影响绵羊体外受精技术因素的研究

作者对影响卵母细胞体外成熟和体外受精的因素进行研究。结果表明,激素FSH和LH明显促进卵母细胞的体外成熟,且10、20和40μg/m l组成熟率高于5μg/m l组,差异显著;运输温度在28~32℃的成熟率高于22~24℃和35~37℃,差异显著;用BO受精体系卵子卵裂率高于TALP受精体系,差异显著;用绵羊冻精进行体外受精,受精前除去大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞卵裂率高于保留大部分卵丘细胞的成熟卵母细胞。     

影响绵羊体外受精因素的研究

本试验对影响绵羊体外受精的因素进行了分析。结果表明:在相同条件下添加和不添加VEGF(血管内皮生长因子)的卵裂率分别为81.5%、84.9%(P>0.05),但囊胚发育率分别为31.5%和22.4%,差异显著(P<0.05)。受精时间8 h和12 h对卵裂率(80.8%、83.9%;P>0.05)和囊胚发育率(28.8%、23.5%;P>0.05)没有显著影响。卵巢采回后立即切割和在25~30℃的生理盐水中保存3 h的卵裂率分别为82.9%、86.5%,囊胚发育率分别为30.4%、29.7%,差异均不显著(P>0.05)。     

季节效应对绵羊体外受精的影响

试验结果表明进行体外受精试验时，不同季节绵羊体外受精的结果差异很大。卵母细胞的成熟率、受精率、囊胚率均以秋季处理的为高，尤其是卵母细胞的体外成熟率（P＜0.01）秋季为80.78％。     

大熊猫卵泡卵母细胞体外受精的初步研究

用抽吸法和切割法采集非发情季节病亡大熊猫的卵泡卵母细胞,经体外成熟培养后,用大熊猫冷冻精液进行体外受精。结果表明∶（１）在非繁殖季节,大熊猫卵巢中小腔及大腔卵泡卵母细胞仍较丰富,其大腔卵泡卵母细胞可在体外培养成熟;（２） 大熊猫的卵母细胞平均直径为（１４１±６．７）μｍ ,其胞质富含卵黄颗粒;（３）自配 Ｐａｎｄａ Ｉ Ｉ号获能液（含丙酮酸钠、肾上腺素等）可使大熊猫精子有效获能;（４） 大熊猫卵母细胞体外受精后,经培养可观察到第 ２ 极体,有的受精卵开始发生卵裂。     

FSH对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

为了探讨绵羊卵母细胞体外成熟过程中促卵泡素(FSH)的适宜添加量,试验将FSH分为0.01,0.02,0.03 IU/mL 3个浓度梯度,用于绵羊卵母细胞的体外成熟与体外受精,统计第一极体排出率、卵裂率和囊胚率。结果表明:不同浓度FSH对第一极体排出率影响差异不显著(P>0.05),体外受精后以0.02 IU/mL组效果最好,卵裂率显著高于0.03 IU/mL组(P<0.05),但与0.01 IU/mL组相比差异不显著(P>0.05);0.02 IU/mL组囊胚率与其他2组相比显著升高(P<0.05)。     

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究

性成熟前牛卵母细胞体外受精研究孙青原，侯艺，刘国艺，杨庆章，秦鹏春（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）前言在国内，牛体外受精的最大困难之一，就是卵巢来源不足。如果能用小牛作为卵母细胞供体，不仅可扩大卵母细胞来源，还可缩短世代间隔的时间，加快牛...     

鹿类体外受精技术研究现状

鹿类体外受精技术研究方面已有新西兰和法国的技术体系,但培养系统尚未建立,还处在起始阶段。作者阐述了鹿卵巢的采集、运输和卵母细胞的采集;卵母细胞的体外成熟培养;精子的体外获能和体外受精及受精卵的体外培养等方面研究报道的一些试验技术和方法。     

绵羊卵母细胞体外成熟的研究

研究了FSH／LH浓度、年龄和采卵季节对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①FSH／LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟，适宜的添加浓度很重妻。本实验条件下，添加量以10μg／ml为宜。②成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊，但无显著差异。③发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。     

牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18～ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6～ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18～ 2 0h处理组高于 6～ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18～ 2 4h缩短至 6～ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力 ,降低成本     

FSH对绵羊卵母细胞体外核成熟的影响

为了探讨FSH对绵羊卵母细胞核成熟的影响,本试验将绵羊卵母细胞体外成熟24 h,并在成熟过程中的4个不同时间段内添加FSH,统计各个时间段卵母细胞的生发泡破裂(germinal vesicle break down, GVBD)及第一极体排出情况。结果显示：①在体外成熟培养的前4 h或前8 h添加FSH,经体外成熟的卵母细胞其生发泡破裂率与不添加FSH组无显著差异;②在体外成熟的4~24 h或8~24 h添加FSH,其第一极体排出率与不添加FSH组有极显著差异。说明,在本试验条件下,FSH对绵羊卵母细胞体外成熟具有显著的促进作用,是在减数分裂的恢复后到减数分裂完成之间的某一阶段起的促进作用。     

