ε-聚赖氨酸对公猪精液中常见细菌的体外抑制效果研究

试验首先采用高通量测序法检测常温保存1、3、5 d关中黑猪精液细菌的种类及所占比例,而后采用16S rDNA法初步鉴定精液中分离的部分细菌,并筛选出精液中常见细菌作为ε-聚赖氨酸体外抑菌试验菌种,最后探究0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32 g/L的ε-聚赖氨酸对精液中常见细菌的抑制作用。结果表明,在常温保存过程中革兰氏阴性菌为优势菌群,且0.04 g/L的ε-聚赖氨酸能有效抑制大肠杆菌、表皮葡萄球菌和鲁菲不动杆菌的生长。因此,在常温保存过程中添加ε-聚赖氨酸能有效控制精液中常见细菌的生长。     

曲酸对关中黑猪精液常温保存的影响

研究将抗氧化剂曲酸(Kojic acid)应用到关中黑猪精液的常温保存中,通过渗透压、精子活率、质膜完整率、顶体完整率和总抗氧化能力(T-AOC)等指标检测,探究曲酸对精子的保护作用,为关中黑猪精液稀释粉的研发提供技术支持。试验结果显示,BTS稀释液中添加0.1 g/L浓度以内的曲酸能够有效提高精子质膜、顶体完整性,提升精子的总抗氧化能力。其中0.04 g/L浓度组保存效果最好,保存第5天时精子活率为61.45%,可将精子有效保存时间延长2 d,0.06 g/L浓度组与之差异不显著(P0.05)。综上所述,在BTS液中添加0.04 g/L曲酸能够对精子常温保存起到最佳的抗氧化保护效果。研究对解决猪精液常温保存中精子的氧化损伤问题具有重要参考意义,同时为自主研发稀释粉产品提供试验依据。     

关中黑猪精液常温保存研究

关中黑猪是陕西省培育品种,具有抗病能力强、繁殖力高、耐粗饲和肉质好等特点。由于国外瘦肉型猪对国内市场的冲击,关中黑猪的市场环境日益下降,使得许多优良性状发生分离变化。本研究选取5种常用猪精液常温保存稀释剂,对关中黑猪精液保存最适宜温度及抗生素选择进行研究。结果表明,关中黑猪种公猪鲜精活力为0.85,畸形率16%,pH7.3,精子密度2.36亿/mL,平均采精量250mL,色泽为乳白色。在不同的稀释剂中,保存效果最好的是Ⅲ号稀释剂,可保存5d,活力为0.5,Ⅰ号稀释剂效果次之,Ⅱ号稀释液略好于Ⅳ、Ⅴ号稀释液。在短时间内(≦2d),Ⅰ号稀释剂与Ⅲ号稀释剂保存效果无明显差异,而Ⅰ号稀释剂成本更低,更适用于生产实践中关中黑猪精液短期保存。此外,添加青霉素、庆大霉素或青霉素+庆大霉素的混合液后保存效果没有差异。因此,关中黑猪精常温保存的最佳温度是15~20℃,本研究为关中黑猪人工授精技术及提高育种水平提供依据。     

褪黑素对湖羊精液低温保存效果的影响

为研究褪黑素对湖羊精液4℃保存效果的影响,在前期筛选的湖羊精液稀释液中添加不同浓度(0.00、0.02、0.04、0.06、0.08 g/L)的褪黑素进行4℃冷藏试验,检测湖羊精子活力和顶体完整率,以及精液中过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组相比,添加0.02 g/L褪黑素组在保存0、24、48、72、96 h的精液中MDA含量极显著降低(P0.01);0、24、48、72 h精液中CAT酶活力极显著提高(P0.01);48 h精子活力和顶体完整率极显著提高(P0.01)。综合比较表明,在湖羊精液稀释液中添加0.02 g/L褪黑素,在48 h内能够显著提高湖羊精液4℃稀释保存的品质。     

