抗犬细小病毒IgY的制备及其特性

用犬细小病毒(CPV)灭活抗原4次免疫SPF产蛋鸡,PEG沉淀法制备蛋黄抗体(IgY),IgY产量达到56mg/枚鸡蛋,纯度达到88%。Western blot分析表明,IgY抗体与CPV主要蛋白均发生反应。首次免疫后7周,IgY的ELISA抗体滴度达到1∶512 000,中和效价达到1∶6 400,稳定的抗体水平可持续到43周。本研究为IgY应用于犬细小病毒病的免疫治疗和诊断奠定了基础。     

重组白细胞介素-2提高口蹄疫疫苗免疫效果的试验

本试验观察了重组IL-2对经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗免疫效果的影响。其中对经产母猪的试验结果显示,重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫57天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶3018.1,而不注射重组IL-2的对照组平均间接血凝抗体滴度1∶1955.6,两组中所有抗体滴度均大于1∶64;对育成母猪的试验显示类似结果:重组IL-2和口蹄疫疫苗一起免疫55天后平均间接血凝抗体滴度可以达到1∶1361.8,且抗体滴度均大于1∶64,而对照组平均抗体滴度为1∶855.4,且其中抗体滴度小于1∶64的占7.1%。说明重组IL-2可以显著提高经产母猪和育成母猪口蹄疫疫苗的抗体滴度水平,同时也可提高育成母猪口蹄疫抗体整齐度。     

5种塞内卡病毒灭活疫苗佐剂的比较研究

为研究比较5种塞内卡病毒疫苗佐剂,分别用4种自主研发佐剂和进口ISA206佐剂配制塞内卡病毒灭活疫苗,检测疫苗的理化性质、安全性及免疫效力,并对检测结果进行对比分析。结果显示,进口ISA206佐剂疫苗黏度为43.02 cP,自主研发佐剂疫苗黏度均在27.88 cP以下,其他理化性质无差异;5批疫苗安全性试验均未见明显异常;5批疫苗免疫动物后均可诱导机体产生中和抗体,二免后14 d抗体滴度在2¹¹以上,4批自主研发佐剂疫苗免疫组抗体滴度水平高于进口ISA206佐剂疫苗约1个滴度,攻毒保护结果均在4/5以上,2批自主研发佐剂疫苗免疫组保护率可达5/5。结果表明,用4种自主研发佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗质量不低于用进口ISA206佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗。     

马传贫病毒弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体变化规律研究

为研究马传贫病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体的动态变化规律,本研究通过将表达EIAV囊膜蛋白重组质粒(pcDNA-env),与表达EIAV主要结构基因gag-pol的包装质粒(pUK-gag-pol)、表达荧光素酶的转移载体(pONY8.1)共转染293T细胞,制备了EIAV假病毒粒子(EIAV-Env)。在此基础上,利用该假病毒对2匹EIAV疫苗免疫马在免疫后6个月内不同时间点的中和抗体进行检测。即将EIAV疫苗免疫马血清通过连续4倍稀释,与EIAV-Env共孵育1 h后接种ELR1-293T细胞,36 h后通过检测细胞内荧光酶活性计算不同血清样品的中和抗体滴度。结果显示,EIAV疫苗免疫马血清可以特异性地中和EIAV-Env。EIAV疫苗免疫马后,随着时间的增加其体内中和抗体滴度逐渐升高,在6个月时能够达到最高值,这提示中和抗体可能与EIAV疫苗体液免疫成熟相关。本研究为进一步深入EIAV及其疫苗诱导体液免疫保护机制的研究提供了相关的实验依据。     

口蹄疫A型油佐剂和leo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究

用实验室配制的口蹄疫油佐剂和leo佐剂A型弱毒灭活疫苗各免疫6月龄健康敏感牛（乳鼠中和抗体滴度小于1：4）5头，免疫后每月采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验检测免疫牛血清中的口蹄疫A型中和抗体的产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，口蹄疫弱毒灭活疫苗免疫牛，可以产生高滴度的血清中和抗体，免疫牛血清中和抗体效价均在免疫后1个月左右达到高峰。油佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较高，但下降比较迅速；leo佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较低，但下降比较平缓。     

