北京鸭胸腺和法氏囊中淋巴细胞膜蛋白成分的初步比较

北京鸭屠宰后,取其胸腺、法氏囊,经淋巴细胞分层液分离后,再经尼龙棉柱得到胸腺细胞(T-C)和法氏囊细胞(B-C),其中一部分用以提取细胞膜蛋白,并用SDS-PAGE电泳进行鉴定分析.用完整细胞和提取的膜蛋白分别作为包被抗原,兔抗鸭胸腺淋巴细胞多克隆抗体(RADTS)和兔抗鸭免疫球蛋白(Ig)轻链多克隆抗体(RADLCS)作为第一抗体进行间接ELISA试验,对所提膜蛋白成分加以区分、比较.结果表明:北京鸭T-C、B-C膜上存在多种共同的膜蛋白成分,并且胸腺细胞上有类似于Ig轻链的成分,但其数量低于法氏囊细胞上的数量.     

日粮蛋白水平对北京鸭生产性能和脂肪代谢的影响

试验研究了日粮蛋白质水平对生长肉鸭生产性能及脂肪代谢的影响,重点考察了0～28日龄北京鸭生长性能指标和相关的血液生化指标,另外还测定了肉鸭肝脏脂肪合成酶类(苹果酸脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)的指标,试验的目的是探讨不同蛋白质水平对肉鸭生产性能和脂肪酸合成酶类(特别葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性值)的影响。试验结果表明:①从尿素氮和白蛋白及总蛋白总的分析来看,蛋白质水平高低可以影响肉鸭蛋白质的沉积,对于北京鸭后期生长14%的低蛋白水平即可满足其生长。②不同蛋白质水平对肉鸭苹果酸酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性影响不显著(P<0.05),但是随着日龄的增加,苹果酸酶活性值出现增加的趋势。     

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获－酶联免疫吸附试验（AC－ELISA），琼脂扩散试验（ACP）快速诊断试纸条（ISK）对感染同株强毒或弱毒囊病病毒（IBDV）的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较，结果表明，上述3种方法测得法氏囊中温毒IBDV抗原效价分别为10^6.0(AC-ELISA),2^-3.0(AGP)t 10^-3.0，测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为10^-1.0,0和0。强毒株接种鸡胚后，只有第1代鸡胚组织可被AC－ELISA测到低效价的IBDV抗原，而第2代以后则未能测到病毒抗原，弱毒疫苗株IBDV感染鸡后，法氏囊中可测到低效价抗原，但感染鸡胚后则无可测性病毒抗原。     

新城疫病毒人工感染鸡诱导胸腺和法氏囊细胞凋亡的初步研究

本研究用新城疫病毒(NDV)参考强毒株F48E8感染鸡,通过光镜和电镜观察鸡的胸腺和法氏囊淋巴绌胞凋亡的形态学特征,并进行统计学分析。NDV感染鸡后,其胸腺和法氏囊淋巴细胞凋亡数量显著增加(P＜0．01)。实验结果说明NDV参考强毒株F48E8人工感染鸡后可以诱导胸腺和法氏囊淋巴绌胞凋亡。     

肉鸡、火鸡和北京鸭的氨基酸消化率比较

本研究旨在比较3周龄肉鸡、火鸡和北京鸭的盲肠前氨基酸消化率。配制5种日粮：基础日粮及用150g／kg或300g／kg豆粕或菜粕代替淀粉。日粮粗蛋白和氨基酸差异来自于豆粕和菜粕。用二氧化钛作不可消化的指标剂。每种动物分入6个笼中，每个笼有12只。14日龄时让处理动物自由采食1周。以笼为单位，从回肠憩室（Meckel’s diverticulum）到回盲结前2cm处的肠远端2／3部位取食糜。摄入的氨基酸和消化的氨基酸按笼测定。2种日粮的消化率按多重线性回规分析，这样能使内源氨基酸损失得到校正。这几种粕的必需氨基酸的消化率处于92％（蛋氨酸，菜粕，肉鸡）到（缬氨酸，     

