银杏叶提取物对断奶仔猪免疫功能的调节作用

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪免疫功能的调节作用。【方法】将160头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组4个重复,每重复10头。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2、3、4组分别饲喂基础日粮中添加质量分数0.1%,0.2%或0.3%EGB的试验日粮。试验期为28d,分别于第14和28天采集血样,测定断奶仔猪的免疫功能指标。【结果】与对照组相比,日粮中添加质量分数0.2%或0.3%EGB可显著提高断奶仔猪血液红细胞数、淋巴细胞数、血红蛋白质量浓度和淋巴细胞百分率(P<0.05),促进血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和补体C3、C4的生成以及细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.2%或0.3%EGB可增强断奶仔猪的免疫功能。     

银杏叶提取物对肉仔鸡十二指肠黏膜免疫的调节作用

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对肉仔鸡十二指肠黏膜的免疫调节作用。【方法】将360只1日龄健康AA肉用母雏鸡随机分成5组,每组6个重复,其中1组为对照组,饲喂基础日粮;其余4组分别饲喂添加质量分数0.009%金霉素及0.15%,0.20%和0.25%EGB的日粮,试验期为42d。分别于21和42d取样,测定各组肉仔鸡十二指肠黏膜免疫球蛋白含量、黏膜免疫相关细胞数量和白细胞介素-2(IL-2)含量。【结果】日粮中添加质量分数0.20%,0.25%EGB可显著提高42日龄肉仔鸡十二指肠黏膜IgA、IgG、IgM含量(P<0.05),提高十二指肠上皮内淋巴细胞、肥大细胞、杯状细胞数量和IL-2含量(P<0.05),并且作用效果优于金霉素组(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.20%或0.25%EGB,可增强肉仔鸡十二指肠黏膜免疫功能。     

银杏叶提取物对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平的影响

【目的】研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平的影响,为银杏叶的开发应用提供依据。【方法】将160头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪按公母各半、体质量接近的原则,随机分为4组,每组4个重复,每个重复10头,分别饲喂添加质量分数0%,0.1%,0.2%和0.3%EGB的基础日粮,试验期为28 d,测定断奶仔猪生长性能、血清生化指标和激素水平。【结果】日粮中添加质量分数0.2%和0.3%EGB可显著提高断奶仔猪平均日增质量(P<0.05),降低料质量比(P<0.05);显著降低断奶仔猪血清尿素氮和血糖浓度(P<0.05),提高血清碱性磷酸酶活性和血清生长激素、三碘甲腺原氨酸水平(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.2%和0.3%EGB,可改善断奶仔猪血清生化指标,提高生长相关激素水平,促进仔猪生长。     

沙棘提取物对断奶仔猪消化机能的影响

选取28日龄长×大二元断奶仔猪24头,随机分两处理组,每个处理3个重复,每个重复4头,对照组饲喂基础日粮,试验组饲喂添加0.1%沙棘提取物的日粮,试验期28d。试验结束时测定胃、胰腺和小肠内容物的胃蛋白酶;胰腺和十二指肠的淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶;胃黏膜厚度、小肠各段绒毛高度和隐窝深度。结果表明,在饲料中添加0.1%沙棘提取物可显著提高断奶仔猪消化酶活性以及空肠和回肠的绒毛高度(P<0.05),并可改善断奶仔猪消化机能,缓解仔猪的断奶应激。     

饲粮添加丁酸梭菌对断奶仔猪肠道健康的影响

为评价饲粮中添加不同剂量的丁酸梭菌制剂对断奶仔猪生长性能、腹泻、肠道内微生物、肠道结构、血清指标和相关紧密连接蛋白mRNA水平表达的影响试验。试验采用单因子设计,选取(28±2)日龄、健康状况良好、平均体重为(7.26±0.42)kg的断奶仔猪(杜×长×大)16头,按完全随机区组设计分成两个处理,每个处理4个重复,每个重复2头仔猪,饲养于专用代谢笼中,试验期为28 d。阴性对照组饲粮不添加丁酸梭菌;试验组在基础饲粮添加丁酸梭菌制剂,浓度为1×105cfu·g-1。结果表明,与对照组相比,试验组显著提高空肠和回肠乳酸杆菌的数量。说明日粮中添加丁酸梭菌能显著提高断奶仔猪的生长性能,调节仔猪肠道的微生物菌群结构的平衡,增加断奶仔猪生长阶段肠道的绒毛高度,改善血清质量,促进肠黏膜结构的发育,从而改善肠黏膜屏障功能。     