重组白细胞介素-2提高PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果试验

观察了重组白细胞介素-2（IL-2）对健康成年猪和PRRS抗体阳性猪的猪瘟疫苗免疫效果的影响。结果显示,重组IL-2和猪瘟疫苗一起免疫健康猪,20d后间接血凝抗体滴度达到1∶64的猪的比例为87.5％,而不注射IL-2的对照组抗体滴度可以达到这一水平的比例只有25％。给经2次猪瘟疫苗免疫但抗体滴度在1∶32以下的PRRS抗体阳性猪单独注射IL-2,20d后,注射前检测不到抗体的猪都检测到了抗体,注射前抗体滴度在1∶8～1∶16之间的猪的抗体滴度提高到1∶32～1∶64。再次用猪瘟疫苗和IL-2共同免疫,可使抗体滴度提高4倍以上。而不注射的对照组抗体滴度则略有下降。说明重组IL-2可以减轻PRRS感染所引起的免疫抑制,提高猪瘟疫苗的免疫效果。     

PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后特异性抗体的中和活性分析

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。     

兔出血症不同佐剂灭活疫苗的制备及免疫效果比较

本试验制备了3种兔出血症灭活苗,经对试验兔进行免疫对比试验,以1mL为免疫剂量,7d后检测,发现3种疫苗均可产生抗体。组织灭活苗、蜂胶佐剂苗、铝胶佐剂苗7d的抗体滴度分别为27.1、27.2、26.5;14d的抗体滴度分别为27.9、29.0、28.0;45d的抗体滴度分别为26.8、28.5、27.5;85d的抗体滴度分别为25.5、27.2、26.2;145d的抗体滴度普遍下降。在免疫攻毒试验中,第7、15、50、90d攻毒时,3种疫苗的保护率均为100%,对照组全部死亡;150d攻毒时,组织灭活苗、蜂胶佐剂苗、铝胶佐剂苗的保护率分别为25%、75%、50%。以上结果表明,3种疫苗都有很好的免疫效果,其中以蜂胶佐剂苗的抗体滴度更高,免疫保护期更长。     

猫瘟热诊断及免疫的研究 Ⅱ.猫源毒细胞培养灭活苗免疫试验

用猫泛白细胞减少症病毒的FNF-8株制备的甲醛灭活和BEI灭活细胞苗免疫接种猫、貂和犬是安全的;犬能获得4/4保护;猫血清HI抗体增长4～7个滴度,且能持续到175天以上;貂一次接种后的血清HI抗体能增长1～4个滴度。BEI灭活苗的免疫效果优于甲醛灭活苗。间隔2周以上的两次接种比一次接种的血清HI抗体增长幅度大而显著。灭活苗在4℃冰箱至少可保存6～12个月。     

鸭坦布苏病毒冻干卵黄抗体的研制

将鸭坦布苏病毒尿囊液浓缩灭活后制备灭活疫苗,依据制定的免疫程序免疫产蛋鸡,第三次免疫后14天,抗体中和效价≥1∶256,收集高免鸡蛋制备冻干卵黄抗体,并对制备的冻干卵黄抗体进行质量评价。结果表明,制备的冻干卵黄抗体中和效价为1∶90,能有效中和鸭坦布苏病毒,对鸭坦布苏病毒的致病性有较好的预防作用,为鸭坦布苏病毒的预防和治疗提供了一种可行的途径。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。     

猪伪狂犬病不同佐剂灭活疫苗对兔免疫原性初探

采用分离鉴定的猪伪狂犬病毒（HB—J株）以4种佐剂研制成4批灭活疫苗,以研究其对兔的免疫原性。疫苗分别免疫PRV抗体阴性兔后,用乳胶凝集试验法（LAT）和中和试验法（SNT）对试验兔进行血清抗体检测;于免疫后21、28d对试验兔分别进行攻毒,观察兔保护情况。试验结果表明,兔对不同佐剂的猪伪狂犬病疫苗均产生良好的免疫应答反应,且当兔免疫后血清凝集价≥1：32或血清抗体中和指数≥1479或中和价≥1：16时,可以抵抗10LD50剂量强毒的攻击;当兔免疫后血清凝集价≥1：64或血清抗体中和指数≥2187或中和价≥1：32时,可以抵抗100LD50剂量强毒的攻击;4种佐剂灭活疫苗均具有良好的免疫效果。     

H5亚型禽流感灭活疫苗免疫后鸡血凝抑制抗体动态变化观察

选择国家指定的两个厂家生产的禽流感灭活疫苗(H5亚型,N28株)进行无母源抗体来航鸡的免疫试验.通过鸡免疫后血凝抑制(HI)抗体的动态性检测,对两个疫苗的免疫效果进行了观察.研究结果表明,两个疫苗均具有良好的免疫效果,但也存在一定程度的差异;加强免疫可以明显提高抗体水平,延长免疫保护时间.     

