猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

以猪圆环病毒2型(PCV2)遗传标记毒株为毒种,经细胞培养传代,优化了病毒增殖条件,获得较高滴度的病毒培养物用于PCV2灭活疫苗的研制。为了比较不同免疫佐剂的效果,本试验对国产矿物质白油和铝胶两种佐剂以及赛比克公司提供的MONTANIDETMISA206、ISA15VG、IMS1315VG3种佐剂配制的灭活疫苗进行了猪体免疫试验。通过临床观察、血清抗体效价测定,确认ISA15VG佐剂配制的疫苗在增强免疫效果方面优于其它佐剂。按5种佐剂免疫效果排序为ISA15VG、IMS1315VG、铝胶、ISA206、国产白油。ISA15VG佐剂属于水包油剂型,可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、持续时间长,有可能成为新型PCV2灭活疫苗佐剂的候选。     

牛传染性鼻气管炎病毒LN01/08株灭活疫苗的研制

为研制牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)灭活疫苗,本研究以国内分离鉴定的IBRV LN01/08株为种毒,优化病毒增殖条件,获得病毒滴度达108.0TCID50/mL,将其灭活制备疫苗.为比较不同免疫佐剂的效果,分别以矿物质白油和Montanide ISA206佐剂配制灭活疫苗,进行牛体免疫试验.临床观察和血清中和抗体检测结果表明,Montanide ISA206佐剂乳化的疫苗在降低副反应和增强免疫效果方面优于矿物质白油佐剂.应用Montanide ISA206佐剂制备3批灭活疫苗,并对其安全性和免疫保护效果进行测定.结果表明该疫苗安全可靠,对强毒攻击可产生较好的抵抗力,攻毒保护率达80%.疫苗在2℃～8℃保存12个月后仍能保持良好的免疫效果.     

猪圆环病毒2型-肺炎支原体二联灭活疫苗佐剂的筛选

为了筛选出理想的猪圆环病毒2型(PCV2)-肺炎支原体(Mhp)二联灭活疫苗免疫佐剂,试验用灭活的PCV2病毒液和猪Mhp菌液,分别与进口白油佐剂、SEPPIC MONTANIDE ISA 206佐剂和卡波姆佐剂制成三种抗原含量相同的PCV2-Mhp二联灭活疫苗免疫仔猪,比较三种疫苗对仔猪的安全性和免疫效力。安全性试验结果表明:矿物白油佐剂疫苗免疫仔猪后,试验猪体温反应较大,部分试验猪注射部位出现肉芽肿;ISA 206佐剂疫苗和卡波姆佐剂疫苗免疫仔猪后,试验猪全身和局部反应较小。免疫效力试验结果表明:卡波姆佐剂疫苗PCV2部分的免疫效力优于矿物白油佐剂疫苗和ISA 206佐剂疫苗,保护率达100%;在Mhp保护方面,卡波姆佐剂也表现出明显的优势,卡波姆佐剂疫苗免疫后对仔猪的肺炎病变减少率达78.6%。说明卡波姆佐剂可作为PCV2-Mhp二联灭活疫苗进一步研究的佐剂。     

5种塞内卡病毒灭活疫苗佐剂的比较研究

为研究比较5种塞内卡病毒疫苗佐剂,分别用4种自主研发佐剂和进口ISA206佐剂配制塞内卡病毒灭活疫苗,检测疫苗的理化性质、安全性及免疫效力,并对检测结果进行对比分析。结果显示,进口ISA206佐剂疫苗黏度为43.02 cP,自主研发佐剂疫苗黏度均在27.88 cP以下,其他理化性质无差异;5批疫苗安全性试验均未见明显异常;5批疫苗免疫动物后均可诱导机体产生中和抗体,二免后14 d抗体滴度在2¹¹以上,4批自主研发佐剂疫苗免疫组抗体滴度水平高于进口ISA206佐剂疫苗约1个滴度,攻毒保护结果均在4/5以上,2批自主研发佐剂疫苗免疫组保护率可达5/5。结果表明,用4种自主研发佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗质量不低于用进口ISA206佐剂制备的塞内卡病毒灭活疫苗。     

