:1.28×10~5、1:2.56×10~5,BCA(2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠)方法检测的浓度分别为1.60 mg/mL、1.54 mg/mL;最终通过斑点ELISA(Dot-ELISA)方法测定CL抗原与这2株抗体有较强的结合力。在上述方法的制备及验证下,成功获得了特异性较高的CL单克隆抗体,为进一步研制CL残留检测试剂盒奠定了基础。     

奶牛用药禁忌早知道

<正>1不用违禁药以下是奶牛谨(慎)用的几种药物:1.1左旋咪唑若奶牛采用每千克体重8毫克的剂量时,服用12小时后,奶牛乳汁中的残留量为0.32×10-6~0.35×10-6,60小时后残留量为0.01×10-6,所以泌乳牛要禁止使用左旋咪唑。     

绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数值

本试验旨在研究绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数(Km)值,为解释绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢特征提供酶学依据。选用6只1岁左右安装永久性瘤胃瘘管的中国美利奴(新疆型)绵羊[平均体重为(32.00±1.36)kg],饲喂精粗比为30∶70的饲粮,依次采集饲喂前(0 h)和饲喂后1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 h 6个时间点的瘤胃液,重复采集3次。分离和制备细菌、原虫破碎液,分别测定相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的Km值。结果显示:1)绵羊瘤胃细菌、原虫破碎液中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力随饲喂时间的延长均呈现先升高后降低的动态变化规律,总体在饲喂后1.5 h达到峰值;谷氨酸和氨含量也呈现相似的变化规律。原虫破碎液中参与蛋白质分解代谢的这4种酶的活力在各时间点均极显著高于细菌(P0.01)。2)原虫破碎液谷氨酸含量极显著高于细菌(P0.01);原虫破碎液氨含量在1.5、6.0、9.0和12.0 h显著或极显著高于细菌(P0.05或P0.01)。3)绵羊瘤胃细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的Km值分别为2.60×10~(-7)、1.48×10~(-7)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对谷氨酸的Km值分别为8.41×10~(-6)、4.91×10~(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的Km值分别为3.80×10~(-8)、2.70×10~(-8)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对α-酮戊二酸的Km值分别为1.16×10~(-6)、2.07×10~(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对氨的Km值分别为2.97×10~(-5)、1.40×10~(-5)mol/L。结果提示,总体上,绵羊瘤胃细菌、原虫中蛋白酶、谷氨酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活力在饲喂后1.5 h达到峰值,之后逐渐降低;绵羊瘤胃原虫中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力均极显著高于细菌,原虫中蛋白质分解代谢更旺盛;瘤胃原虫中不仅存在谷氨酸转氨机制,还可能存在利用氨重新合成氨基酸的机制。     

口服头孢拉定对鸡大肠杆菌病的治疗

目的:探讨口服头孢拉定治疗鸡大肠杆菌病的治疗效果。方法:应用试管二倍稀释法测定头孢拉定对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度,并实施低剂量、中剂量和高剂量试验。结果与结论:头孢拉定对鸡大肠杆菌病标准株、分离株的最小抑菌浓度分别为2~4mg/L和0.5~32mg/L。质量分数为100~200×10~(-6)头孢拉定饮水能够对鸡大肠杆菌病发挥较好的治疗效果,而质量分数为300×10~(-6)头孢拉定饮水能够完全控制鸡大肠杆菌病的发生。     

猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用

猪德尔塔冠状病毒(porcine delta coronavirus,PDCoV)是2012年中国香港首次发现的冠状病毒,能引起感染仔猪水样腹泻,最终脱水死亡。研究根据PDCoV保守的衣壳蛋白基因(N)序列设计特异性引物,建立荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法在6.31×10~6～6.31×10~1copies/μL,Ct与模板浓度之间具有良好的线性关系,斜率为-4.90,相关系数为0.999。所有标准品模板出现唯一熔解峰,敏感性下限为6.31×10~(1 )copies/μL,PEDV和TGEV等均没有检测信号。对60份临床样品检测,PDCoV阳性率为5.0%,表明本研究建立的方法可以快速灵敏地检测PDCoV,从而为PDCoV的预防和疫苗研制奠定基础。     

