沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7双重荧光PCR检测方法的研究

目的建立一种能同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的快速检验。方法根据沙门氏菌invA基因和大肠杆菌O157:H7 RFBE基因的保守序列,设计引物和探针,通过优化反应条件,建立可同时检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的双重荧光PCR方法,应用于动物源性食品的检验,并与miniVIDAS快速初筛方法和SN标准方法进行比较。结果本研究建立的双重荧光PCR方法可同时快速检测沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7,对纯菌的检测灵敏度均低于10CFU/双重荧光PCR反应体系。应用本方法检测36株标准/参考菌株,结果只有9株目的菌标准/参考菌株出现特异性扩增,其余27株非目的菌均呈阴性反应。定量检测重复性试验结果,批内和批间的变异系数均小于2%。应用本方法检测人工染菌样品,结果与miniVIDAS和SN方法检测结果一致,但检测时间比miniVIDAS快了3倍,比SN标准快了10多倍。结论本研究建立的双重荧光PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好的优点,可在8小时内完成样品沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7的检验。     

进口美国大豆杂质检验中行业标准与美国标准的适用性分析

通过对进口大豆杂质检验方法(SN/T0803.6--1999)以及美国大豆杂质检验方法(简称美标)所检验同一样品的结果进行对比分析,结果差异不显著,但美国标准更具有高效性和可操作性,更适用于大宗进口大豆的检验。     

北京市理顺动物防疫监督体系

国家质检总局近日审查通过并发布了《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN／T1551-2005)。该规程将于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。     

基于Nc2和Nc5基因的新孢子虫PCR方法的建立

本试验筛选了新孢子虫病PCR检测的引物,运用《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)对根据犬新孢子虫Nc2和Nc5基因设计的PCR引物进行了评价。此外,同时运用F1/R1、F2/R2和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R共同对14份荷斯坦牛和19份西门塔尔牛全血DNA进行PCR检测,旨在筛选出特异性较好的引物,建立新孢子虫病PCR检测方法和了解当地不同品系牛患新孢子虫病的感染率。结果显示,3对引物分别扩增出105、128和231 bp目的片段,均与预期目的片段大小相符;其中,F1/R1与SN/T 3499 F/SN/T 3499 R的最低检测量相同,为19.9 fg/μL,F2/R2最低检测量为199 fg/μL,说明F1/R1和SN/T 3499 F/SN/T 3499 R引物的敏感性更好;运用F1/R1、F2/R2引物分别对19.9 pg/μL和199 fg/μL模板重复进行4次扩增,均出现了较明亮的扩增条带,证明两对引物重复性较好。33份血液样品共检出6份阳性DNA,阳性率分别为21.43%和15.79%,检出复合率为100%。以上结果说明F1/R1和F2/R2引物均可作为新孢子虫病PCR的诊断引物,本试验初步建立了新孢子虫PCR方法,同时初步了解了当地牛群中新孢子虫感染情况,为有效预防和控制新孢子虫病提供了科学的理论依据。     

供港澳活猪产地检疫标准将施行

国家质检总局近日审查通过并发布了《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN／T1551—2005)。该规程将于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。     

广东制定《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》

由广东省汕头市主持制定的《供港活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN／T1551—2005)，经国家质检总局审查通过，获准发布，并于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。     

国家毛绒质量监督检验中心投入运作

由广东省汕头检验检疫局主持制订的《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN／T1551—2005)，经国家质检总局审查通过，获准发布，并定于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。     

标准化无菌及支原体检验培养基应用试验

经微生物促生长及灵敏度检测合格的无菌及支原体检验培养基各3批,分别在6个兽用生物制品企业进行了应用试验。抽检疫苗52批和半成品抗原5批,3批无菌检验培养基检测结果一致,疫苗2/52批、半成品抗原3/5批污染。禽源支原体检验培养基抽检样品17批、非禽源支原体检验培养基抽检33批及血清支原体检验培养基抽检10批,3批培养基检测结果一致,均无支原体污染。     

