分泌抗细粒棘球蚴原头节可溶性抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与以羊源细粒棘球蚴原头节可溶性抗原免疫的Ｂａｌｌ／ｃ鼠脾细胞融合，经克隆和筛选后获得８株分泌抗ＳＰＡ的杂交瘤细胞株，即３Ａ４，１ＩＣ２，２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３，３Ｅ６，３Ｆ１０和２Ｃ２。亚类鉴定为ＩｇＧ１（３Ａ４，３Ｅ６，１Ｃ２，３Ｆ１０和３Ｃ２），ＩｇＧ２ｂ（２Ｃ２），ＩｇＧ３（２Ｅ３），ＩｇＧ总（２Ｂ３）。免疫双扩散法显示２Ｃ２腹水及２Ｂ３，２Ｃ２，２Ｅ３培养上清粗提物与     

细粒棘球绦虫基因型与抗原研究进展

细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus,坛）是一种重要的人兽共惠寄生虫。现已报道细粒棘球绦虫有10个基因型（G1～G10）,我国仅发现G1和G6。细粒棘球绦虫六钩蚴阶段的Eg95,原头蚴阶段的EgFABP,成虫阶段的EgM9和Eg31分别被认为是最有前途的用于免疫保护的抗原。其中Eg95基因工程疫苗已经商业化生产,对羊免疫保护率达到了95％以上。     

细粒棘球绦虫六钩蚴EG95抗原基因的克隆及原核表达

利用RT—PCR从激活的细粒棘球绦虫六钩蚴中扩增了EG95 cDNA，并亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1上，转化至大肠埃希氏菌BL21，用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白质。结果表明，从六钩蚴中克隆到了EG95 cDNA，序列长度为481bp，包括471bp的开放阅读框，与新西兰株EG95抗原基因序列完全一致；SDS-PAGE电泳结果显示，重组表达质粒产生了约42ku的目的带，其中EG95蛋白质的分子质量约为15．2ku，与预期结果一致；Western-blotting试验检测表明，融合表达产物可与囊性包虫病人血清发生反应。试验结果提示，EG95基因高度保守，所表达的EG95蛋白作为抗原疫苗具有广泛的适用性。     

细粒棘球绦虫六钩蚴静脉感染小鼠模型动物的建立

利用绵羊－犬源细粒棘球绦虫的六钩蚴尾静脉注射感染昆明小鼠10只，每只接种六钩蚴600枚。结果，在接种后62－83d内小鼠全部死亡，剖检死亡小鼠其荷囊量为2－40个。     

细粒棘球蚴细胞系（13G—5）细胞代谢抗原的免疫性和反应原性

应用培育成功的人源细粒棘球蚴细胞系（１３Ｇ－５）细胞的天然代谢抗原,接种昆明小鼠,于接种后第１４天给免疫小鼠接种人源细粒棘球蚴原头节约１０００个,于２００天剖检观察有无包囊形成,病理切片鉴定;并用该抗原作为诊断怕,使用间接血凝（ＩＨＡ）、琼脂扩散（ＡＧＤ）试验,检测临床确诊的细粒棘球蚴病人血清,以多房棘球细病人血清、细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清作为对照。结果表明,该抗原能使６０％的小鼠获工抗细粒棘     

分泌抗细粒棘球蚴原头蚴抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用感染包虫的绵羊肝包囊中的活原头蚴腹腔接种ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，８个月后取鼠脾细胞与Ｓｐ２／ｏ骨髓瘤细胞融合。经ＩＨＡ筛选，获得１４个阳性杂交瘤细胞株，对其中３株进行了克隆和进一步研究。结果表明，５Ｃ５与细颈囊尾蚴、脑包虫和肝片吸虫抗原均不发生交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：２０４８，属ＩｇＧ２ｂ亚类：３Ｃ５和６Ｃ４与细颈囊尾蚴和脑包虫有轻度交叉反应，腹水抗体的ＩＨＡ效价为１：１２８，均属ＩｇＭ类。     