葛根芩连汤对小鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

为了探讨葛根芩连汤水煎液对小鼠肠黏膜微血管内皮细胞(MIMVECs)的影响,试验采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)检测葛根芩连汤水煎液对体外培养的MIMVECs增殖的影响。结果表明:当葛根芩连汤水煎液在6.40×10~(-2)~1.00×10~3mg/m L时,抑制MIMVECs增长;在2.56×10~(-3)~1.28×10~(-2)mg/m L时,促进MIMVECs增长。说明葛根芩连汤水煎液在一定浓度下对MIMVECs既有促进增殖又有抑制增殖的作用。     

采后反式白藜芦醇和甜菜碱处理对“El-Bayadi”鲜食葡萄贮藏及货架期品质、生物活性的影响

正据《Scientia Horticulturae》的一篇研究报道(http://dx.doi.org/10.1016/j.scienta.2015.09.065),来自沙特阿拉伯阿卜杜勒阿齐兹国王大学的Mohamed A.Awad等人研究了外源反式白藜芦醇(1.6×10~(-5)M、1.6×10~(-4)M和1.6×10~(-3)M)和甜菜碱(GB)(10、15、20 m M/L)处理对"El-Bayadi"鲜食葡萄冷藏30 d后放置货架2 d后的果实品质、抗氧化能力、抗氧化物质和酶活性等的影响。与对照相比,反式白藜芦醇尤其是中高浓度的白藜芦醇及高浓度的GB降低了果实贮藏后的腐烂率。与对     

体外受精生产性控犏牛胚胎条件的优化

为提高性控犏牛胚胎体外发育率,从性控精液的精子密度、受精时间、卵丘细胞的脱除程度、胚胎培养体系和胚胎培养环境各个环节进行优化。结果表明:(1)受精24h的卵裂率和囊胚率显著高于受精6h、18h(P0.05);(2)性控精液的精子密度0.4×10~6~0.6×10~6个/mL时的卵裂率显著低于4×10~6~6×10~6个/mL组(P0.05),但囊胚率差异不显著(P0.05),均显著高于性控精液0.04×10~6~0.06×10~6个/mL的卵裂率和囊胚率(P0.05);(3)卵丘细胞不脱除组的囊胚率(23.42%)显著高于半脱除组(13.77%)和完全脱除组的囊胚率(15.61%)(P0.05);(4)输卵管上皮细胞共培养的囊胚率(24.63%)和卵丘细胞共培养的囊胚率(23.42%)差异不显著(P0.05),但均显著高于FBS CR1aa培养液的囊胚率(P0.05);(5)性控犏牛早期胚胎在低氧培养环境下囊胚率(23.42%)显著高于高氧培养环境(11.83%)(P0.05),而孵化囊胚率差异不显著(P0.05)。结果说明,生产性控犏牛胚胎最佳的条件是性控精液的浓度0.4×10~6~0.6×10~6个/mL,受精时间为24h,采取卵丘细胞不脱除的方法,胚胎培养方式采用输卵管上皮细胞共培养的方式,胚胎培养环境采用低氧环境。     

氨和硫化氢对养鸡生产的危害及预防措施

冬春季节天气寒冷,大多数养鸡户为了防寒保暖,往往忽视了通风换气,使舍内有害气体达到了很高的浓度,使人和鸡受到了不同程度的毒害,其中最常见和危害最大的是氨和硫化氢。 氨是一种无色而具有强烈刺激性臭味的气体,多由鸡粪产生,越接近地面其含量越高。当舍内温热潮湿、密度较高、通风不良时,极易导致舍内氨浓度增高。人对10×10~(-6)的氨一般很难察觉,50×10~(-6)的氨则可引起人流泪和鼻塞,100×10~(-6)的氨会使眼泪、鼻涕、口涎显著增多。而严重通风不良的鸡舍有时氨的浓度可高达100×10~(-6)。 氨在水中的溶解度很高(0℃时1升水可溶解907     