樱桃谷北京鸭短喙和侏儒综合征的初步研究

2014年1月至今,我国部分地区所饲养的樱桃谷北京鸭商品肉鸭发生了一种疾病。为诊断该病,从1个38日龄感染鸭群选典型病例和外观正常者各9只,对其体重、喙和舌头进行了测量和分析,随后进行了分子检测和人工感染试验。结果显示,典型病例的体重(1.40±0.51 kg)和喙长(4.00±0.26 cm)与外观正常者(2.87±0.51 kg和5.74±0.58 cm)存在显著差异,提示该病具有半番鸭短喙和侏儒综合征(Short beak and dwarfism syndrome,SBDS)的特征,即喙短、舌头伸出、生长发育严重受阻。用水禽细小病毒的PCR进行检测的结果显示,从37日龄病例采集的36份组织样品均为小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)阳性。用VP1和VP3序列进行进化分析的结果均显示,樱桃谷北京鸭源毒株与导致半番鸭SBDS的毒株聚为一个分支,二者属GPV的同一类变异株。用GPV阳性样品感染2日龄北京鸭,可复制出与自然病例相似的短喙症状。结果表明,GPV变异株与樱桃谷北京鸭SBDS相关。     

鸡传染性法氏囊中等毒力毒株囊组织灭活苗的研制

本研究初步尝试用不同的传染性法氏囊中等毒力毒株制备囊组织灭活苗,并与商品化组织灭活苗以及活苗作比较,试图筛选出一株免疫原性好,保护率高的中等毒力毒株制备囊组织灭活苗,在生产成本许可的条件下主要用在严重感染的疫区和大型的种鸡场来预防传染性法氏囊病。     

IBDV超强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白动态表达的研究

为证实传染性法氏囊炎超强毒SNJ93株感染SPF鸡后1～14d内法氏囊淋巴细胞中Bcl-2、Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系,应用透射电镜观察、TUNEL法标记检测凋亡的淋巴细胞,用免疫组织化     

1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ的体外诱生

为研究超抗原(SAg)在禽类诱导的免疫机理和进一步揭示MDV(马立克氏病病毒)感染的免疫学规律,采用NO-释放法,设计用雏鸡骨髓巨噬细胞为靶细胞检测1日龄雏鸡接种超抗原SEB和MDV后脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生的动态变化.结果发现,超抗原SEB(SAG-SEB)可提高脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生水平,其中,高剂量(1 ng/只)引起短时加强后下降,而低剂量(0.01 ng)则出现缓升缓降现象;而MDV接种则抑制脾与胸腺淋巴细胞IFN-γ体外诱生; SAg-SEB能增强雏鸡细胞免疫,主要表现于接种初期(1-10 d PI),而MDV却在接种后1-25 d间降低细胞免疫;说明超抗原SEB和MDV虽然均可引起鸡T细胞增殖,但对鸡免疫细胞IFN-γ的体外诱生作用不同.     

硒镉互作对体外培养鸡淋巴细胞硒蛋白K和硒蛋白S表达的影响

为了探讨镉对体外培养鸡淋巴细胞硒蛋白S和硒蛋白K表达的影响及硒的颉颃作用,试验在体外培养鸡脾脏淋巴细胞的培养液中分别添加硒1×10-7mol/L、镉1×10-6mol/L和硒1×10-7mol/L加镉1×10-6mol/L,分别在培养的12,24,36,48小时采用实时PCR法检测硒蛋白K和硒蛋白S mRNA表达量。结果表明:硒能够显著提高镉诱导的硒蛋白K和硒蛋白S mRNA的表达量,镉能够降低体外培养鸡淋巴细胞硒蛋白K和硒蛋白S的表达量。     

胚胎及胚后发育期鸭腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的研究

采用PCNA免疫组化法和TUNEL染色法,并结合光、电镜技术研究天府肉鸭胚胎及胚后发育期腔上囊淋巴细胞增殖与凋亡的动态变化规律。结果显示胚胎期腔上囊淋巴细胞增殖明显,其滤泡淋巴细胞增殖指数（PIF）随胚龄增加而逐渐增高,26d胚龄达峰值。胚后期各组滤泡皮质淋巴细胞增殖指数（PIC）和髓质淋巴细胞增殖指数（PIM）均呈下降趋势;各组PIM均明显高于PIC。胚胎期腔上囊滤泡淋巴细胞凋亡指数（AIF）随胚龄增大而逐渐增高。胚后期O～3周龄滤泡髓质淋巴细胞凋亡指数（AIM）继续增高,滤泡皮质淋巴细胞凋亡指数（AIC）则无明显变化;AIC和AIM在5周龄下降,17周龄明显升高,29周龄达峰值。胚后0～14周龄,各组AIM均明显高、于AIC,而17～29周龄AIM则明显低于AIC。凋亡淋巴细胞核呈现多种形态,线粒体肿胀,嵴断裂。结果提示淋巴细胞增殖与凋亡在鸭腔上囊胚胎及胚后发育的整个过程中普遍存在,具有明显增龄变化特性,二者协同参与腔上囊发育和退化过程。     

