菠萝非胚性愈伤组织的类型及其器官发生

以菠萝[Ananas comosus(L.)Merr.]非胚性愈伤组织为材料,利用离体培养及组织细胞学等方法研究了其在增殖、分化过程中的特性和再生规律。在增殖培养基上经过3次以上继代培养后,非胚性愈伤组织形态上逐渐表现出一定差异。根据其形态结构、分化能力和组织细胞学特征,可把非胚性愈伤组织分为节瘤状组织、薄壁组织团、致密深层愈伤组织和表面疏松愈伤组织4种类型;在增殖培养基MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA上,一种类型的非胚性愈伤组织通常只会生长出同类型的非胚性愈伤组织,但通过改变培养基配方等方法可使不同类型之间发生转换。同时,增殖继代过程中的器官发生现象很常见,通常是在薄壁愈伤组织表面细胞分化成具有分生能力的细胞,然后进行不定芽的分化。4类非胚性愈伤组织都可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生;也可以经胚性诱导由体细胞胚发生途径再生成植株,其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。生长素及细胞分裂素对非胚性愈伤组织的形态结构、分化途径以及增殖能力有很大的影响。     

朝鲜白头翁不定根分生结节形态学和解剖学观察

以朝鲜白头翁幼嫩叶片诱导产生的不定根为材料诱导分生结节。采取Epon 812树脂和石蜡包埋切片技术分别对诱导初期的单个分生结节和培养5~6周的组织进行组织切片研究。结果显示:(1)不定根在诱导培养基上分化形成独立的表面光滑的球形分生结节。(2)单个分生结节顶端为3~4层分生细胞,其表皮和皮层上也观察到分生细胞。(3)分生结节分化后,结构上存在两种类型,一种为由分生细胞、维管束、薄壁细胞和分化形成的小芽原基组成的结构,芽原基基部由排列整齐的表皮细胞组成,不定芽之间结合较松散,与母体结合不紧密,易脱离,为独立的个体;另一种结构由排列规则的表皮细胞环绕而成,其表皮细胞上广泛分布染色较深的球形、椭圆形或心形的体细胞胚状体,整个结构细胞大小一致,无内部结构。结果证实,朝鲜白头翁不定根来源的分生结节上同时发生器官分化和直接体细胞胚分化,分生结节也可分化形成胚性愈伤组织,通过愈伤组织间接再生体细胞胚。     

朝鲜白头翁不定根分生结节形态学和解剖学观#br# 察

 以朝鲜白头翁幼嫩叶片诱导产生的不定根为材料诱导分生结节。采取Epon 812 树脂和石蜡 包埋切片技术分别对诱导初期的单个分生结节和培养5 ~ 6 周的组织进行组织切片研究。结果显示：（1） 不定根在诱导培养基上分化形成独立的表面光滑的球形分生结节。（2）单个分生结节顶端为3 ~ 4 层分生 细胞,其表皮和皮层上也观察到分生细胞。（3）分生结节分化后,结构上存在两种类型,一种为由分生 细胞、维管束、薄壁细胞和分化形成的小芽原基组成的结构,芽原基基部由排列整齐的表皮细胞组成, 不定芽之间结合较松散,与母体结合不紧密,易脱离,为独立的个体;另一种结构由排列规则的表皮细 胞环绕而成,其表皮细胞上广泛分布染色较深的球形、椭圆形或心形的体细胞胚状体,整个结构细胞大 小一致,无内部结构。结果证实,朝鲜白头翁不定根来源的分生结节上同时发生器官分化和直接体细胞 胚分化,分生结节也可分化形成胚性愈伤组织,通过愈伤组织间接再生体细胞胚。     

球根海棠离体培养的形态发生研究

 球根海棠外植体可在同一条件下同时诱导不定芽和胚状体, 经间接途径和直接途径的体细胞胚胎发生频率均很高, 体细胞胚为单细胞起源或多细胞起源。以再生嫩叶为继代中间体, 在较高温度(28 ℃) 下诱导, 可建立高效扩繁体系。纵切芽丛继代形成大量愈伤组织, 愈伤组织继代半年后几乎完全丧失分化能力, 发生激素驯化作用, 而且愈伤组织细胞染色体数目已发生广泛变异。     