家蚕核型多角体病毒云南株(Bm NPV-YN1)对不同龄期家蚕的侵染致病效应

家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)是主要的家蚕病毒病病原之一,由其侵染家蚕引发的家蚕核型多角体病(血液型脓病)严重影响云南的蚕业生产。测定分离自云南蚕区的Bm NPV株系(Bm NPV-YN1)对家蚕1~5龄幼虫的毒力,并运用"时间—剂量—死亡率"模型模拟分析该病毒株对家蚕各龄幼虫的感染致病力。结果表明,以浓度为1×10~8~1×10~5m L~(-1)的Bm NPV-YN1多角体悬液添食处理后,家蚕各龄幼虫的感病死亡率随添食病毒多角体悬液浓度的降低而下降,添食1×10~7m L~(-1)Bm NPV多角体悬液后第7天,家蚕1~5龄幼虫的累积死亡率分别为100%、76.67%、72.22%、56.67%和26.67%。Bm NPV-YN1对家蚕幼虫的致病力与龄期相关,其敏感程度从高到低排序依次为1龄、2龄、3龄、4龄、5龄。用Bm NPV-YN1多角体悬液添食家蚕1~5龄幼虫后第7天,致死中浓度(LC_(50))估计值分别为4.78×10~4m L~(-1)、5.38×10~5m L~(-1)、2.22×10~6m L~(-1)、7.95×10~6m L~(-1)和3.92×10~8m L~(-1)。在1×10~8~1×10~5m L~(-1)浓度范围内,Bm NPV-YN1对家蚕幼虫的致死中时(LT_(50))与添食浓度相关,对1~4龄幼虫的LT_(50)值随着Bm NPV-YN1添食浓度的降低而增加。研究结果表明,Bm NPV-YN1对家蚕具有较强的侵染致病效应,提示云南蚕区对血液型脓病的防控应以小蚕期为主,同时密切关注各龄期的眠初期。     

饲粮添加粪肠球菌对蛋鸡生产性能、蛋品质、脂质代谢和肠道微生物数量的影响

本试验旨在研究饲粮添加粪肠球菌对蛋鸡生产性能、蛋品质、脂质代谢和肠道微生物数量的影响。选择137日龄海兰褐壳蛋鸡450只,随机分成5个组,每组6个重复,每个重复15只鸡,分别饲喂在基础饲粮中添加0、1.0×10~4、1.0×10~6、1.0×10~8和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌(CGMCC1.2135T)的试验饲粮。试验期168 d。结果显示:1)试验第113~140天和第141~168天,1.0×10~6CFU/g粪肠球菌添加组蛋鸡的产蛋量极显著高于对照组和其他粪肠球菌添加组(P0.01)。试验第141~168天,1.0×10~4CFU/g粪肠球菌添加组的料蛋比显著低于1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组(P0.05)。2)试验第56天,各粪肠球菌添加组的蛋壳厚度均显著高于对照组(P0.05),对照组和1.0×10~6CFU/g粪肠球菌添加组的蛋白高度显著高于1.0×10~4和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组(P0.05);试验第84天和第140天,1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组的蛋白高度显著高于1.0×10~4CFU/g粪肠球菌添加组(P0.05)。试验第56天,1.0×10~6CFU/g粪肠球菌添加组的哈夫单位极显著高于1.0×10~4和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组(P0.01);试验第84天,1.0×10~6和1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组的哈夫单位显著高于1.0×10~4CFU/g粪肠球菌添加组(P0.05)。试验第28天,1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组的蛋黄颜色极显著高于对照组和1.0×10~4CFU/g粪肠球菌添加组(P0.01);试验第56天,1.0×10~4、1.0×10~6和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组的蛋黄颜色极显著高于对照组(P0.01);试验第112天,各粪肠球菌添加组的蛋黄颜色均极显著高于对照组(P0.01),且1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组的蛋黄颜色极显著高于1.0×10~6CFU/g粪肠球菌添加组(P0.01);试验第140天,1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组的蛋黄颜色极显著高于对照组(P0.01),而1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组蛋黄颜色极显著低于对照组和其他粪肠球菌添加组(P0.01)。3)试验第56天和第112天,1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组蛋鸡的蛋黄总胆固醇含量极显著低于对照组、1.0×10~4和1.0×10~6CFU/g粪肠球菌添加组(P0.01)。与对照组相比,饲粮添加粪肠球菌显著或极显著降低试验第84天的血清总胆固醇(P0.01)、低密度脂蛋白胆固醇含量(P0.01)和第168天的血清甘油三酯含量(P0.05)。4)1.0×10~6、1.0×10~8和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组的回肠大肠杆菌数量显著低于对照组(P0.05);空肠大肠杆菌数量随粪肠球菌添加水平的增加呈线性降低(P0.05)。1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组的回肠粪肠球菌数量极显著高于对照组、1.0×10~4和1.0×10~8CFU/g粪肠球菌添加组(P0.01);1.0×10~8和1.0×10~10~CFU/g粪肠球菌添加组的盲肠粪肠球菌数量极显著高于对照组(P0.01)。结果表明,饲粮添加粪肠球菌能提高蛋鸡的产蛋量、蛋白高度和蛋黄颜色,降低血清和蛋黄的总胆固醇含量,调节肠道微生物数量;粪肠球菌在蛋鸡饲粮中的适宜添加量为1.0×10~6或1.0×10~8CFU/g。     