角鲨烯对早期断奶仔猪空肠形态、黏膜通透性和抗氧化能力的影响

选取24头21日龄早期断奶的三元杂交(杜洛克猪×长白猪×大白猪)仔猪,随机分为A和B组,每组6个重复,每个重复2头仔猪.A组仔猪饲喂基础日粮,B组仔猪饲喂基础日粮+250 mg·kg~(-1)角鲨烯,预饲期3 d,正饲期21 d.饲养试验结束后,收集前腔静脉血,麻醉仔猪,屠宰收集空肠组织样本,研究角鲨烯对早期断奶仔猪空肠形态、黏膜通透性和抗氧化能力的影响.结果表明,在饲粮中添加250 mg·kg~(-1)角鲨烯可显著提高早期断奶仔猪空肠绒毛高度及绒毛高度与隐窝深度的比值(P<0.05),显著降低隐窝深度(P<0.05),显著降低血清和空肠组织中肠道损伤标识物的水平(P<0.05),显著降低空肠黏膜通透性(P<0.05),显著提高空肠组织的抗氧化能力及空肠紧密连接蛋白基因ZO-1、Occludin、Claudin mRNA的相对表达量(P<0.05).综上所述,在饲粮中添加角鲨烯具有改善早期断奶仔猪空肠形态,保护空肠黏膜并提高空肠组织的抗氧化能力,有效缓解了早期断奶应激引起仔猪空肠损伤.     

峨眉雪胆微丸对断奶仔猪免疫功能的影响

【目的】研究峨眉雪胆微丸对断奶仔猪免疫功能的影响。【方法】将96头"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组24头,分别饲喂基础日粮、基础日粮+硫酸粘杆菌素80mg/kg、基础日粮+峨眉雪胆微丸250mg/kg、基础日粮+峨眉雪胆微丸500mg/kg的试验日粮,试验期为21d,分别于饲喂后的第7,14和21天采集血样和肠黏膜,测定断奶仔猪的免疫功能指标,研究峨眉雪胆微丸对断奶仔猪免疫功能的影响。【结果】日粮中添加250mg/kg峨眉雪胆微丸可促进血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA的生成,显著提高补体C3、C4及免疫因子IL-6的质量浓度(P0.05),并可在一定程度上降低炎性因子IL-1β的分泌,提高十二指肠、回肠、盲肠的免疫球蛋白A(SIgA)分泌,其中对十二指肠、盲肠SIgA的分泌有显著促进作用(P0.05)。【结论】日粮中添加250mg/kg峨眉雪胆微丸可增强断奶仔猪的免疫功能。     

不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响

为探讨不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响,选取90头21日龄体质量[(6.85±0.25)kg)]相近的杜洛克×长白×大约克断奶仔猪,随机分为3组。对照组(CON)饲喂基础饲粮,优质蛋白源组(HP)在基础饲粮中添加优质蛋白原料(基础饲粮中的豆粕蛋白原料用发酵酶解豆粕、酵母提取物和小麦水解蛋白粉代替),优质蛋白源+肠道保护包组(HPP)在基础原料中添加优质蛋白原料和肠道保护包(主要成分为复合酸化剂、植物精油、复合益生菌组合)。试验期14 d。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测仔猪饲喂不同教槽料后,十二指肠、空肠、回肠、结肠黏膜TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10的基因表达量,回肠和结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达情况。结果显示,与CON组相比,仔猪断奶3 d时,HPP组十二指肠IL-1β及回肠IL-1β、Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量均显著升高(P0.05);仔猪断奶7 d时,HP组和HPP组空肠、回肠TNF-α、IL-10的基因表达量升高(P0.05),并且回肠Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量显著升高(P0.05);仔猪断奶14 d时,HPP组空肠TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10和回肠TGF-β的基因表达量显著升高(P0.05)。可见,断奶仔猪饲喂新型教槽料能够上调肠道黏膜免疫因子相关基因的表达量,增强早期断奶仔猪回肠和结肠黏膜中紧密连接蛋白相关基因的表达量,降低断奶应激对仔猪肠道造成的损害。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对断奶仔猪生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平的影响

[目的]本试验旨在通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)体内试验,根据仔猪血清细胞因子水平、肠黏膜sIgA水平及肠道免疫球蛋白mRNA相对表达量的变化,研究DON对断奶仔猪免疫机制的影响。[方法]选取30头21日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分为对照组、DON低剂量组和DON高剂量组,对照组饲喂基础饲粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂含1和2 mg·kg-1DON的基础饲粮。试验期60 d。在试验开始后的0、14、28、42和60 d,所有仔猪经前腔静脉采血,检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平;试验结束时,每组随机选取5头仔猪剖杀,取十二指肠、空肠和回肠,检测肠道黏膜sIgA水平及肠组织IgA、IgM、IgG mRNA相对表达量。[结果]DON能显著或极显著降低仔猪平均日采食量与平均日增重,增加料重比(P0.05,P0.01);显著降低血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6水平和小肠黏膜sIgA水平及小肠组织IgA、IgM、IgG mRNA相对表达量(P0.05),其中DON高剂量组的作用效果比低剂量组更加明显。[结论]DON可以降低仔猪的生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平,对断奶仔猪具有一定的免疫毒性作用。     

