基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

传染性囊病病毒CJ801 VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０、ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７４％、９７６％和９６９％，与变异株Ａ、Ｅ、ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６５％、９６３％和９６７％。而与Ⅱ型毒株的同源性只有８１％左右。从遗传进化树上看，ＣＪ８０１处于标准Ⅰ型毒株和变异株之间。根据ｃＤＮＡ序列推导出蛋白质序列，比较蛋白质序列发现，ＣＪ８０１与Ⅰ型ＩＢＤＶ毒株的同源性均在９６％以上，其中与５２／７０的同源性最高，为９８２％。ＣＪ８０１ＶＰ２高可变区的七肽区（Ｓ－Ｗ－Ｓ－Ａ－Ｓ－Ｇ－Ｓ）未发生变化。以上结果说明ＣＪ８０１为ＩＢＤＶⅠ型强毒株。另外，ＣＪ８０１和所有ＩＢＤＶ强毒株在ＶＰ２的２５３、２７９和２８４位上的氨基酸均相同，分别为Ｑ、Ｄ和Ａ；而ＣＪ８０１的细胞适应株ＣＪ８０１ＢＫＦ和所有弱毒株一样，其相应位置的氨基酸分别为Ｈ、Ｎ和Ｔ。这３个氨基酸可能和ＩＢＤＶ的毒力有关。     

鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清Ⅱ型Ｚ_４毒株５００个空斑形成单位（ＰＦＵ）与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ_（１２６）毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病（ＭＤ）二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ＿（１２６）二价疫苗，Ｚ＿４，３０１Ｂ／１和ＦＣ_（１２６）３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒Ｍｄ＿５毒株（ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ_５）攻击。结果表明：Ｚ_４＋ＦＣ_（１２６）和３０１Ｂ／１＋ＦＣ_（１２６）２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能给免疫鸡提供对ｖｖＭＤＶ－Ｍｄ＿５毒株攻击的有效保护力。     

传染性法氏囊病病毒dsRNA核酸提取

用免疫沉淀法从感染鸡法氏囊组织中分离传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），用差速离心法从感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）中分离ＩＢＤＶ，再从分离的ＩＢＤＶ中抽提ｄｓＲＮＡ。在ｄｓＲＮＡ提取物受ＤＮＡ降解产物影响时，可用ＤＮａｓｅⅠ消化去除，核酸再经琼脂糖凝胶电泳纯化。     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

鸡传染性支气管炎病毒血凝性的研究

用中国和澳大利亚分离的Ａ型魏氏梭菌培养液、Ⅰ型卵磷酯酶Ｃ和胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），制备的血凝抗原能凝集鸡红细胞，为鸡传染性支气管炎的诊断提供了方法。对鸡传染性支气管炎Ｍ（４１）、Ｈ（１２０）、Ｈ（５２）、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ、ＧＩＢＶ等７个毒株进行了血凝性的比较，以Ｈ（１２０）毒株血凝价最高，其次是Ｍ（４１）、ＧＩＢＶ、Ｇｒａｙ，而Ｈ（５２）、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ等毒株血凝性低或无血凝性。作者还对影响鸡传染性支气管炎病毒血凝试验的各种因素进行了研究。     

马立克氏病毒Z_4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ＿４毒株第１０代（Ｚ＿４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代全第３０代（Ｚ＿４－３０），Ｚ＿４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化。分别以Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０，Ｚ＿４－２５和Ｚ＿４－３０细胞结合毒作单价疫苗，将Ｚ＿４－１１，Ｚ＿４－２０和Ｚ＿４－３０细胞结合毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒ＧＡ株攻击，进行免疫效力试验。结果表明，Ｚ＿４毒株４个代次单价苗之间以及３个代次毒分别与Ｆ＿（Ｃ１２６）毒株组成的二价疫苗之间免疫效力无显著差异。表明Ｚ＿４毒株在ＣＥＦ单层上从第１０代连续传至第３０代，仍然保持其原有的培养特性和免疫原性。     

鸡传染性囊病二价活疫苗最佳配比试验

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗毒株最佳配比试验，将ＢＪ８３６毒株与ＢＫ９１２毒株按病毒含量分别配成ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ５种不同配比疫苗，免疫１４日龄ＳＰＦ雏鸡，免疫后１４天进行ＩＢＤＶＩ型强毒ＣＪ８０１和变异株强毒１０８４Ａ的攻击。结果表明：ＢＪ８３６与ＢＫ９１２为ｅ配比值疫苗对ＣＪ８０１或１０８４Ａ毒株的攻击保护率达９０％以上，表现出最好的免疫攻击保护效果。该毒株配比可作为研制该二价活疫     

IBDV超强毒HZ株VP2基因的克隆和真核表达质粒的构建

利用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,扩增克隆传染性法低囊病病毒超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）ＨＺ株ＶＰ２基因,并ＶＰ２基因进行全序列测定、序列分析和聚类分析,同时将ＶＰ２基因与真核表达载体ｐｃＮＤＡ３相连接。结果克隆到ＶＰ２基因全序列长１３５６ｂｐ,分析表明ＨＺ株与欧洲超强毒株ＵＫ６６１高度相似,同时将ＶＰ２基因正向插入ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游,得到了ＶＰ２基因的真核表达质粒。为ＩＢＤＶ分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。     

传染性囊病病毒CJ801VP2基因cDNA的序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ从传染性囊病病毒ＣＪ８０１的第１４代囊毒中扩增编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ基因片断，长度为１５００ｂｐ，，并对该片断进行了ＤＮＡ序列分析。结果表明，ＣＪ８０１与ＩＢＤＶ标准Ⅰ型毒株５２／７０，ＳＴＣ和Ｃｕｌ的同源性最高，分别为９７．４％，９７．６％和９６．９％，与变异株，Ａ，Ｅ，ＧＬＳ的同源性稍低，分别为９６．５％，９６．３和９６．７％。     