鸭腔上囊胚胎及胚后发育期凋亡相关蛋白的免疫组化分析

研究天府肉鸭腔上囊胚胎及胚后发育期Bcl-2、Bax、Fas、FasL蛋白的表达。将20只天府肉鸭分为4组,即24天胚龄(E24),胚后3、8、29周龄(P3、P8、P29),采用免疫组化技术。结果显示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL在各组滤泡淋巴细胞中均有表达,FasL还表达于滤泡间上皮。滤泡皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2阳性率呈递减的变化趋势(髓质P3～8除外);皮质和髓质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8恒定,P29上升;皮质和髓质淋巴细胞Bcl-2/Bax值呈下降趋势,但皮质在P3～8恒定,髓质在P3～8上升;滤泡皮质和髓质淋巴细胞Fas阳性率在E24～P3上升,P3～8下降,P8～29上升;皮质和髓质淋巴细胞FasL阳性率变化规律与Fas相似,但皮质在P3～8恒定。滤泡皮质淋巴细胞Bcl-2阳性率及Bcl-2/Bax值在E24～P8明显高于髓质,在P29则显著低于髓质;皮质淋巴细胞Bax阳性率在E24～P8与髓质无显著差异,在P29则明显高于髓质;皮质淋巴细胞Fas和FasL阳性率在E24～P8明显低于髓质,在P29则显著高于髓质。结果提示,Bcl-2、Bax、Fas、FasL是鸭腔上囊胚胎及胚...     

与鸭C4结合蛋白互作的鸭疫里默菌外膜蛋白的筛选及鉴定

旨在筛选并鉴定与鸭C4结合蛋白（C4b-binding protein,C4BP）互作的鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,R.anatipestifer）外膜蛋白。本研究将保存的R.anatipestifer复苏培养,提取外膜蛋白,以鸭C4BPα作为诱饵蛋白进行His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱鉴定,筛选与鸭C4BP可能发生互作的候选外膜蛋白;将各候选蛋白进行克隆、原核表达,免疫小鼠制备多克隆抗体,利用Far-western blot验证与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白;针对候选蛋白及C4BPα各功能结构域进行克隆及原核表达,利用Far-western blot鉴定候选蛋白及与C4BP的相互作用位点;利用ELISA对补体因子C3b、C4b及C4BP在R.anatipestifer表面沉积情况进行测定,验证候选蛋白的功能。结果显示,经His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱分析,共筛选出3个与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白,即ECE-1、SODs和Omp62;成功获得3个外膜蛋白多克隆抗体,ELISA检测3种多克隆抗体效价均超过1∶6 400,Western blot检测3种多克隆抗体可以与重组蛋白发生特异性反应;Far-western blot结果显示,仅ECE-1能够与C4BP发生相互作用,并且只有ECE-1全长能与鸭C4BP相互作用,而鸭C4BP与ECE-1的相互作用区域位于C4BPα的SCR 2和SCR 3;当健康鸭血清稀释度为3.125%时,ECE-1抗体能够显著促进补体因子C3b、C4b在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）,当健康鸭血清稀释度为6.25%时,ECE-1抗体能够显著抑制C4BP在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）。本研究成功筛选并鉴定出1个与C4BP互作的R.anatipestifer外膜蛋白ECE-1,为进一步阐明R.anatipestifer免疫逃逸机制奠定了基础。     

Screening and Identification of Outer Membrane Proteins of Riemerella anatipestifer Recruited Duck C4b-binding Protein