卵泡大小和颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

用切割法采集卵泡液,收集卵丘一卵母细胞复合体（Cumulus oocytes comlexs,COCs）和自然裸卵,将部分COCs去除卵丘细胞获得机械裸卵,COCs放入体外成熟培养液中培养为成熟卵母细胞,加入获能的精子液,进行体外受精。结果表明：卵母细胞的体外成熟率和卵裂率与卵泡直径密切相关,大卵泡（80．95％,P〈0．01）和中等卵泡（75．50％,P〈0．05）的卵母细胞成熟率高于小卵泡（50．27％）;犬卯泡（53．53％）和中等卵泡（47．13％）的卵裂率显著高于小卵泡的32．26％（P〈0．05）。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为75．0％、54．2％和10．5％,差异极显著（P〈0．01）,卵裂率分别为53．8％、10．8％和0％,差异极显著（P〈0．01）。对照组和1×10^5、1×10^6个／mL颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为68．6％、69．6％和67．8％,无显著差异（P〉0．05）,但均显著高于1×10^7个／mL（51．5％,P〈0．05）和1×10^10个／mL（35．5％,P〈0．05）颗粒细胞组,但各组间的体外受精率无显著差异（P〉0．05）。结果提示,大卵泡和中卵泡的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率显著高于小卵泡,体外成熟培养液中添加高浓度的颗粒细胞能显著抑制卵母细胞的体外成熟。     

pFF对猪卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

探讨了两种不同成分成熟液配方(I:含PMSG、hCG、pFF与II:含FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活发育能力的影响。结果表明:当卵母细胞分别在I和II液中成熟培养42 h后,卵母细胞存活率差异不显著(82.66%∶83.5%)(P>0.05)。对成熟卵母细胞孤雌激活后体外培养结果表明:I成熟培养组的卵母细胞卵裂率低于II成熟培养组(69.44%∶78.38%)(P<0.05)。但两组卵母细胞经144 h培养后囊胚发育率差异不显著(35.0%∶32.04%,P>0.05)。由此可知:采用不含pFF、化学成分已知的成熟液可以满足猪卵母细胞体外成熟和卵母细胞孤雌激活后的正常发育。     

白藜芦醇对绵羊卵母细胞体外受精的影响

本试验旨在研究不同浓度（0、0.5、2.0、5.0 μmol/L）白藜芦醇（resveratrol,RES）对绵羊卵母细胞体外受精（in vitro fertilization,IVF）、卵母细胞抗氧化能力及卵丘细胞分泌类固醇激素的影响。绵羊卵母细胞在含不同浓度RES的体外成熟（in vitro maturation,IVM）液中培养24 h以后进行体外受精,并收集IVM液,测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）的活性及脂质过氧化产物丙二醛（monochrome display adapter,MDA）的含量;用酶联免疫法测定雌二醇（estradiol,E₂）和孕酮（progesterone,P₄）的浓度。研究结果表明,与对照组相比,在IVM液中添加0.5 μmol/L RES显著提高卵裂率（P<0.05）,但对受精率和囊胚率没有显著影响（P>0.05）;5.0 μmol/L RES显著降低受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）,对胚胎发育有抑制作用;在IVM和体外培养（in vitro culture,IVC）液中分别添加0.5 μmol/L RES均显著提高受精率、卵裂率和囊胚率（P<0.05）。与对照组相比,在IVM液中添加RES对卵丘细胞分泌E₂有一定的抑制作用,5.0 μmol/L RES显著降低E₂浓度（P<0.05）;0.5 μmol/L RES显著提高卵丘细胞P₄分泌量（P<0.05）。0.5和2.0 μmol/L RES增加SOD和GSH-Px等酶的活性,但与对照组相比无显著差异（P>0.05）,却显著降低MDA含量（P<0.05）;而5.0 μmol/L RES显著降低抗氧化酶活性并增加MDA含量（P<0.05）。综上所述,在IVM和IVC液中同时添加0.5 μmol/L RES,通过增强卵母细胞抗氧化能力和P₄的浓度,并降低MDA含量,从而提高胚胎卵裂率和囊胚率。     