牛血清蛋白及大豆卵磷脂对山羊精子保存效果的影响

本实验旨在研究在精液稀释液中添加牛血清蛋白(BSA)和大豆卵磷脂对山羊精液常温保存效果的影响,并探讨常温保存山羊精液时BSA与大豆卵磷脂的最适浓度。配制6种稀释液,比较其常温保存山羊精子的效果,保存效果最好的一种作为基础稀释液。在优选稀释液中首先分别添加0、1、2、3、4 g/L BSA,在得到保存效果最佳的BSA浓度基础上分别添加0、1、2、3 g/L大豆卵磷脂,检测两者在不同浓度条件下对山羊精子活力、质膜完整率、顶体完整率及保存时间的影响。结果表明:基础稀释液中添加3 g/L BSA及1g/L大豆卵磷脂的精子活力、质膜完整率及顶体完整率均显著高于其他浓度添加组,且有效存活时间为68.93 h,总存活时间为82.55 h,均为最长。每1 L蒸馏水与葡萄糖19 g、果糖19 g、柠檬酸二钠16 g、EDTA-Na2 1.7 g、BSA 3 g、大豆卵磷脂1 g、青霉素钠和硫酸链霉素各100万单位配制成的稀释液,常温保存山羊精子效果较好,适用于山羊人工授精。     

不同浓度的鱼精蛋白对猪精液17℃液态保存效果的影响

鱼精蛋白具有一定的抗菌效果和保护精子的作用,为探讨不同浓度的鱼精蛋白对猪精液17℃保存效果的影响,本实验在Modena稀释液中分别添加0、5、10、20μg/m L的鱼精蛋白,在常温保存过程中,检测精子活率、路径速度、直线速度、畸形率等质量参数。结果表明:精液在17℃保存过程中,在Modena稀释液中添加10μg/m L的鱼精蛋白,精子活率、路径速度、直线速度显著高于其他组(P0.05),畸形率显著低于其他组(P0.05)。综上可知,17℃保存的过程中,在Modena稀释液中添加10μg/m L的鱼精蛋白能够提高精液的保存效果,延长猪精液的保存时间。     

ε-聚赖氨酸对小鼠胚胎玻璃化冷冻的影响

为研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对小鼠胚胎玻璃化冷冻效果的影响,探讨冷冻保护剂ε-PL适宜的浓度和平衡时间,试验采用了不同质量浓度的ε-PL(20,30,40 g/L)及不同的平衡时间(0.5,1.0,2.0 min)对小鼠囊胚进行玻璃化冷冻,统计胚胎解冻后存活率及孵化率。结果表明:在冷冻液中添加30 g/L的ε-PL,平衡时间为1.0 min时,冷冻效果最好,囊胚胚胎的存活率达91.2%,孵化率达89.7%。因此,ε-PL可以作为一种高分子非渗透性保护剂对胚胎玻璃化冷冻起保护作用。     

茶多酚和花青素在湖羊精液常温保存中的应用效果

为了研究茶多酚和花青素对湖羊精液常温保存效果的影响,试验通过假阴道法采集健康湖羊精液,在基础稀释液中单独添加不同质量浓度的茶多酚(0,0.02,0.04,0.08,0.16 g/L)和花青素(0,0.01,0.03,0.05,0.07 g/L)以及0.08 g/L茶多酚+0.01 g/L花青素的联合添加进行常温(17℃)保存,每隔8 h检查1次精子活力、存活率、质膜完整率、畸形率。结果表明:添加茶多酚和花青素均能提高精液品质,而且单独添加0.08 g/L的茶多酚和0.01 g/L的花青素效果最佳。精液保存16 h后,0.08 g/L的茶多酚组精子活力、存活率、畸形率、质膜完整率分别为0.644 5,71.94%,2.08%,70.27%;0.01 g/L的花青素组精子活力、存活率、畸形率、质膜完整率分别为0.691 3,81.50%,18.33%,80.41%;0.08 g/L茶多酚+0.01 g/L花青素的联合添加组精子活力、存活率、畸形率、质膜完整率分别为0.588 9,90.98%,3.95%,66.94%。说明茶多酚和花青素能有效提高湖羊精液常温保存效果,且最适添加量分别为0.08 g/L和0.01 g/L,单独添加0.08 g/L茶多酚或者0.01 g/L花青素对精液的保存效果要优于0.08 g/L茶多酚+0.01 g/L花青素的联合添加。     