百合类体细胞胚和体细胞胚的形态学与组织学研究

 以东方百合‘Siberia’的无菌苗叶柄为试材,诱导产生初始分生结节组织。其后对分生结节组织进行分化再生采用体式显微镜观察和石蜡切片分析的方法对诱导得到的类体细胞胚和体细胞胚再生结构进行形态学和组织学观察。百合类体细胞胚结构呈球形至心形结构或芽状,组织内部主要由薄壁细胞组成,与母体组织存在着明显的维管组织联系,具有多个维管组织中心,其外形与体细胞胚极为相似。百合体细胞胚发源于分生结节表面新生的胚性愈伤组织,经历球形、椭圆形和子叶形胚阶段发育形成完整的植株,在整个发育过程中与母体愈伤组织在整个发育过程中无维管组织联系,且它的根芽两极同时发生,相互联系。研究结果表明,两种再生结构虽然具有极相似的外观形态,但是在发育方式和内部组织结构上截然不同。     

‘过山香’香蕉多芽体的诱导及其体细胞胚的发生

 以我国重要香蕉种质‘过山香’ (AAB) 为材料, 研究了香蕉多芽体诱导、多芽体茎尖薄切片即分生组织性的表层结构物( scalp) 愈伤组织诱导和体细胞胚发生的合适条件。结果表明, 该品种单个不定芽茎尖在P4培养基(含BAP 100 μmol·L ^{- 1}和IAA 1 μmol·L ^{- 1} ) 中继代5个周期后可诱导获得类似花椰菜结构的多芽体。从30 μmol· m ^{- 2} ·s^{- 1}光强, 光/暗周期(16 h /8 h) 培养的多芽体所获得的scalp在添加2,4-D 5μmol·L ^{- 1}和Zeatin 1 μmol·L ^{- 1}的愈伤组织诱导培养基中黑暗培养, 45 d后愈伤组织诱导率可达97.6%。诱导20 d后黄色分生小球体类结节状愈伤组织开始发生, 90～120 d后在分生小球体局部可获得白色或浅黄色松散的胚性愈伤组织(诱导率为17.5% ) 。从胚性愈伤组织诱导的体细胞胚在成熟培养基上培养60 d后体胚萌发率和植株转化率分别为14.5%和11.1%。     

花烛愈伤组织不同继代培养的再分化差异

 对花烛( Anthurium andraeanum) ‘Jolanba’无菌苗叶片诱导产生的愈伤组织进行3 种不同的培养处理, 观察其再分化表现, 并探讨了3 种继代培养愈伤组织的生理生化特点。结果表明, 适当降低基本培养基浓度、减少继代次数和延长继代周期培养的愈伤组织分化的芽较多、较壮; 再生芽的分化需要较高水平的可溶性蛋白质, 其生长需要较高水平的可溶性糖; POD 和SOD 活性与分化的芽数呈正相关; GA_{1 + 3}/ABA、ZR_s/ ABA 的高比例与再生芽的高度呈显著正相关; IAA/ ABA 及IAA 的高水平与花烛离体根的发生呈正相关。重新诱导培养和延长愈伤组织继代周期以提高再生芽生长势的主要生理生化基础之一是维持较高的可溶性糖水平和有利的激素平衡。     

香蕉愈伤组织及体细胞胚诱导过程中的组织学观察

将巴西蕉(Musa AAA Cavendish)的未成熟雄花接种在MI培养基(MS+4mg/L2,4-D+1mg/L生物素+1mg/LIAA+1mg/LNAA+100mg/L谷胺酰氨+100mg/L麦芽抽提物+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉)上进行愈伤组织诱导,对愈伤组织诱导过程中的各个阶段进行组织学观察。结果表明,未成熟雄花外植体脱分化的起始部位是表皮下层的维管组织细胞,启动时间为外植体接种后4～5周;外植体接种8周后获得分生小球体;胚性愈伤组织形成于分生小球体的表面,主要由具有细胞核和核仁比大、细胞质丰富的胚性细胞组成。随着培养时间的延长,胚性愈伤组织的表面形成一些由多细胞组成的体细胞原胚,有时还可观察到二分体的存在,这表明香蕉体细胞胚可能是单细胞起源的。     

