用斑点ELISA和间接ELISA检测蓝舌病病毒抗体的比较

目前广泛应用免疫扩散(ID)试验检测蓝舌病毒(BTV)群特异抗体,但敏感性较差。Manning和Chen(1980)建立的ELISA检测BTV抗体有很高的敏感性。而斑点ELISA(DIA)是一种快速、简便的另一种酶免疫检测方法。其敏感性与ELISA     

全血与血清ELISA对雏鸡白痢抗体检测结果的比较

采用ＬＰＳ抗原对带白痢母源抗体的２０只雏鸡同时用全血与血清ＥＬＩＳＡ检测，结果二者的阴，阳性符合率均为１００％，且二者检出样品的ＯＤ值比较接近。     

全血与血清ELISA对雏鸡白痢抗体检测结果的比较

采用ＬＰＳ抗原对带白痢母源抗体的２０只雏鸡同时用全血与血清ＥＬＩＳＡ检测，结果二者的阴、阳性符合率均为１００％，且二者检出样品的ＯＤ值比较接近     

间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用猪肾传代细胞IBRS－2增殖猪伪狂犬病病毒（PRV）鄂A株，病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇（Mr20000）浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔，HRP村记撮的兔抗猪IgG，制备出高效价的酶标抗体，酶标抗体工作浓度为1：50000；经各种条件的选择，建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L，血清最佳稀释度为1：20，与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应，与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应；与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应；与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较，45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100％。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点，可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。     

用竞争ELISA检测火鸡冠状病毒抗体

火鸡冠状病毒感染是一种急性、高度传染性肠道疾病,1973年才正式定性本病,最近几年,火鸡冠状病毒已被确定为引起肠道疾病的重要瘸原。以前该病的血清学诊断主要应用间接荧光抗体试验,但该方法繁琐,操作复杂,不便推广应用。虽然也有特异性ELISA用于诊断,然而大量抗原的生产限制了     

间接ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究

比较不同ELISA包被抗原对禽霍乱免疫血清的检测结果,选择最佳的包被抗原建立禽霍乱血清抗体的间接ELISA检测方法.分别 使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全菌抗原作为包被抗原,应用间接ELISA方法检测 禽霍乱免疫血清,并对不同抗原建立的ELISA方法进行重复性试验.根据三种抗原对 免疫血清的检测结果以及重复性试验,发现全菌抗原的敏感度、特异性、稳定性均优于其他 两种抗原.全菌抗原作为ELISA包被抗原用于禽霍乱血清学检测具有敏感度高、特异性强、稳定性好的特点.     

间接ELISA检测犬瘟热血清抗体方法的建立

以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性较好,可用于犬瘟热血清抗体的定量和定性检测。     

应用间接ELISA检测血清中副结核分枝杆菌抗体

副结核病是由副结核分枝杆菌引起的反刍兽的慢性肠道疾病.本病的特征是病畜表现慢性卡他性肠炎,长期顽固性腹泻、消瘦,易造成患畜死亡.本病在世界广泛流行,以奶牛业和肉牛业发达的国家受害严重.我国于1953年首次报道此病.副结核分枝杆菌主要引起牛发病,幼牛易感,羊和骆驼也可发病.本病不易被人察觉,平时不会造成突如其来的损失,但感染地区畜群死亡率可达2%～10%,严重的达25%,而且难从畜群中根除,其对养牛业的损失常常超过某些传染病.     

禽流感抗体的间接ELISA检测

本试验建立了AIV抗原,检测AIV抗体的AI-ELISA方法。本试验应用单方阵滴定法确定了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测禽流感抗体的最适工作浓度、最适血清稀释倍数,建立了ELISA检测鸭血清抗体的程序,并提出以P/N(Positive/Negidive)确定阳性血清滴度的方法。经小批血清的实验检测表明此方法特异性较好,操作简便,适于大批鸭群抗体水平的检测,并为免疫监测提供了可靠的技术手段。     

猪鼻支原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立

猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5μg·mL~(-1);一抗的最佳稀释度为1∶100,作用时间为30min;二抗的最佳稀释浓度为1∶20 000,最佳作用时间为30min;显色时间为10min;阴阳性的判定值为0.27。交叉性试验结果显示,Vlp抗原与猪其他支原体阳性血清及猪常见传染病阳性血清均无交叉反应。在重现性试验中,批内及批间的变异系数均低于10%,证明重现性良好。利用所建立的方法对已知阴性及阳性样本进行检测,结果显示特异性和灵敏度均良好。最后,用建立的方法对人工感染后28d的猪血清和247份临床样品进行检测,感染猪血清抗体呈阳性,建立的Vlp-ELISA方法、吐温20膜蛋白-ELISA方法对不同猪群临床样品检测的阳性率趋势相同。综上所述,建立的Vlp-ELISA方法特异性、稳定性良好,可以广泛用于临床猪鼻支原体血清抗体检测,为该病的检测和防控提供了重要工具。     