口蹄疫纳米乳疫苗免疫持续期的试验研究

试验用同一批次相同抗原含量的口蹄疫病毒灭活抗原,分别采用纳米乳佐剂和ISA206佐剂配制口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗,并对仔猪进行免疫,免疫后6个月内用液相阻断ELISA方法检测O型、A型免疫抗体效价(lg)。结果:免疫后6个月内纳米乳疫苗免疫猪产生的抗体lg平均值均高于ISA206佐剂疫苗,抗体水平在免疫后1个月达到最高。免疫后第6个月,纳米乳疫苗O型抗体lg平均值为2.19,A型抗体lg平均值为2.175,按液相阻断ELISA试剂盒的判定标准免疫猪抗体lg≥1.8,具有99%以上保护效力,纳米乳疫苗属于完全保护范围,而ISA206佐剂疫苗属于不完全保护范围。     

两种进口佐剂对绵羊肺炎支原体灭活疫苗免疫小鼠抗体水平影响的研究

为了筛选绵羊肺炎支原体(MO)灭活疫苗的佐剂,试验采用绵羊肺炎支原体新疆分离株扩大培养后得到灭活抗原,分别与两种不同佐剂ISA 201和ISA 206混合乳化制备灭活疫苗,再以不同剂量免疫健康成年小鼠,最后用MO间接血凝的方法分别测定二免后第7,14,21,28天血清抗体效价。结果表明:ISA 206佐剂疫苗0.3 m L剂量组在第14天抗体效价就达到较高水平,第21天后开始下降;ISA 206佐剂疫苗0.2 m L剂量组在二免后第14天抗体效价达到高峰(1∶128),且在第21天仍维持抗体高峰,第28天开始下降;ISA 201佐剂疫苗0.3 m L剂量组在二免疫后第14天抗体效价达到高峰,维持1周后开始下降;ISA 201佐剂疫苗0.2 m L组免疫应答较慢,在二免后第21天才达到最高抗体效价(1∶64)。说明ISA 206佐剂诱导产生MO抗体较快,维持时间长,优于ISA 201佐剂,可作为MO灭活疫苗的优选佐剂。     

5种佐剂对猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫效果的影响

为了筛选得到可以显著提高猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗免疫效果的佐剂,本研究将ISA 206、ISA 201和市场上常见的3种其他佐剂分别与抗原进行乳化,制备成疫苗后进行小鼠免疫,同时设置空白对照组和商品疫苗对照组,测定小鼠血清中ELISA抗体的水平。结果显示佐剂2、3、5产生的抗体水平显著超过其他试验组,同时抗原稳定剂与佐剂3和佐剂5复配使用,抗体水平显著提升。试验结果的得出可以为开发新型高效的圆环病毒疫苗提供一定的数据支持。     

猪圆环病毒2型合成肽疫苗佐剂筛选与免疫保护性研究

【目的】筛选更安全高效的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)合成肽疫苗佐剂。【方法】将IMS 251C VG、GEL 02 PR、ISA 15A VG、ISA 206 VG、ISA 61 VG、台湾细菌鞭毛、卡波姆、多糖共8种佐剂与适量PCV2多肽抗原按照特定方法配制成不同疫苗,并验证其物理性状,采用小鼠试验初步检验疫苗安全性及免疫效果,筛选出较优的佐剂进行仔猪免疫攻毒保护试验,进一步评估各疫苗的免疫保护效果。【结果】物理性状显示,所有疫苗稳定性均较好,4℃保存期均超过12个月。ISA 61 VG油佐剂黏度较高且乳滴粒径较大,ISA 15A VG、ISA 206 VG双相佐剂次之,其余水佐剂均较低较小。小鼠试验结果显示,除台湾细菌鞭毛佐剂外其他佐剂安全性均良好;小鼠ELISA抗体水平检测结果显示,ISA 61 VG、GEL 02 PR、ISA 206 VG组免疫效果明显高于其余疫苗组;综合评定安全性和免疫效果,筛选ISA 61 VG、GEL 02 PR、卡波姆、多糖、ISA 206 VG共5个佐剂组进行仔猪免疫攻毒保护试验。仔猪免疫攻毒保护试验...     