细粒棘球蚴病诊断抗原研究进展

细粒棘球蚴病严重危害人畜健康,给畜牧业造成巨大经济损失。该病的早期诊断有很重要的意义。囊液抗原、原头节抗原和囊壁抗原等天然抗原是用于该病诊断的主要抗原,但存在敏感性差、特异性弱等缺点。近年来,人们合成了AgB、Ag5、EpC1、EgTPx等重组抗原,将其用于诊断,并获得了较高的敏感性和特异性。论文将用于诊断的天然抗原和重组抗原进行了综述。     

细粒棘球绦虫抗原B的研究进展

细粒棘球绦虫抗原B(AgB)是血清学诊断棘球蚴病最重要的抗原,也是目前研究最多的抗原之一。深入研究抗原B对棘球蚴病的血清学诊断、流行病学研究、综合防控和疫苗的研究开发具有重要的意义。文章针对近年来关于抗原B的分子生物学特征、免疫学特性及在人和动物等中间宿主的血清学诊断方面的研究进展进行综述。     

细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞代谢抗原的免疫原性和反应原性

应用培育成功的人源细粒棘球蚴细胞系(13G-5)细胞的天然代谢抗原,接种昆明小鼠,于接种后第14天给免疫小鼠接种人源细粒棘球蚴原头节约1 000 个,于200 d 剖检观察有无包囊形成,病理切片鉴定;并用该抗原作为诊断抗原,使用间接血凝(IHA)、琼脂扩散(AGD)试验,检测临床确诊的细粒棘球蚴病人血清。以多房棘球蚴病人血清、细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清作为对照。结果表明,该抗原能使60% 的小鼠获得完全抵抗细粒棘球蚴原头节攻击的能力,未完全获得保护的小鼠形成包囊的数量、大小较对照组明显减少,且为不育囊;使用该抗原IHA 检测31 份血清,阳性24 份,阳性率77.42% ,AGD检测30 份血清,阳性13 份,阳性率43.33% ,2 种方法对多房棘球蚴病人血清和细颈囊尾蚴羊血清及正常人血清不起反应。     

细粒棘球绦虫形态学观察

引言越来越多的资料表明,细粒棘球绦虫的不同虫株在形态学.发育史.对中间宿主的感染性、抗原组成.免疫诊断和对药物的敏感性等方面均具有其独特性.目前.世界上许多国家对本国境内的棘球绦虫形态学作了详细的报道.然而,我国目前对该病的研究主要集中在免疫诊断和化疗方面。而对本病     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究——绵羊免疫后或感染后的抗体应答及细胞应答

绵羊用六钩蚴排泄分泌抗原(ES)，原头节ES抗原、原头节可溶性粗抗原，绵羊棘球蚴囊液(SHCF)或囊壁抗原免疫后，和攻击感染虫卵后，应用ELISA，酯酶染色法及瑞氏-姬拇萨染色法研究了血清抗体、T、B淋巴细胞、嗜酸性粗细胞及淋巴细胞的应答反应。初步结果表明，绵羊在感染细粒棘球绦虫虫卵后或抗原免疫后、攻击感染后都表现明显的血清抗体应答反应，T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞数量增加，免疫应答依不同的抗原而具有不同性质。     

细粒棘球蚴EG19抗原基因的克隆表达及重组蛋白反应原性研究

为研究细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)中的原头蚴特异性抗原Eg19蛋白的反应原性,根据Gen Bank中Eg19抗原基因c DNA序列设计特异性引物,以Eg头节总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,将PCR产物克隆到p MD19-T载体,测序验证后,将Eg19抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,构建p ET-Eg19原核表达载体,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。结果 Eg19 c DNA全长534个核苷酸,编码177个氨基酸,等电点为4.54。该多肽含有2个N端酰基化位点,1个PKC磷酸化位点,1个CKⅡ磷酸化位点,1个ATP/GTP结合位点基序A(P-loop);抗原表位区集中在20~93、96~146位;为亲水性蛋白。SDS-PAGE可以检测到35 k Da的蛋白特异性条带;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg19抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有较强的反应原性,为进一步利用Eg19抗原蛋白作为Eg感染诊断中的候选抗原奠定了前期基础。