不同酸化剂对断奶仔猪胃肠道pH和消化酶活性的影响

为研究不同酸化剂对断奶仔猪胃肠道pH和消化酶活性的影响。试验选取21日龄断奶、初始体重为6.85±0.24 kg的"杜×长×大"三元杂交仔猪72头,随机分为3个处理,每个处理4个重复,每个重复6头仔猪。分别饲喂玉米-豆粕型基础饲粮和在基础日粮中添加柠檬酸1.0%、幼添宝0.7%的2种日粮。结果表明,与对照组相比,日粮中添加1.0%柠檬酸能显著降低胃内pH(P0.05);1.0%柠檬酸组和0.7%幼添宝组有降低空肠和回肠段pH、提高胃蛋白酶活性的趋势,但差异均不显著(P0.05)。由此可见,在早期断奶仔猪饲粮中添加酸化剂可刺激胃酸和胃蛋白酶分泌,降低十二指肠、空肠回肠段pH,但对脂肪酶和淀粉酶活性影响较小。     

四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1与ESBLs基因共转移分析

为了解四川省食品动物源大肠杆菌mcr-1耐药基因流行情况,及其与超广谱β-内酰胺酶基因(ESBLs)共存和共转移的特征,采用微量肉汤稀释法检测菌株对不同抗菌药物的敏感性;采用PCR检测菌株mcr-1,以及mcr-1阳性菌株中ESBLs基因类型;采用质粒接合转移试验分析了mcr-1与ESBLs基因共转移的耐药机制。结果显示:190株大肠杆菌的mcr-1检出率为36.84%,75.71% mcr-1阳性菌株中同时检出ESBLs基因,主要以blaTEM-1、blaCTX-M-55和blaCTX-M-14为优势基因;mcr-1阳性菌对氨曲南(ATM)、头孢噻肟(CTX)和多黏菌素E(COL)耐药率极显著高于mcr-1阴性菌(P<0.01);质粒转移率为47.14%,其中获得mcr-1和ESBLs基因共转移的接合子表现出与供体菌相同的耐药表型及耐药基因。综上,在四川省食品动物源大肠杆菌中,mcr-1与ESBLs基因共存现象广泛存在,且耐药基因易发生水平传播,对菌株多重耐药性的产生具有重要意义。     

沙门菌、巴氏杆菌和大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立

旨在建立一种可以应用于临床样本同时检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌感染的多重PCR方法。根据NCBI上已收录的沙门菌hut基因、多杀性巴氏杆菌 kmt1基因和大肠埃希菌23SrRNA基因的全基因序列,设计并合成3对特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能够同时检测3种细菌混合感染的多重PCR诊断方法。特异性分析表明,应用该方法可以从沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌以及3种细菌的混合物中扩增出3条大小分别为286 bp、457 bp和652 bp的特异性条带,其他对照组检测结果均为阴性;敏感性分析表明,该方法对沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的最低检出量分别为1.77×10　、1.99×10　、2.01×10　 CFU/mL;人工模拟感染样本检测表明,该方法能从混合感染的病料中检测出3种病原菌。可见：所建立的多重PCR方法具有特异性强,敏感度高,稳定性好的特点,可以有效检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的混合感染。     

细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测

构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。     

兰州百合和有斑百合的核型研究

【目的】研究兰州百合及有斑百合的染色体核型。【方法】利用染色体常规压片的方法,对兰州百合和有斑百合的染色体数目及核型进行了研究和分析。【结果】兰州百合的核型公式为2n=2x=24=2m+2sm+6st+14t,相对长度为6.35%～12.07%,核型不对称系数为83.25%,染色体相对差异较大。有斑百合的核型公式为2n=2x=24=4m+12st+8t,相对长度为6.11%～12.90%,核型不对称系数为80.11%。【结论】兰州百合的核型类型属于3A型,有斑百合的核型类型为3B型,以有斑百合核型的进化较高,可见不同居群的百合间核型存在差异。     

美洲棘蓟马体内共生菌Wolbachia的wsp基因分子检测及系统发育分析

【目的】对美洲棘蓟马体内共生菌Wolbachia进行分子生物学鉴定,确定该蓟马体内Wolbachia的进化位置,为进一步探讨Wolbachia对其生殖作用的调控机制提供理论依据。【方法】以wsp基因为目的基因,对美洲棘蓟马体内的共生菌Wolbachia进行特异性扩增和测序,使用Clustal X 1.83软件对所得DNA序列进行比对;在MEGA 4.0软件中采用邻接法对Wolbachia的系统发育关系进行分析。【结果】利用wsp基因的特异性引物从美洲棘蓟马体内扩增出了632 bp的Wolbachia的wsp基因片段(GenBank登录号为JN315668),580 bp的Wolbachia A群的wsp基因片段和405 bp的Mel亚群的wsp基因片段。系统发育分析结果表明,美洲棘蓟马体内的Wolbachia与黑腹果蝇亲缘关系较近。【结论】美洲棘蓟马体内感染的Wolbachia属于A群Mel亚群。     

山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析

通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达, SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T_0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4H cDNA全长1 735 bp,开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性, 2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.     