猪圆环病毒2型灭活疫苗(YZ株)的制备及对仔猪免疫效力的评价

运用不同佐剂,并配合不同剂型,制备猪圆环病毒2型(PCV2)灭活疫苗(YZ株),然后评价各疫苗对仔猪的免疫效力。制备的灭活疫苗包括:用10号白油制备油包水(W/O)剂型疫苗;用Montanide~(TM)ISA 206 VG佐剂制备水包油包水(W/O/W)剂型疫苗;分别用Montanide~(TM) ISA 15A VG和ISA 35 VG佐剂,制备水包油剂型(O/W)剂型疫苗;用Montanide~(TM) IMS 251C VG佐剂,制备水(W)剂型疫苗。除白油组外,其余4组疫苗安全性较好。5组疫苗免疫效力试验表明,ISA 206 VG(W/O/W)疫苗组首免后2周和3周PCV-2荧光抗体水平显著高于白油(W/O)和IMS 251C VG(W)疫苗组(P0.05);攻毒后猪血清中病毒PCR检测,ISA 206 VG(W/O/W)疫苗组14 d均为阴性,其他免疫组21~28 d转为阴性;猪淋巴结免疫组化检测,ISA 206 VG(W/O/W)、ISA 15A VG(O/W)疫苗组均未出现PCV-2阳性,且该两组中仔猪均未出现连续2 d以上的高热症状。以上结果表明,ISA 206 VG(W/O/W)PCV2灭活疫苗(YZ株)对仔猪具有较好的免疫保护效力,可进行后续的临床扩大试验。     

新型纳米佐剂用于口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗的研究

采用新型纳米佐剂按照不同比例配制口蹄疫O型、Asia Ⅰ型双价灭活疫苗,对疫苗的各项指标进行测定,同时免疫接种SPF豚鼠,通过测定血清抗体效价对新型纳米佐剂的免疫增强效果进行初步评估。结果初步表明新型佐剂疫苗黏度低易注射、稳定性好、安全、免疫副反应小、其免疫效果与采用ISA206佐剂制备的口蹄疫灭活疫苗免疫效果相当。     

不同佐剂制备的猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗免疫效果的比较研究

佐剂的剂型对疫苗稳定性、安全性及免疫效力均有一定的影响。为筛选优质佐剂以提高猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的免疫效果,分别使用水包油包水佐剂(ISA206)、水包油佐剂(ISA28VG)、油包水佐剂(ISA70VG)及水佐剂(Gel02)制备疫苗,并检测各组疫苗理化特性、安全性及免疫效力。结果显示：4种佐剂制备的猪伪狂犬灭活疫苗的理化特性、安全性均达到质量标准;免疫效力比较中,ISA70VG组相比其他免疫组具有较高的抗体水平且持续时间较长,其次为ISA206组;攻毒后,ISA70VG组和ISA206组无任何临床症状及病变。综合安全性及免疫效力,ISA206佐剂及ISA70VG更适合作为制备猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的佐剂。     

猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究

为确定猪捷申病毒(Porcine Teschovirus,PTV)Swine/CH/IMH/03株免疫原性,本研究将该PTV分离株灭活后分别与氢氧化铝佐剂和Montanide ISA 50V2佐剂混合,制成油佐剂疫苗,并采用不同免疫程序接种实验猪后对病毒抗体进行检测。抗体检测结果表明:PTV Swine/CH/IMH/03分离株能够诱导实验动物产生较高抗体水平,并显著高于对照组;与氢氧化铝佐剂混合制成的佐剂疫苗免疫效果优于Montanide ISA 50V2佐剂;而且一次免疫组与二次免疫组没有明显差异。通过PTV Swine/CH/IMH/03株免疫原性的研究,为后续猪捷申病的预防工作提供技术支持。     

口蹄疫A型油佐剂和leo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究

用实验室配制的口蹄疫油佐剂和leo佐剂A型弱毒灭活疫苗各免疫6月龄健康敏感牛（乳鼠中和抗体滴度小于1：4）5头，免疫后每月采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验检测免疫牛血清中的口蹄疫A型中和抗体的产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，口蹄疫弱毒灭活疫苗免疫牛，可以产生高滴度的血清中和抗体，免疫牛血清中和抗体效价均在免疫后1个月左右达到高峰。油佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较高，但下降比较迅速；leo佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较低，但下降比较平缓。     

不同免疫佐剂对猪PCV2灭活疫苗效果的影响

分别用ISA11R、ISA35和ISA28三种水包油型佐剂制备PCV2灭活疫苗样品,并依次小鼠腹腔注射进行免疫效果比较。临床观察、血清抗体检测及免疫攻毒保护试验结果表明:相比矿物油佐剂ISA11R以及矿物油与非矿物油混合佐剂ISA28而言,非矿物油佐剂ISA35制备的疫苗免疫安全性好,免疫保护率高,可作为PCV2灭活疫苗理想的候选佐剂。     