ε-聚赖氨酸在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用

通过研究ε-聚赖氨酸(ε-PL)对牛胚胎玻璃化冷冻的影响,探讨ε-PL在牛胚胎玻璃化冷冻中的保护作用,为优化牛胚胎玻璃化冷冻技术提供依据。单独以ε-PL作为冷冻保护剂,其质量浓度为20、35、50g/L,分别进行胚胎冷冻,结果均不能取得成活胚胎,说明ε-PL不能单独作为冷冻保护剂使用。在传统玻璃化冷冻剂中分别添加质量浓度为10、20、30g/L的ε-PL进行胚胎冷冻,结果发现添加ε-PL之后的冷冻保护液具有更好的保护效果,且ε-PL质量浓度为20g/L时效果最好,囊胚解冻孵化率可达42.37%。进一步探索了用该冷冻保护剂,缓冲时间分别为5、7.5、10min进行胚胎冷冻的效果,结果发现缓冲时间为7.5 min取得最高孵化率,孵化率为46.58%。结果表明,ε-PL对牛胚胎玻璃化冷冻具有一定的保护作用,且适当延长缓冲时间可取得更好的冷冻效果。     

不同稀释液配方对驴精液常温保存效果的影响

为了筛选适用于驴精液常温保存的稀释液配方,试验向驴精液中添加不同剂量柠檬酸、葡萄糖或卵黄的稀释液,进行常温保存,观察各组的精子活率以分析保存效果。结果表明:柠檬酸、葡萄糖、卵黄添加量分别为17.0 g/L、15.0 g/L和15%时对驴精液常温保存的效果较好。柠檬酸添加量为17.0 g/L时保存6 h的精子活率可达0.332±0.079;葡萄糖添加量为15.0 g/L时保存6 h的精子活率可达0.353±0.032;卵黄的添加量为15%时常温保存驴精液精子活率大于0.300的时间可达60 h。     

黄芩多糖对长白猪精液冷冻保存效果的研究

本研究旨在探讨不同浓度的黄芩多糖添加方案对猪冷冻精液保存效果的影响。猪冷冻处理的精液共6组,分别为空白对照组和添加不同浓度黄芩多糖的试验组（在冷冻稀释液中分别添加0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g/L黄芩多糖）,对冷冻-复苏的精液进行精子活力及相关运动参数、精子质膜完整性、顶体完整率等指标检测。结果表明：与空白对照组相比,添加0.4 g/L的黄芩多糖对冷冻-复苏后的精子直线速度、曲线速度、平均路径速度、顶体完整率、DNA完整率和精子抗氧化酶活性均有提高（P<0.05）。0.6 g/L黄芩多糖组精液冷冻复苏后精子的运动参数、顶体完整率及抗氧化酶活性与0.4 g/L黄芩多糖组无显著差异。此外,0.8 g/L黄岑多糖组的质膜完整率及直线性高于其他组（P<0.05）。综上所述,添加不同浓度的黄芩多糖均可提高猪冷冻精液品质,其中提高猪冷冻精液保存质量的最适添加量是0.4 g/L。     

黄芪多糖对猪精液低温保存的影响

通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同质量浓度的黄芪多糖(0、0.10、0.20、0.30、0.40g/L),对比7d内、4℃低温保存下猪精子的活率、活力、精子畸形率、精子质膜和顶体的完整性等参数,探讨黄芪多糖在猪精液低温保存应用的效果。结果显示,在猪精液低温保存后的质量上,0.10g/L质量浓度组与对照组差异不显著(P0.05),0.40g/L质量浓度组显著差于对照组(P0.05),0.20、0.30g/L质量浓度组显著好于对照组(P0.05),所有各组中0.30g/L质量浓度组效果最好。结果表明,在本试验条件下,适宜质量浓度的黄芪多糖可以明显改善4℃低温条件下猪精液的保存效果,其中最佳添加质量浓度是0.30g/L。     