红掌叶片愈伤组织和气生根再生团块的细胞学研

 对红掌叶片诱导产生的3种愈伤组织和气生根再生团块的形成、不定芽的分化发育过程进行了显微观察。结果表明: 黄绿、黄和褐色3种愈伤组织的细胞核质比依次减小, 细胞排列越来越疏松, 细胞质变稀薄, 细胞形态变得不完整, 其中黄色和褐色愈伤组织出现类似凋亡小体的小泡, 细胞最终凋亡。叶片气生根的形态发生为间接器官发生方式, 再生团块由气生根根段切口的皮层细胞分裂分化而来。再生团块内部有大量的密集小细胞团, 细胞分裂旺盛, 为分化的原始组织, 以后逐渐分化为不定芽, 形态发生以间接器官发生方式为主, 也有少量胚状体发生方式, 小细胞团是分化产生不定芽的基础。芽的分化发生方式属内起源, 随着小细胞团的不断生长, 外层细胞逐渐凋亡, 最终使分化的芽突出再生团块再生成苗。     

巴西香蕉吸芽高效胚性再生体系研究

以巴西蕉吸芽分生组织切片为外植体在较短时间内诱导出了较多的胚性组织,胚性组织诱导率超过50%,大大提高了胚性组织的诱导率和缩短了胚性愈伤诱导时间,并观察到香蕉体胚发育存在3种主要途径。实验表明,(1)2,4-D浓度0.5～1.0 mg.L-1是诱导巴西香蕉脱分化愈伤的较好浓度,愈伤组织诱导率可达100%;(2)在2,4-D浓度一致的情况下,细胞分裂素种类是影响巴西香蕉吸芽切片胚性组织诱导率的关键因素,3种细胞分裂素6-BA、ZT、TDZ,只有ZT能诱导吸芽切片产生胚性组织。     

百合的花药培养研究

 对百合花药培养的影响因素研究显示, 小孢子最适培养时期为单核期; 愈伤组织诱导率最高可达42. 16 % , 最佳激素组合为2 ,42D 3. 0 mg·L^-1+ KT 3. 0 mg·L^-1; 低温预处理作用不大; 早分化出的花蕾中的小孢子更易诱导产生愈伤组织; 分化培养基以改良MS + NAA(2. 0、4. 0 mg·L^-1) 为宜; 花粉植株中单倍体(n = 12) 约25 % , 二倍体(2 n = 24) 约75 %。     

怀地黄花药培养影响因素的初步研究

以怀地黄花药为外植体,研究花药发育时期和激素对怀地黄花药愈伤组织诱导率和分化率的影响。结果表明:怀地黄花药在4℃条件下预处理3d后接种在含有2,4-D 2.0mg/L、6-BA 0.5mg/L和KT 2.0mg/L的MS培养基上对花药愈伤组织诱导最有利,而最适的愈伤组织分化培养基为MS+IAA 0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L。     

茄子子叶下胚轴离体再生体系建立

以3份茄子材料无菌苗子叶和下胚轴为外植体,研究其在MS附加不同浓度6-BA和NAA的培养基上的分化情况.结果表明:在不同培养基上,茄子子叶和下胚轴均能诱导出愈伤组织和分化形成不定芽,但不定芽诱导率存在明显差别,诱导3份材料下胚轴愈伤组织形成和芽分化的最佳培养基均为:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,子叶因品种不同有较大差异,紫色长棒茄芽分化最佳生长调节物质组合是6-BA 1.0 mg/L-+NAA 0.5 mg/L;紫红线茄是6-BA2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;紫黑短棒茄是6-BA 3.0 mg/L-+NAA 0.5 mg/L.     