LUX^TM荧光PCR快速检测沙门氏菌的研究

本研究针对沙门氏菌invA基因的保守序列,设计特异的LUX^TM荧光标记引物,通过优化反应奈件和参数,建立可快速检测沙门氏菌的LUX^TM荧光PCR检测方法。结果显示,该方法高度敏感,其对纯菌的检测低限达到10^2cfu／mL,经6h增菌培养后检测,对样品液的检测低限达到1cfu／mL;特异性强,测试的全部13株沙门氏菌标准和参考菌株均呈阳性反应,测试的全部27株非目标菌均呈阴性反应;重复性好,定量检测批内和批间的变异系数均小于2％。应用本方法检测食品样品240份,结果检出阳性4份,与TaqMan荧光PCR和SN标准检测结果完全一致。本方法可在8h内完成对样品中沙门氏菌的检测,其检测的快速性、敏感性和特异性与TaqMan荧光PCR技术相当,且检测成本较低。     

高效液相色谱法测定鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留量的测量不确定度分析

根据JJG1059-1999<测量不确定度评定与结果表示>,使用SN/T0212.1-93方法对鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留量的测定结果作出了不确定度的评定.分析了影响鸡肉中二氯二甲吡啶酚残留量测量不确定度的因素,包括标准物质、标准曲线的拟和、样品峰面积的测量、试样称量、定容体积及样品处理过程等几个方面.当包含因子k=2时,测量结果的扩展不确定度为0.150 mg/kg.     

牧业资讯

供港澳活猪产地检验检疫行业标准7月1日施行由汕头检验检疫局主持制订的《供港澳活猪产地检验检疫操作规程(》标准号SN/T1551-2005),经国家质检总局审查通过,获准发布,并定于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》以《供港澳活猪检验检疫管理办法》为主要编写依据,从制订标准到获得标准发布,历时两年时间,该规程结合了汕头检验检疫局技术人员在供港澳活猪注册饲养场上多年来的管理经验及在供港澳活猪检验检疫方面的工作经验,规程制订的过程中更是广泛征求了从事供港…     

霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15株试验菌株荧光定量PCR检测只有VC菌株为阳性,表明该检测方法特异性强;灵敏性试验表明该方法的灵敏度为25 cfu/m L;稳定性和重复性试验表明同一样品重复检测4次,Ct值的变异系数均小于2%;对145份临床样品进行检测,共计检出2份VC阳性样品,与行标法(SN/T 2425—2010)检测结果一致。说明该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。     

电极法快速测定饲料中可溶性氯化物

利用氯离子选择性电极法测定饲料中可溶性氯化物 ,经过多次试验并与国标GB/T6439- 1 992测定饲料中可溶性氯化物方法进行比较 ,发现该方法快速、简捷、准确 ,所需仪器简单 ,操作方便 ,作一标准曲线方程可同时测定大量饲料样品 ,易于掌握 ,值得推广。1　检测材料1 1　仪器　酸度计或电位计 (精度 0 1mv)、氯离子选择性电极、双盐桥甘汞电极、磁力搅拌器、5 0mL纳氏比色管等。1 2　试剂及溶液　水为去离子水 ,试剂为分析纯。 0 5mol/L硝酸溶液 :吸取浓硝酸 35mL用水稀释至 1 0 0 0mL。 2 5mol/L硝酸钾溶液 :称取2 5 2 75g硝酸钾 ,加…     

马尾口岸进口饲料用鱼粉病原菌的调查

从2003年776批15．9万吨的进口鱼粉中，随机抽出81个样品，按(GB17012-1997)《感染性腹泻的诊断标准及处理原则-致泻性弧菌的检测》和《全国临床检测操作规程》，(GB478P14-P4)《食品卫生微生物学检验-沙门氏菌检验》和《NY/T550-2002)《动物和动物产品沙门氏菌检测方法》等方法进行鱼粉病原菌分离。结果TCBS培养基未分离到细菌；碱性营养琼脂分离到76株细菌，生化鉴定结果表明其中阴沟肠杆菌14株、腊样芽胞杆菌29株、凝结(固)芽胞杆菌10株和球形芽胞杆菌23株；从SS和DHL培养基上共分离到66株细菌，其中阴沟肠杆菌16株、非发酵菌16株、枸橼酸杆菌10株、沙门氏菌13株、大肠杆菌5株、非脱羧勒克氏菌4株、肺炎克雷伯氏菌2株。     