不同浓度海藻糖对牛冷冻精液品质的影响

【目的】为提高牛冷冻精液的保存效果,【方法】本试验在新采集的牛精液中添加其他物质的基础上添加0mol/L,0.014mol/L,0.028mol/L,0.042mol/L浓度的海藻糖,比较不同浓度海藻糖对低温保存牛精液品质的影响。【结果】表明:在相同的保存时间下,海藻糖浓度为0.042mol/L时,精子活力最高,精子畸形率最低,对牛冷冻精液保存效果最佳。【结论】说明海藻糖浓度在0.042mol/L时,对牛精液冷冻保存伤害最小。     

原花青素对猪精液常温保存效果的影响

为探究常温保存稀释液中添加原花青素(OPC)对猪精液保存效果的影响,本实验在经典猪精液稀释液BTS中添加0、10、20、30、40、50、60、70μg/mL OPC,检测17℃保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整性、总抗氧化能力(T-AOC)及精液丙二醛(MDA)含量等指标。结果表明:在经典猪精液稀释液BTS中添加OPC,随着添加浓度的增大,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,且添加浓度达50μg/mL时,效果最佳,可显著提高常温保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整率(P0.05);当保存至第5天时,精子活率仍为61.63%、质膜完整率为41.88%、顶体完整率为75.88%、T-AOC浓度为1.43 U/mL、MDA含量为2.37 nmol/mL。因此,在经典猪精液稀释液BTS中添加50μg/mLOPC能够提高猪精液常温保存效果,延长精液保存时间。     

谷氨酰胺对湖羊精液4℃保存效果的影响

为研究湖羊稀释液中添加谷氨酰胺(Gln)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在前期筛选的基础稀释液中添加0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L的Gln, 4℃条件下保存96 h,每隔24 h检测精子活力、顶体完整率、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量指标。结果显示:添加0.5、1.0、2.0、4.0 mg/L的Gln可以有效提高4℃保存条件下的精子活力、顶体完整率和T-AOC水平,并有效抑制MDA的生成(P<0.01),且4.0 mg/L添加浓度保存效果最好,而8.0 mg/L的添加浓度则不利于精液保存。提示:在湖羊精液稀释液中添加4.0 mg/L Gln可有效提高湖羊精液4℃保存的效果。     

不同浓度羧甲基壳聚糖对猪精液17℃保存效果的影响

为了探讨不同浓度的羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitin, CMCS)对猪精液常温保存效果的影响，试验采集了4头健康的2～3岁长白猪精液，利用未添加CMCS的Modena稀释液和添加不同浓度(30,50,70,100μg/mL)CMCS的Modena稀释液进行稀释，然后将稀释的猪精液在17℃环境中保存5 d,于保存第0(添加当天),1,3,5天测定精液精子活力、线粒体活性率、质膜完整率、精液pH值和渗透压指标，筛选CMCS的最佳添加浓度。结果表明：在常温保存过程中添加CMCS对猪精液具有保护作用，在精液保存第5天时，添加70μg/mL CMCS精液的精子活力、线粒体活性、质膜完整率最高，显著高于未添加和其他浓度(P<0.05);添加70μg/mL CMCS精液的渗透压最高，显著高于100μg/mL浓度(P<0.05),与未添加和30,50μg/mL浓度差异不显著(P>0.05);添加30,50,70μg/mL CMCS精液的pH值差异不显著(P>0.05),但均显著高于未添加和100μg/mL浓度(P<0.05)。说明CMCS在猪精液常温保...     