鸡马立克氏病二价苗对超强毒攻击的保护试验

将鸡马立克氏病毒血清Ⅱ型Ｚ４毒株５００个空斑形成单位与ＭＤＶ血清Ⅲ型ＦＣ１２６毒株１０００ＰＦＵ组成鸡马立克氏病二价疫苗，免疫对ＭＤ高度易感的Ｐ系ＳＰＦ白来航鸡，设３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６二价疫苗，Ｚ４，３０１Ｂ／１和ＦＣ１２６３种单价疫苗免疫组做对照，以ＭＤＶ超强毒ＭＤ５毒株攻击，结果表明：Ｚ４＋ＦＣ１２６和３０１Ｂ／１＋ＦＣ１２６２种二价疫苗均能给免疫鸡提供较强的免疫效力，而３种单价疫苗则不能     

传染性法氏囊病病毒超强毒株致弱的分子生物学特征

为了探索传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）超强毒株致弱的分子特征变化,采用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从超强毒（ｖｖＩＢＤＶ）及其不同代次细胞传代致弱毒中扩增到编码ＶＰ２蛋白的ｃＤＮＡ高变区基因,并对其序列测定。将ｖｖＩＢＤＶ及其致弱毒株ＶＰ２高变区的氨基酸与其它血清Ⅰ型毒株比较,发现ｖｖＩＢＤＶ与其致弱毒株在ＶＰ２高变区的２２２、２４２、２５３、２５６、２７１、２７９、２８４、２９４、２９９和３００位氨基酸发     

传染性法氏囊病病毒的PCR引物设计与Internet检索分析

研究了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ａ片断的ｃＤＮＡ的结构,并使用ＰｒｉｍｅｒＤｅｓｉｇｎ引物设计软件,在ＶＰ５和ＶＰ２的重叠基因区设计了一对引物,各种ＩＢＤＶ毒株在此部位有非常高的同源性,在对引物进行Ｉｎｔｅｒｎｅｔ检索中得到了证实。经过对４种ＩＢＤＶ的疫苗标准毒株,１种野毒株,１例病鸡标本试检测,验证引物设计符合要求,具有良好的适应性和较高的灵敏度。     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡,免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价,并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外,还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率;（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产     

减蛋综合征贵州分离毒全基因组探针的制备及检测

为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒（ＥＤＳ）贵州分离毒株ＨＳ－１中提纯病毒ＤＮＡ后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ发生反应,只与３株ＥＤＳ病毒（国际标准毒ＡＶ－１２７、贵州分离毒ＨＳ－１、南京分离毒（ＧＣ２）ＤＮＡ呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出３０ｐｇ的同源ＤＮＡ,具有较强的灵敏度     

用PCR、斑点杂交及间接免疫荧光试验诊断鸡传染性贫血的初步研究

利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针, 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性,阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增, 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）, 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性, 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明, 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。     

马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术,从马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ） Ｃ Ｖ Ｉ９８８／ Ｃ 株感染的鸡胚成纤维细胞（ Ｃ Ｅ Ｆ）基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增出含起始密码子的 Ｍ Ｄ Ｖ ｐｐ ３８ 基因同源物编码序列。在以 Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ （ Ｄｉｇ．）标记的 ｐｐ３８ 基因作为探针,在 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段。将该 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增片段在 Ｂａｍ ＨⅠ和 ＰｓｔⅠ位点克隆进 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体,酶切分析筛选到含 ｐｐ３８ 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 ｐｐ ３８ 基因同源物克隆。     

辣（甜）椒从苗期到成株期对黄瓜花叶病毒（泰国分离物）抗性评价

评价１４个来自中国和亚洲蔬菜研究与发展中心泰国区域中心（ＡＲＣ／ＡＶＲＤＣ）的辣（甜）椒品种在苗期和成株期对黄瓜花叶病毒（泰国分离物）的抗性，用ＤＡＣ－ＥＬＩＳＡ检测病毒，苗期，ＶＣ１６ａ表现高抗，其余１３个辣（甜）椒品种病率的６６．７％～１００％，均归为感病品种，成株期，“ＶＣ１６ａ”和“苏椒１４号”２个辣椒品种表现抗病，病率垃为８．３３％，“黄椒２号”，“Ｂａｎｇｃｈａｎｇ”及“苏椒５号”表现     

猪瘟病毒石站株NS4B基因的序列测定及分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，利用２对此物，从猪瘟病毒（ＣＳＦＶ）强毒石门株感染的猪血中成功扩增了ＮＳ４Ｂ基因，片段大小分别为７５７ｂｐ和７７４ｂｐ。克隆后经酶切鉴定，自动测序和序列分析，结果显示该基因较保守，与其他猪瘟病毒毒株均有很同的同源性，与同 ＢＶＤＶＳＤ－１株和ＮＡＤＬ株也有较高的同源性。     

ELISA检测BVD－MDV抗体

ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤ－ＭＤＶ抗体王新华，刘守仁，张荣兴（新疆农垦科学院，石河子，８３２０００）（中国科学院上海细胞所）自１９８０年国内首次报道牛病毒性腹泻验（ＥＬＩＳＡ）检测ＢＶＤ－ＭＤＶ抗体，以确定粘膜病（ＢＶＤ－ＭＤ）以来，已有许多地区在小鼠免疫...