The purpose of this experiment was to screen and identify the outer membrane proteins of Riemerella anatipestifer (R. anatipestifer) interacting with duck C4b-binding protein (C4BP). The preserved R. anatipestifer was resuscitated, then the outer membrane proteins of R. anatipestifer were extracted and His pull-down and LC-MS/MS were conducted by using duck C4BPα as the bait protein, and the candidate outer membrane proteins that might interact with duck C4BP were screened out. The candidate proteins were cloned, prokaryotic expression was conducted and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing the mice. Far-western blot was conducted to verify the outer membrane proteins of R. anatipestifer interacting with duck C4BP. The clone and prokaryotic expression of functional domains of candidate proteins and C4BPα were conducted, and Far-western blot was used to identify the interaction sites between candidate proteins and C4BP. The deposition of complement C3b, C4b and C4BP on the surface of R. anatipestifer were detected by ELISA to verify the function of the candidate proteins. The results showed that a total of 3 outer membrane proteins of R.anatipestifer interacting with duck C4BP were screened out by His pull-down and LC-MS/MS, namely ECE-1, SODs and Omp62. The polyclonal antibodies of 3 outer membrane proteins were successfully prepared, the titers of 3 polyclonal antibodies were more than 1∶6 400 by ELISA, and the result of Western blot showed that 3 polyclonal antibodies could specifically react with corresponding recombinant proteins. The results of Far-western blot showed that only ECE-1 could interact with C4BP, and only the full length of ECE-1 could interact with duck C4BP, and the interaction region between duck C4BP and ECE-1 was located in SCR 2 and SCR 3 of C4BPα. Anti-ECE-1 antibody could significantly increase the C3b and C4b deposition on the surface of R. anatipestifer using 3.125% normal duck serum (NDS, P<0.05), while anti-ECE-1 antibody could significantly decrease the deposition of C4BP on the surface of R. anatipestifer using 6.25% NDS (P<0.05). The study successfully screened out and identified one outer membrane protein (ECE-1) of R. anatipestifer interacting with duck C4BP, which provide a basis to further study the mechanism of R. anatipestifer immune escape.     

锌对雏番鸭淋巴器官中肥大细胞数量的影响

选择1日龄健康雏番鸭45只,随机分为3组,分别喂以每kg含锌离子20mg、40mg、200mg的饲料,饲养期为45d。于15日龄、30日龄和45日龄每组随机宰杀5只,取法氏囊、脾脏、胸腺,Carnoy法固定,甲苯胺蓝染色,显微镜观察肥大细胞数量的变化规律。结果表明：15日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺和脾脏的肥大细胞数量均比另外两组高,（P〉0.05）,而法氏囊中低锌日粮组肥大细胞数量比另外两组明显高（P〈0.01）。30日龄时,低锌日粮组鸭子胸腺、脾脏和法氏囊中肥大细胞数量均比高锌日粮组显著增多（P〈0.05）,而与正常锌日粮组相比,差异不显著（P〉0.05）。45日龄时,法氏囊高锌日粮组与低锌日粮组和正常锌日粮组差异显著（P〈0.05）;脾脏各组间差异不显著（P〉0.05）,但高锌日粮组肥大细胞数量最多;胸腺低锌日粮组与高锌日粮组和正常锌日粮组差异极显著（P〈0.01）。因此,锌具有稳定免疫器官中肥大细胞数量的重要作用,但长时间添加高剂量锌反而会增加肥大细胞数量。     

Effects of Threonine in Low Protein Diet on Growth Performance and Plasma Biochemical Index of Pekin Duck

The present study was conducted to evaluate the threonine requirement for Pekin ducks in low protein diets by determining the effects of threonine on growth performance,carcass traits,and serum parameters.In total,240 1-day-old were randomly allocated to one of five dietary treatments with six replicate cages with eight duck for each treatment according to average body weight.They were fed low protein diets (17.65%) with 0.41%,0.48%,0.55%,0.62% or 0.69% threonine from 1 to 21 days of age,respectively.The results showed that threonine supplementation in low protein diets improved body weight,weight gain,feed intake,and breast muscle percentage,and reduced the ratio of feed to gain (P<0.01).Threonine supplementation in low protein diets had no influence on thigh muscle percentage,and the activity of ALT and AST,and the contents of TP,ALB,GLB and GLU in serum (P>0.05),but reduced the contents of CHO,TG,HDLC and LDLC in serum (P<0.05).The evaluated threonine requirement in low protein diets based on linear broken-line regression with weight,weight gain,feed intake,ratio of feed to gain,and breast muscle percentage were 0.594%,0.594%,0.595%,0.513% and 0.607%,respectively.In summary,the optimal dietary threonine levels would be 0.607% for Pekin ducks fed low protein diets from 1 to 21 days of age.Although which failed to support equal growth performance to that of high protein diets,it was possible to reduce nitrogen emissions.     