小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究

为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。     

膜分离法纯化浓缩猪伪狂犬病疫苗毒的效果

本研究使用不同孔径的陶瓷(有机)膜过滤器,对不合格的猪伪狂犬病毒细胞收获液(病毒含量≤104TCID50/mL)滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液;然后对纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液分别进行杂蛋白去除率检验与无菌检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验;将检验合格的纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液添加保护剂冻干,并对纯化浓缩的猪伪狂犬病冻干活疫苗进行以上各项检验,以及进行免疫猪体内抗体消长变化的检测。结果表明:纯化的猪伪狂犬病疫苗杂蛋白去除率平均达到68.3%以上,病毒含量≥105TCID50/mL,效力检验合格;免疫猪体内抗猪伪狂犬病毒抗体增长幅度比同时期未纯化的常规疫苗显著,其中免疫至84 d时中和抗体效价平均高达40.35稀释倍数左右,比常规疫苗中和抗体效价平均高出14.22稀释倍数。此项研究为畜禽疫苗的纯化提供一定的参考。     

一种鸡抗猪丁型冠状病毒阳性血清的制备方法

为研究能否用鸡制备出猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清。将PDCoV用BEI灭活制备抗原,抗原与矿物油佐剂乳化制备疫苗,疫苗多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价、将血清用于IFA检测PDCoV。血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4免后14日的中和效价平均值为1300;中和效价1000左右的血清混合作为阳性血清,1000倍稀释可用于IFA检测PDCoV。实验说明,用鸡制备PDCoV阳性血清的方法成立,制备的阳性血清可用于中和实验、IFA检测PDCoV。     

鸡黄病毒灭活疫苗的研制及免疫效果研究

鸡黄病毒FQ—C1株经SPF鸡胚连续传40代后,检测其尿囊液毒的ELD50达到1×10^-4.33／0．1mL。将该病毒第40代SPF鸡胚液毒灭活后制备成油乳剂灭活疫苗。SPF雏鸡和蛋鸡安全性试验表明,该疫苗的安全性好,无不良影响。以该疫苗一次单剂量（1mI／只）免疫开产蛋鸡,28d后攻以鸡黄病毒强毒测定疫苗的保护效果,结果显示疫苗免疫组较未免疫组蛋鸡的产蛋率高出75．8％,产蛋保护率达93．2％以上。试验表明,本研究制备的鸡黄病毒灭活疫苗安全性好,且具有良好的免疫原性,免疫后可有效抵抗鸡黄病毒所致的产蛋骤降。     

鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联灭活疫苗IB部分效力试验研究

采用《进口兽药质量标准》中传染性支气管炎灭活疫苗效力检验方法,对ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗IB部分进行了效力检验。先用IBH120活疫苗作基础免疫,免疫后3～4周采血,然后用四联苗加强免疫,四联苗免疫后3～4周采血,将二次血清分别作IBHI试验。结果显示,IBH120活疫苗免后3～4周,其IBHI效价为3．6～4．610g2（1：12—1：24）,用四联苗加强免疫3～4周后,IBHI达6．2—8．610g2（1：74～1：388）,四联苗免后的IBm抗体滴度比免前提高了4．9～26倍,均大于3倍的标准。试验证明,该方法用于四联苗内IB部分效力检验是可行的。     

Priming of multiple T cell subsets by modified-live and inactivated bovine respiratory syncytial virus vaccines

T cell activity is a critical component of immunity to bovine respiratory syncytial virus (BRSV). We tested the effects of immunization by modified-live and inactivated BRSV vaccines on cell-mediated and humoral immunity in young calves. The two forms of vaccine stimulated similar serum neutralizing antibody production, although the early kinetics of those responses differed. CD4+, CD8+, and gammadelta T cells were analyzed before and after immunization for BRSV-specific in vitro recall responses, as evaluated by CD25 upregulation measured by flow cytometry. Modified-live virus (MLV) primed each of the three subsets for statistically significant in vitro responses to antigen. Inactivated vaccine also primed each T cell population for significant antigen-driven CD25 upregulation, including responses by CD4+ and gammadelta T cells that were stronger and longer-lasting than those primed by MLV. Monoclonal antibody was used in additional assays to block MHC class I during incubation of BRSV antigen with peripheral blood mononuclear cells from an animal in the inactivated vaccine group. The recall response by CD8+ T cells was more inhibited by this treatment than the other subsets, further suggesting that the inactivated vaccine had primed antigen-specific CD8+ T cells. In summary, the data indicate that balanced BRSV-specific T cell responses can be induced by inactivated, as well as modified-live, conventional vaccines, which may implicate an alternative pathway of MHC class I antigen presentation.