绵羊冷冻精液子宫内输精部位和输精剂量对受精力的影响

研究用绵羊冷冻精液进行子宫内输精剂量、双侧或单侧子宫角输精和子宫角输精部位等3个试验。先用孕激素阴道海绵法和注射PMSG进行同期发情处理。试验1(A):用3头公羊的0.5×10~6、5×10~6、25×10~6和50×10~6活精子数输精,产羔母羊率分别为29.3、26.8、56.3和62.1％;     

部分商品化非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒的比对

为获得商品化非洲猪瘟病毒(ASFV)荧光PCR检测试剂盒的敏感性、特异性、一致性和最低检测限等试验数据,以世界动物卫生组织(OIE)推荐引物探针为金标准,以62份已灭活的ASFV阳性田间样品、32份阴性田间样品和P72基因核酸标准物质为检测对象,对农业农村部公布许可的其中17个厂家生产的商品化ASFV荧光PCR检测试剂盒开展了试验特性方面的比对研究。结果显示,17个厂家生产试剂盒的敏感性最低为77.4%,最高为96.8%,特异性最低为87.5%,最高为96.8%,均未达到100%,且有一定差别;12个厂家的试剂盒与OIE推荐引物探针检测结果一致性较好(Kappa值≥0.75),其余5个厂家的试剂盒与其一致性一般(0.4Kappa值0.75);17个厂家的试剂盒均可检测到的最低稀释度为5.9×10~3×2~(-3)拷贝/μL,但不同厂家试剂盒的最低检测限有所差别,其中5个试剂盒可检测到的最低稀释度为5.9×10~3×2~(-3)拷贝/μL,2个试剂盒为5.9×10~3×2~(-4)拷贝/μL,6个试剂盒为5.9×10~3×2~(-5)拷贝/μL,3个试剂盒为5.9×10~3×2~(-6)拷贝/μL,1个试剂盒至少为5.9×10~3×2~(-7),且大部分国产试剂盒的最低检测限比进口试剂盒低。本研究为ASFV荧光PCR检测试剂盒的筛选和比对提供了参考数据。     

基于实时荧光定量PCR技术的猪伪狂犬病活疫苗含毒量评价

为定量分析贵州省临床用猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)活疫苗中病毒含量,根据GenBank中公布的伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)gB基因序列(登录号:M17321.1)设计1对特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对来自6个不同厂家的猪伪狂犬病活疫苗进行含毒量分析。结果显示,试验成功建立了可用于PRV检测的实时荧光定量PCR方法,标准曲线中标准品各稀释度质粒拷贝数与Ct值呈良好的线性关系,标准曲线方程为:Y=-0.97X+33.66(R^2=0.999),该方法最低检测病毒含量为3.19×10~1拷贝/μL,敏感性高且具有良好的重复性和特异性。应用所建立的实时荧光定量PCR方法对贵州省临床用6个厂家生产的猪伪狂犬病活疫苗的病毒含量进行检测,结果显示,6种市售猪伪狂犬病活疫苗(A～F)中病毒含量分别为1.67×10~7、4.83×10~5、2.64×10~6、4.27×10~7、3.39×10~6和3.68×10~5拷贝/μL,来自不同厂家的疫苗病毒含毒量存在明显差异,最大差异可达116倍,其中来自A、D厂家的两种猪伪狂犬病活疫苗具有较高的含毒量。本试验所建立的实时荧光定量PCR方法可用于猪伪狂犬病活疫苗病毒含量的快速检测和评价,对猪伪狂犬病活疫苗的质控和临床用疫苗选择具有一定的指导意义。