Effects of Resveratrol on in vitro Fertilization of Sheep Oocytes

The purpose of this study was to investigate the effects of resveratrol (RES) at different concentrations (0,0.5,2.0,5.0 μmol/L) on in vitro fertilization (IVF) and antioxidant capacity of ovine oocytes and the secretion of steroid hormones by cumulus cells.Sheep oocytes were fertilized in vitro after maturated in different concentrations of RES for 24 h,and the in vitro maturation (IVM) medium was collected for detecting the enzyme activity of superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-Px) and the content of monochrome display adapter (MDA).The ELISA method was used to detect the concentration of estradiol (E₂) and progesterone (P₄).The results showed that when compared to the control group,adding 0.5 μmol/L RES to the IVM medium significantly increased the cleavage rate (P<0.05),but had no significant effect on the fertilization rate and blastocyst rate (P>0.05);5.0 μmol/L RES significantly reduced the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05),which had an inhibitory effect on embryonic development.Adding 0.5 μmol/L RES to IVM and IVC (in vitro culture,IVC) medium significantly increased the fertilization rate,cleavage rate and blastocyst rate (P<0.05).Compared to the control group,the addition of RES to IVM solution had a certain inhibitory effect on the secretion of E₂ by cumulus cells,5.0 μmol/L RES significantly reduced E₂ concentration (P<0.05);0.5 μmol/L RES significantly increased the P₄ secretion of cumulus cells (P<0.05).0.5 and 2.0 μmol/L RES increased the activity of SOD,GSH-Px and other enzymes,but there was no significant difference when compared with the control group (P>0.05),but significantly reduced MDA content (P<0.05),while 5.0 μmol/L RES significantly reduced the activity of antioxidant enzymes and increased the content of MDA (P>0.05).In conclusion,0.5 μmol/L RES simultaneously added to IVM and IVC medium could enhance the antioxidant capacity of oocytes and concentration of P₄,and reduced the content of MDA,thus improved the cleavage rate and blastocyst rate.     

不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟是胚胎工程中的一项基础性研究。试验比较了不同添加成分对绵羊卵母细胞的体外成熟及其后续发育的影响。分析了EGF不同添加量、FSH∶LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明,①添加30ng/mLEGF的成熟率显著高于其他试验组（85.0%VS60.0%,71.7%,72.7%,P〈0.05）,并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;②成熟液中添加FSH1μg/mL,LH5.0IU/mL成熟率最高;③在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于20%小卵泡液的添加组（78.6%VS36.5%,P〈0.01）,显著高于3%小卵泡液的添加组和未添加组（78.6%VS60.0%,67.5%,P〈0.05）。     

发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响

在动物卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养体系中添加一定浓度的发情牛血清可能提高卵母细胞的成熟率及胚胎的发育率。本研究以屠宰场卵巢来源的绵羊卵母细胞为试验材料,探讨了发情牛血清对绵羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,成熟液中添加10%第1天的发情牛血清能显著提高绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚卵裂率(P＜0.05);孤雌胚体外培养72 h后,向培养液中添加10% 第7天的发情牛血清能显著提高绵羊孤雌胚的桑囊胚率(P＜0.05)。结果表明,发情牛血清能够促进绵羊卵母细胞的体外成熟率及孤雌胚发育率。     

海狸鼠卵母细胞体外成熟培养初探

实验用ＰＭＳＧ或ＰＭＳＧ＋ＨＣＧ处理或未经激素处理的海狸鼠８只，共获卵巢卵母细胞１３８枚。激素处理对获取卵巢卵母细胞的数量没有影响，而对体外成熟发育至卵丘扩展和半成熟阶段有促进作用。三种不同培养液（Ｗｈｉｔｅｎ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＨＣＧ＋ＦＣＳ）共培养１２５枚卵母细胞，培养后卵丘扩展率及半成熟率分别为５６．５％，４５．７％，４７．６％和２１．７％，１２．３％，９．５％，以Ｗｈｉｔｅｎ液较高（分别为５６．５％和２１．７％），但只有ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ组有２枚卵母细胞出现第一极体。结果表明海狸鼠卵母细胞与其它啮齿动物的卵母细胞一样，能够在体外培养成熟，完成第一次减数分裂，排出第一极体     

牛卵泡卵体外成熟及其受精能力的研究

本试验主要研究了牛卵泡卵体外成熟、体外受精及其受精过程的发生。从屠宰场收集800枚牛卵泡卵进行体外成熟培养,并用体外获能的精子体外受精。在用m-TCM199培养21、22、24、26、28h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为33.89％、74.16％、77.78％、86.67％、85.71％;25h后,如果继续培养,成熟的卵母细胞比例不再显著增加。卵母细胞的自身形态显著地影响其成熟效果,A、B、C级卵培养24h后分别有94.60％、55.43％、31.25％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵在体外滞留8h后,其成熟率(47.11％)明显地低于45min(77.92％)或4h(74.60％)。肝素和钙离子载体A 23187都能诱发牛精子获能,二者在受精效报上差异不显著(P>0.05),并且都有多精入卵现象发生。授精后6h精子进入卵内,精子入卵后2～3h头部膨大,6h后出现早期原核,最早发生卵裂是在授精后30h。