对香豆酸影响猪常温保存精液品质的研究

本试验旨在探讨于猪精液基础稀释液（BTS）中添加不同浓度的对香豆酸（P-coumaric acid,PCA）对猪精液质量及抗氧化酶活性的影响。在猪常温稀释制剂中添加浓度为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 g/L的PCA,利用CASA全自动精子分析仪与荧光探针技术分别在1~5 d内检测精子运动学参数与精子功能完整性;利用抗氧化试剂盒在1、3和5 d检测精子活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。试验结果表明,在精液保存的第5天,0.09 g/L的PCA处理组与空白组相比,精子活力显著提高（P<0.05）,精子的顶体功能完整性、质膜功能完整性、线粒体功能完整性也显著升高（P<0.05）,不仅如此,0.03、0.06、0.09和0.12 g/L PCA处理可显著降低精子ROS与MDA水平,提高SOD活性（P<0.05）,其中0.09 g/L处理组相比其他组抗氧化活性效果最佳,而当添加浓度为0.15 g/L时,精子的抗氧化活性与0.09 g/L组相比显著降低（P<0.05）。综上,猪常温基础稀释液中添加PCA可改善精子常温保存品质,添加0.09 g/L效果最佳。     

聚维酮碘对常温保存猪精子质量的影响

通过在猪鲜精和17℃保存精液中添加聚维酮碘(PVP-Ⅰ),探讨其杀灭精液有害细菌的效果和对精子质量的影响,从而达到阻断病原菌垂直传播的目的。保存后不同时间时取样精液接种和培养,用细菌菌落计数的方法检测精液中细菌菌落总数,并用MicroScanA/S4细菌鉴定仪鉴定细菌种类。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率、活力,低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整性线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测线粒体活性和考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,用PVP-Ⅰ消毒猪精液时,在0～0.27g/L随着PVP-Ⅰ质量浓度的增加杀菌效果越好。精液中添加0.20g/L和0.27g/L PVP-Ⅰ能杀死棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌(作用1h),但不能杀死变形杆菌。在猪精液稀释液中添加质量浓度0～0.20g/L的PVP-Ⅰ对17℃保存猪精子质量无影响。结果表明,聚维酮碘在质量浓度0.20g/L能杀死猪精液中的棒状杆菌、大肠杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、链球菌,并且对17℃保存猪精子质量常规指标(活率、活力、线粒体活性、质膜完整性和顶体完整性)无影响。     

羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释剂是提高猪精子质量的关键因素之一。为探讨羧甲基纤维素钠(CMC)对猪精液常温保存效果的影响,本研究以传统的猪精液保存稀释剂Zorlesco(-BSA)为基础稀释液,通过添加不同浓度的CMC(0、8、16和24μmol/L)对原精液进行稀释和保存。采用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活率和活力,低渗肿胀法(HOST)检测精子质膜完整性,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整性。结果显示,在猪精液保存的前3d内,添加不同浓度CMC组的精子活率和活力与对照组相比较高,但差异不显著(P0.05);保存4~7d时,与对照组相比添加16μmol/L CMC组的精子活率和活力明显升高(P0.05)。在保存的前4d内,添加不同浓度CMC组的精子质膜完整率和顶体完整率与对照组相比差异不显著(P0.05),但在保存至5~7d时,添加16μmol/L CMC组的质膜完整率和顶体完整率显著高于对照组(P0.05)。猪精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率之间存在极显著的正相关关系(P0.01),在Zorlesco稀释剂中添加8~24μmol/L的CMC能显著改善和提高猪精子活率、活力、质膜完整性以及顶体完整率,其最佳添加浓度为16μmol/L。CMC可作为精液稀释剂中的悬浮剂,用于减缓精子沉降速率,提高猪精液保存质量。     

不同浓度海藻糖对伊拉兔精液常温保存效果的影响

为研究海藻糖对伊拉兔精液常温保存效果的影响,在伊拉兔精液稀释液中添加不同浓度(0、50、100、150 mmol/L)的海藻糖进行常温保存试验,检测伊拉兔精子活力和前向运动率.结果显示,在伊拉兔精液稀释液中添加海藻糖保存24 h后,0 mmol/L、50 mmol/L和100 mmol/L三组精子活力差异均不显著(P>...