索氏抽提残余法与ANKOM滤袋法检测饲料粗脂肪含量的比较

为了比较索氏抽提残余法与ANKOM滤袋法测定饲料中粗脂肪含量的准确性与检测效率,试验从河北省和天津市的饲料加工厂采集12份饲料样品,采用索氏抽提残余法和ANKOM滤袋法同时对试验样品粗脂肪含量进行测定。结果表明:2种方法测定结果的相对偏差均在3%以下,符合《饲料中粗脂肪的测定》(GB/T 6433—2006)~([6])的要求;索氏抽提残余法和ANKOM滤袋法的差值在-0. 16～0. 32之间,比值在96. 57%～101. 94%之间,检测结果基本一致;经配对样本t检验,测定结果差异不显著(P0. 05)。说明二种方法均能准确检测出样品中粗脂肪含量,但索氏抽提残余法检测效率较低,而ANKOM滤袋法操作简易,检测效率较高,是值得推广的检测方法。     

供港澳活猪产地检验检疫行业标准7月1日施行

由汕头检验检疫局主持制订的《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN/T1551-2005),经国家质检总局审查通过,获准发布,并定于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》以《供港澳活猪检验检疫管理办法》为主要编写依据,从制订到获准发布历时两年时间,该规程结合了汕头检验检疫局技术人员在供港澳活猪注册饲养场上多年来的管理经验及在供港澳活猪检验检疫方面的工作经验,规程制订的过程中更是广泛征求了从事供港澳活猪检验检疫一线人员和有关专家的意见。在国家认…     

国家标准<饲料检测结果判定的允许误差>制定与实施的有关问题

中华人民共和国国家标准《饲料检测结果判定的允许误差》(GB/T 1 882 3- 2 0 0 2 )由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局于 2 0 0 2年 9月 6日发布 ,2 0 0 3年 3月 1日实施。为了准确理解和实施该标准 ,现将有关问题阐述如下。在本文以下论述中 ,将《饲料检测结果判定的允许误差》国家标准简称为《标准》。1　《标准》制定与实施的重要意义近些年来 ,我国各级饲料质量监督检验机构经常性地抽样检测饲料产品质量 ,实行奖优惩劣 ,为保证我国饲料产品质量的不断提高起到了积极的促进作用。我国的饲料质量标准和世界各国的饲料质量标准一…     

农业部发布《高致病性禽流感疫情判定及扑灭技术规范》等9项标准

农业部于 2 0 0 4年 2月 17日发布第 347号公告。经专家审定通过 ,农业部审查批准 ,将《高致病性禽流感疫情判定及扑灭技术规范》等 9项标准发布为中华人民共和国农业行业标准 ,自发布之日起实施。这 9项标准分别为 :高致病性禽流感疫情判定及扑灭技术规范 (NY 76 4- 2 0 0 4 ) ;高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范 (NY/T 76 5 - 2 0 0 4 ) ;高致病性禽流感无害化处理技术规范 (NY/T 76 6 - 2 0 0 4 ) ;高致病性禽流感消毒技术规范 (NY/T 76 7- 2 0 0 4 ) ;高致病性禽流感人员防护技术规范 (NY/T 76 8- 2 0 0 4 ) ;高致病性…     

热点聚焦

由汕头检验检疫局主持制订的《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》(标准号SN/T1551-2005),经国家质检总局审查通过,获准发布,并定于2005年7月1日起施行。这是我国首次发布的供港澳活猪产地检验检疫行业标准。《供港澳活猪产地检验检疫操作规程》以《供港澳活猪检验检疫管理办法》为主要编写依据,从制标到获准发布历时两年时间,该规程结合了汕头检验检疫局技术人员在供港澳活猪注册饲养场上多年来的管理经验及在供港澳活猪检验检疫方面的工作经验,规程制订的过程中更是广泛征求了从事供港澳活猪检验检疫一线人员和有关专家的意见。在国家认…     

吸附ELISA检测奶牛副结核病

应用吸附ELISA对2批澳大利亚及1批新西兰进口奶牛进行副结核病的检测,结果2头阳性反应,其余为阴性反应。特异性试验和重复性试验表明吸附ELISA在进口奶牛副结核病的检测中,结果准确、特异性高、重复性好,且具有快速、灵敏、操作简单的特点,适合应用于大批量样品副结核病的检测。