Pina新等位变异Pina-D1o的分离及分析

Puroindoline基因(Pina和Pinb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因,决定小麦加工品质,分离该基因的新等位变异有利于小麦籽粒硬度性状的改良。采用同源克隆方法从节节麦(Aegilops tauschii,DD PI603224)中分离到一个Pina新等位变异Pina-D1o。生物信息学分析表明,该基因编码区全长447bp,编码148个氨基酸残基,具有小麦族作物PinA蛋白所特有的WRWWKWWK色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。根据核苷酸序列构建的拓扑树,Pina-D1o与Pina-D1m、Pina-D1n相同,均由功能性等位变异Pina-D1a发生单基因突变而来,因而Pina-D1o有可能来源于Pina-D1a。可见,新等位变异类型PinaD1o的发现可以为小麦的籽粒硬度改良提供基因资源。     

加州新小绥螨对截形叶螨的捕食作用

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus(McGregor)对截形叶螨Tetranychus truncate(Ehara)的捕食潜力,采用捕食者功能反应方程及参数研究加州新小绥螨对截形叶螨各螨态捕食作用。结果表明,加州新小绥螨对雌成螨、若螨、卵的选择性捕食系数分别为0.365、1.276和1.390。在不同温度条件下,加州新小绥螨对截形叶螨的功能反应均属于HollingⅡ型;对猎物卵和幼若螨的控制能力最强。在试验温度范围内,加州新小绥螨的捕食能力随温度升高呈先增后减趋势,28℃时最强,对截形叶螨雌成螨、若螨和卵的攻击系数(a)最大,分别为0.639、0.730和0.842;处理时间最短,分别为0.126、0.075和0.039d;最大日捕食量分别为7.943头、13.405头和25.575粒。加州新小绥螨的捕食作用存在较强的种内干扰反应,随着捕食者密度的增大,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低,捕食作用率与其自身密度的关系为E=0.423P-0.747。     

结球甘蓝类钙调蛋白基因 CML48和 CML50在不同胁迫下的表达分析

为探究结球甘蓝类钙调蛋白（CMLs）响应不同胁迫时的功能,丰富CMLs参与钙信号网络调控,为CMLs参与植物逆境途径及其功能的研究提供依据。以结球甘蓝ZG为材料,克隆得到 CML48和 CML50基因,序列分析表明 CML48开放阅读框（ORF）为672 bp,含4个内含子,编码223 aa,分子量为25.28 ku; CML50开放阅读框ORF为1 095 bp,编码364 aa,分子量为38.06 ku,含3个内含子;均为亲水蛋白,均含有2个EF-hand结构域;系统发育树表明 CML48和 CML50均与甘蓝处于同一进化枝,与白菜、油菜的亲缘关系最近。qPCR表明 CML48和 CML50在干旱(PEG6000)、盐胁迫(NaCl)、低温(4 ℃)、高温(37 ℃)、H₂O₂、脱落酸（ABA）、水杨酸（SA）和茉莉酸甲酯（MeJA）等不同胁迫处理下,在叶和根中的表达均有上调,且 CML50的表达量均显著高于 CML48, CML48在茎尖中高度响应高温胁迫,而在根中不响应高温和H₂O₂胁迫。初步说明 CML48和 CML50在根和叶中均可响应上述8种非生物胁迫。     

牙鲆变态发育过程中epigen基因的空间表达分布

细胞分裂在鲽形目鱼类变态过程中发挥了重要作用。Epigen作为表皮分裂原,通过激活MAPK通道来调控有丝分裂。以前的研究利用定量PCR表明,epigen在变态前期表达量升高,而变态后期表达量下降,表明其与变态发育相关。为了进一步调查epigen与牙鲆变态发育的关系,利用RNA整体原位杂交技术检测了epigen在变态期牙鲆体内的空间表达分布,发现在变态期的各个阶段,epigen基因表达分布均比较广泛,表皮、鳃、肝脏、肠道、鳍条、支鳍骨、肌节等组织都有表达,在牙鲆变态前和变态早期(E期)信号较强,而在变态高峰期(F期和G期)和变态后期(H期)信号逐渐变弱。Epigen空间表达分布模式提示,其作为表皮分裂原,可能广泛参与牙鲆变态发育早期事件,尤其可能与肝脏、肠道、支鳍骨和鳍条的发育有关。