检测新城疫病毒中和抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法的初步建立

鸡新城疫(ND)是由鸡新城疫病毒引起的急性传染病，是对养禽业危害最大的禽病之一。融合蛋白(F)是NDV的主要保护性抗原，对新城疫的免疫保护起着重要的作用。基因工程苗是防治ND的一种新型疫苗，本室在前期研究中，以282E4株鸡痘病毒为载体表达了NDV F40E8株的F基因，在SPF鸡上显示了较好的保护效力，但F蛋白激发机体产生的中和抗体用常规的HI试验无法测出抗体效价。     

间接ELISA法检测鸡新城疫抗体

应用醛化的鸡红细胞经吸附释放方法获得纯化的新城疫病毒(NDV),经triton X-100处理并反复冻融制备新城疫 ELISA抗原.应用抗鸡Ig轻链单抗1B7辣根过氧化物酶结合物建立了定量检测NDV抗体水平的ELISA方法.确立了将鸡血清100倍稀释检测ELISA效价(ET)的回归方程y=0.941 28 x 0.206 77,r=0.981 63,可用于定量测定.血凝抑制(HI)方法与ELISA方法的比较试验表明,ELISA法的敏感性是HI方法的3倍以上.应用建立的ELISA方法比较了卵黄、气管及胆汁中局部抗体与血清抗体的差异.     

检测牛乳κ-酪蛋白的间接竞争ELISA法与间接ELISA法比较

试验旨在建立一种快速简单检测牛乳κ-酪蛋白(κ-CN)含量的酶联免疫吸附(ELISA)方法,为解决牛乳蛋白掺假问题提供一定的技术支持。以牛乳κ-CN为包被抗原,以酶标抗体(HRP-IgG)为检测抗体分别建立间接竞争ELISA法和间接ELISA法,并对两种检测方法进行分析比较。结果表明:对于间接竞争ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为2.5μg/mL,线性范围为62.5~1 000.0ng/mL,变异系数2%,回收率在98.46%~101.68%;对于间接ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为1.56μg/mL,线性范围为0.098~3.125μg/mL,变异系数1%,回收率在99.10%~101.06%。比较两种检测方法,间接竞争ELISA法检测耗时较短,抗体应用量较少,而间接法不需要包被成本较高的目标标准蛋白,相关系数也较高,但其检测体系组成成分较多,且需包被待测样品,较难组成ELISA试剂盒体系,不宜用于现场检测。因此,大规模制备ELISA试剂盒体系用于快速检测蛋白含量时可采用间接竞争法,不仅抗体应用量少、节约成本且快速、简单,可更好地用于科研实践。     

ELISA间接法检测兔血清中抗牛血清白蛋白抗体

用牛血清白蛋白（BSA）免疫普通级试验兔（新西兰白兔）,获得高滴度的抗BSA血清。以系列含量的BSA溶液绘制标准曲线,测定兔血清中抗BSA抗体效价。结果表明：普通级试验兔BSA4次免疫后,兔血清中抗BSA抗体效价为1：9000。ELISA间接法敏感度高,优化了酶免疫反应条件,标准曲线线性范围内r=0．9965,可初步用于抗BSA抗体含量检测。     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法，用该法检测20份人工感染鸡血清样品，抗体阳性率为100％，康复期鸡群血清抗体阳性率为43％，人工接种弱毒疫苗65d和170d鸡群血清抗体的阳性率分别为60％、70％。经反复试验，确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件，即抗原包被浓度10．8μg／孔，待测血清最佳稀释度为1：100。     

用HI和ELISA方法检测SPF鸡血清和蛋黄中ND抗体的比较

分别用血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测42周和48周SPF鸡血清、以及同期SPF鸡蛋蛋黄中新城疫（ND）抗体。结果表明,两种方法检测的120份血清中均无ND抗体,呈阴性;120枚SPF鸡蛋蛋黄检测,ELISA方法检测结果全为阴性;HI方法检测结果25份阳性,差异较为明显。