3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究

为制备猪圆环病毒2型商品化亚单位疫苗选择良好的佐剂,对由水性佐剂GEL 01、白油佐剂以及氢氧化铝胶佐剂分别制备的3种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的免疫效果进行比较研究。本实验选取3~4周龄猪圆环病毒2型抗体阴性猪30头,根据试验疫苗接种情况分为6组,分别为:3种不同佐剂制备的亚单位疫苗(A组、B组和C组)、商品化疫苗(D组)以及空白对照组和攻毒对照组,然后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况、抗体水平以及攻毒保护情况。结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪圆环病毒2型亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应、能刺激机体产生良好的ELISA抗体水平和免疫效果,但水性佐剂GEL 01制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,综合抗体水平、免疫效果等因素,水性佐剂GEL 01制备的疫苗在临床使用上更具优势,为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。     

大肠杆菌不同佐剂灭活苗血清抗体与卵黄抗体消长规律的研究

笔者用分离得到的猪源致病性大肠杆菌制成灭活疫苗免疫产蛋鸡,定期检测蛋鸡血清和卵黄的抗体效价。试验结果表明,免疫蛋鸡血清中和卵黄中抗体的消长规律相似,同一时期的血清抗体比卵黄抗体较高。同时比较3种不同佐剂疫苗产生的效果,结果表明,氟氏佐剂和氢氧化铝佐剂疫苗产生的抗体效价较白油佐剂疫苗产生的抗体效价高,但氟氏佐剂疫苗和白油佐剂疫苗较氢氧化铝佐剂疫苗抗体持续时间长。综合比较,氟氏佐剂较其他2种佐剂产生的抗体效价高、持续时间长。     

ISA 206佐剂配制的猪细小病毒病油乳剂疫苗的检测

为验证Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂对猪细小病毒病灭活疫苗的效果,本实验用Seppic ISA 206VG佐剂替代白油佐剂,配制2批猪细小病毒病灭活疫苗,检测结果:疫苗的物理性状良好,接种乳鼠全部健活,接种豚鼠后28d全部产生抗体反应。证实Seppic公司的MONTANIDElMISA 206VG佐剂配制的猪细小病毒病灭活疫苗具有良好的安全性和免疫效力。     

重组H5N3亚型禽流感细胞毒灭活疫苗免疫佐剂效果的评价

为评价佐剂对疫苗免疫效果的影响,本试验以反向遗传学技术拯救的重组H5N3亚型禽流感病毒为种毒,对国产矿物油以及赛比克公司提供的MontanideTM ISA 70M VG(简称7OM)和MontanideTM ISA 206 VG(简称206)3种佐剂制备的灭活疫苗进行了SPF鸡免疫攻毒试验.结果表明国产矿物油佐剂组与70M佐剂组都能对SPF鸡100%保护,206佐剂组仅能保护40%,攻毒的SPF鸡发病,但不死亡;从抗体水平上比较发现70M佐剂组稍好于国产矿物油佐剂组,但两组之间差异不显著,而这两组与206佐剂组差异极显著.这3种佐剂组免疫鸭均能够诱导产生较高的抗体水平,70M佐剂组优于国产矿物油佐剂组和206佐剂组,但3者差异不显著.用70M系的8种佐剂MontanideTM ISA 70 essai Mi(i-1-8)(简称70Mi)佐剂乳化的疫苗免疫SPF鸡,结果表明70M佐剂组效果最好.攻毒后免疫鸡不排毒,而且无临床症状;统计学分析显示70M佐剂组与所有70Mi佐剂组差异均显著.这些结果表明70M佐剂可以作为新型疫苗佐剂用于禽流感疫苗的制备.     

不同类型的免疫佐剂在口蹄疫疫苗中的应用研究

对本实验室研制的纳米佐剂M12,赛比克公司的纳米佐剂IMS1313、羟基磷灰石凝胶佐剂HA以及赛比克公司的矿物油佐剂ISA206,配制口蹄疫O型灭活疫苗,通过相关物理性状检测,比较4种佐剂的乳化效果。结果显示,4种佐剂乳化的疫苗物理性状均达到质量标准。对小鼠的免疫试验,分别免疫16g雌性BALB/C小鼠10只,免疫后每隔7d采集血样,共计90d,进行液相阻断ELISA试验,结果显示,自制M12纳米佐剂免疫平均抗体效价最高,且持续在较高水平。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。