温郁金愈伤组织培养及快速繁殖

为了提纯复壮温郁金资源,快速繁殖良种苗木,满足市场供不应求的现状,对温郁金外植体培养及愈伤组织的诱导、继代、分化和再生进行研究.结果表明:莪术外植体在以MS培养基为基本培养基,附加6-BA 3.0 mg/L IAA 1.0 mg/L适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D 2.0 mg/L KT 5.0 mg/L适于愈伤组织的诱导;附加2,4-D 1.0 mg/L KT 0.5 mg/L适于愈伤组织的继代培养;附加KT 5.0 mg/L NAA 0.3 mg/L适于愈伤组织的分化,生根的最佳培养基为MS IAA 1.0 mg/L.因此,可以通过组织培养的方式提纯复壮温郁金资源,进行温郁金的快速繁殖.     

野生毛桃叶片愈伤组织诱导及不定芽再生

【目的】为了初步建立野生‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生技术体系,【方法】以野生‘毛桃1号’试管苗幼嫩叶片为外植体,探讨了基本培养基、激素配比等一系列因素对‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导和保存的影响及TDZ浓度对愈伤组织不定芽再生的影响。【结果】结果表明,适合‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导的培养基为LP+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 3.0 mg.L-1+AgNO30.5 mg.L-1+蔗糖30.0 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1;保存的培养基为LP+2,4-D1.5 mg.L-1+CH 0.4 g.L-1+蔗糖30 g.L-1+CA 3.0 g.L-1或PVP 3.0 g.L-1+琼脂5.8 g.L-1,且采用持续暗培养保存,每28 d继代1次。愈伤组织在SH+TDZ 3.0 mg.L-1+NAA 0.3 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1+琼脂6.0 g.L-1的培养基上可再生不定芽,再生率为6.83%。【结论】初步建立了‘毛桃1号’叶片愈伤组织诱导、保存及不定芽再生体系,为桃愈伤组织再生和遗传转化的研究奠定了基础。     

一品红组培苗快繁技术的研究

以一品红带芽茎段、叶片为外植体,研究了不同激素浓度配比的MS培养基对愈伤组织、芽的分化及增殖和试管苗生根的不同效应。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS+BA0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L(pH 5.6),诱导率达到92.5%;芽的分化最佳培养基为MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,不定芽的诱导率达到83.3%;芽的增殖培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L,增殖系数为10.8;而最佳生根培养基为1/2MS+BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,每芽生根数平均为3.5条。该研究结果为一品红组培苗的工厂化生产提供了可靠的技术指标。     

NH4NO3及碳源对红掌愈伤组织诱导影响的研究

以红掌的根段和叶片为外植体,探讨了不同NH3 NO4浓度和不同碳源组合对外植体愈伤组织诱导率的影响.结果表明:红掌再生对NH4 NO3的浓度非常敏感,低浓度的NH4 NO3有利于诱导愈伤组织,浓度较高时抑制愈伤的诱导;而不同的碳源也会影响到外植体愈伤组织的诱导,蔗糖与葡萄糖相比更适合于红掌愈伤组织的诱导.其中NH4 NO3 0 mg/L、蔗糖3％组合中根和叶片的愈伤组织诱导率最高,分别是92.6％和81.5％.     

‘富有’和‘次郎’甜柿叶片再生植株的研究

 比较了不同生长调节剂及其种类浓度和培养时间对‘富有’和‘次郎’两个甜柿(Diospyros kaki Thunb. ) 品种的叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的影响。TDZ诱导叶片愈伤组织和不定芽再生的能力很强, 在含ZT 0.5 mg·L ^{- 1}的培养基中, 愈伤组织的形成率达96% , 愈伤组织不定芽分化率达80%以上,由0.5 mg·L ^{- 1} TDZ诱导形成的富有和次郎愈伤组织, 在含有ZT 0.5 mg·L ^{- 1}的1/2DKW培养基培养30 d,不定芽分化率均达96%以上, 平均芽数分别为7.8和5.4, 所得再生苗的生根率近75%。