低蛋白质日粮中添加苏氨酸对北京鸭生长性能和血浆生化指标的影响

本试验采用单因素完全随机试验设计,通过测定不同日粮苏氨酸水平对1~21日龄北京鸭生长性能、屠宰性能和血浆生化指标的影响,研究低蛋白质日粮北京鸭苏氨酸需要量。240只1日龄雄性北京鸭按体重随机分为5个处理,每个处理6个重复,每个重复8只北京鸭,分别饲喂苏氨酸水平为0.41%、0.48%、0.55%、0.62%和0.69%的低蛋白质（17.65%）日粮,试验期为1~21日龄。结果表明,低蛋白质日粮中添加苏氨酸可以提高北京鸭体重、日增重、采食量和胸肌率（P<0.01）,降低料重比（P<0.01）。低蛋白质日粮中添加苏氨酸对北京鸭腿肌率,血浆ALT和AST活性,以及TP、ALB、GLB和GLU含量均无显著影响（P>0.05）,但是降低了血浆CHO、TG、HDLC和LDLC含量（P<0.05）。用直线-断线回归模型以体重、日增重、采食量、料重比和胸肌率为指标,拟合1~21日龄北京鸭苏氨酸需要量分别为0.594%、0.594%、0.595%、0.513%和0.607%。综合试验结果,当日粮蛋白质水平为17.65%时,1~21日龄北京鸭苏氨酸需要量为0.607%,此时,虽不能满足北京鸭的最大生长性能,但可以降低氮排放。     

断喙应激对雏鸡胸腺细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响

为研究断喙应激对雏鸡胸腺细胞凋亡及相关凋亡蛋白表达的影响,采用电子显微镜技术、流式细胞术和免疫组织化学技术分析断喙对鸡胸腺淋巴细胞的细胞增殖、分化、凋亡及相关凋亡蛋白(Bcl-2和Bax)表达的影响.结果表明:采用电子显微镜技术观察到断喙对胸腺淋巴细胞产生明显的影响,断喙组胸腺细胞内可看到细胞核明显的应激反应,细胞核凝集,较致密,部分细胞核即将溶解,并出现一定数量的凋亡和坏死细胞;流式细胞仪检测表明对照组和断喙组的胸腺内淋巴细胞都是以G1期为主,但断喙组G1期淋巴细胞数量比试验组高;对照组和断喙组胸腺淋巴细胞凋亡率在断喙后5d时差异显著(P＜0.05);免疫组化结果表明断喙应激没有影响Bcl-2和Bax蛋白在免疫器官内的表达部位;但有降低Bcl 2在胸腺细胞内表达量的趋势;有提高Bax在胸腺细胞内表达量的趋势.结果表明断喙应激促进了雏鸡胸腺淋巴细胞凋亡.     

鸭瘟病毒胸苷激酶基因的原核表达及其蛋白间接ELISA检测方法的建立

本研究旨在以表达纯化的鸭瘟病毒胸苷激酶(thymidine kinase,TK)重组蛋白作为包被抗原,建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。根据GenBank上收录的鸭瘟病毒TK基因序列设计出1对引物,采用PCR扩增出鸭瘟病毒TK基因。将TK基因与原核表达载体pET-32a连接,通过PCR、双酶切和测序鉴定,将阳性重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达。采用切胶纯化的方法纯化蛋白,Western blotting分析鉴定表达产物。用纯化的TK重组蛋白作为包被抗原,并优化其他条件,最终建立检测鸭瘟病毒抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组质粒构建成功,经Western blotting检测得到目的蛋白,TK重组蛋白能被阳性血清识别,说明该重组蛋白具有较好的抗原性。确定了最佳反应条件:酶标二抗的最佳稀释度为1:200,最佳抗原、抗体的稀释度分别为1:400和1:200,抗原抗体作用时间为60 min,最佳封闭液为5% BSA,最佳封闭时间为60 min,最佳显色时间为10 min。结果表明,该方法具有良好的稳定性及较高的敏感性,为鸭瘟的检疫、监测和防制工作提供了一种有效的手段。