尖孢镰孢菌室内生物药剂筛选

在室内选用了6种生物药剂对尖孢镰孢菌进行了毒力测定。结果表明:在供试的药剂中,抑菌效果较好的药剂有低聚糖素、春雷霉素、克菌康,其中低聚糖素对尖孢镰孢菌的抑菌效果最好,EC50为18.20mg·L-1,春雷霉素次之,EC50为20.49mg·L-1。     

几丁质酶编码基因FolCTS3参与调控尖孢镰刀菌几丁质酶活性和致病力的研究

番茄枯萎病是一种由尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici, Fol)引起的土传植物病害,严重影响番茄农业生产。几丁质酶(CTS)在丝状真菌中保守存在,在真菌细胞壁形成过程中起着关键作用,但是否参与尖孢镰刀菌的致病过程目前尚未见报道。在Fol中鉴定到2个几丁质酶编码基因FolCTS2和FolCTS3,利用基因敲除方法研究其在病原菌致病中的功能。结果表明:缺失FolCTS3不影响Fol菌丝生长及对非生物胁迫的耐受能力,但显著影响几丁质酶活性和致病力,其缺失突变体的几丁质酶活性和致病能力显著下降;而缺失FolCTS2对Fol生物学表型无显著影响。这一研究提示几丁质酶编码基因FolCTS3参与调控尖孢镰刀菌的几丁质酶活性和致病过程,为解析尖孢镰刀菌的致病分子机制及番茄枯萎病防治策略的制定提供了理论依据。     

尖镰孢菌CS-20对黄瓜枯萎病的防治效果

为测试尖镰孢菌CS-20防治苗期黄瓜枯萎病的效果,将尖镰孢菌CS-20与致病菌先后接种在黄瓜幼苗上,从接种浓度和作用时间两个方面对其防治效果进行评价,结果表明:作用时间为11 d、接种浓度为4×106cfu/mL时,尖镰孢菌CS-20对黄瓜枯萎病的防治效果最佳。     

辣椒根腐病菌-尖镰孢菌生物学特性研究

对尖镰孢菌病菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)致病性和生物学特性进行了研究,结果表明,分离的尖镰孢菌具有致病性,回接症状与田间一致;PDA为病菌培养的最适培养基,病菌生长的最适宜温度范围为25～30℃,pH值为3～12.病菌均能生长,最适pH范围为6～8.以麦芽糖为碳源病菌生长最快,D-半乳糖最慢;以赖氨酸为氛源病菌生长最快,甲硫氨酸为最慢.总体上,孢子萌发和病菌生长对温度、酸碱度、营养物质要求基本一致,光照对孢子萌发的影响不明显.     

转录组分析产紫篮状菌Q2菌株抑制尖镰孢菌生长的潜在机制

为明确产紫篮状菌(Talaromyces purpureogenus)Q2菌株抑制苦瓜枯萎病病原菌尖镰孢菌苦瓜专化型(Fusarium oxysporum f.sp.momordicae)SG-15菌株生长机制,利用共培养法测定菌株Q2对菌株SG-15菌丝形态和分生孢子活性的影响,同时采用转录组学技术分析菌株S G-1...     

尖孢镰孢菌对抗病和感病黄瓜幼苗生长及叶片游离氨基酸的影响

为明确黄瓜对尖孢镰孢菌的抗性机理,选择黄瓜抗病和感病材料进行尖孢镰孢菌接种,以接种灭菌水为对照,分析接种后抗病和感病材料的生物学性状及叶片游离氨基酸的动态变化规律差异。结果显示:①接种后20 d,抗病材料的株高、茎粗、叶面积、总根长、根总面积、根总体积、根冠比、壮苗指数与对照差异不显著;而在感病材料中表现为染菌处理显著低于对照,其中总根长表现最为明显,较对照减少51.02%。②接种病原菌后,抗病材料游离氨基酸呈下降趋势,感病材料游离氨基酸呈上升趋势。接种病原菌后8、12、16、20d,抗病材料游离氨基酸总量几乎不受病原菌的影响,感病材料的游离氨基酸总量分别较对照增加14.05%、32.54%、56.29%、149.10%。③在测定的34种游离氨基酸中,有16种在抗病和感病材料中的变化规律明显不同。瓜氨酸和丙氨酸在抗病材料中表现为染菌处理小于对照或与对照差异不显著,而在感病材料中表现为染菌处理大于对照;酪氨酸、牛磺酸、蛋氨酸、亮氨酸、β氨基异丁酸、鸟氨酸、赖氨酸和脯氨酸的表现则相反。接种后随着幼苗生长,瓜氨酸、天冬酰胺、磷酸丝氨酸、尿素、β丙氨酸、组氨酸、鸟氨酸和精氨酸含量在抗病材料中呈下降趋势,而在感病材料中呈上升趋势。推测瓜氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、磷酸丝氨酸、尿素、β丙氨酸、组氨酸和精氨酸为促菌氨基酸,酪氨酸、牛磺酸、蛋氨酸、亮氨酸、β氨基异丁酸、赖氨酸和脯氨酸为抑菌氨基酸。上述结果为黄瓜抗枯萎病育种提供参考依据和理论背景。     

尖镰孢菌非致病菌株对南方根结线虫数量的控制

温室盆钵实验证实尖镰孢菌（Fusarium oxysporum)非致病菌株（S162）可有效控制南方根结线虫（Meloidogyme incognita)的群体数量，在F.oxysporum M,incognita和Bacillus cereus(蜡状芽孢杆菌）＋F oxysporum M.incognita处理中，每克根卵囊仅为对照K－M（接种M.incognita) 的1／3和1／5。该菌株处理的番茄幼苗的地上鲜重，根重和根长均高于对照，且处理5周后在番茄根上没有分离到该菌，盆钵实验中，F.oxysporum菌液对根结线虫和大豆胞囊线虫的侵染抑制率分别为46．4％和53．6％，该菌株的培养滤液能抑制根结线虫和大豆胞囊线虫卵的孵化，经琼脂平行测定，其抑制率分别为18．4％和14．2％，     

人参尖镰孢菌原生质体制备条件优化及绿色荧光蛋白转化

为人参根腐病菌的侵染及防治提供可视化的检测和分析手段,通过摸索分生孢子最适萌发时间、酶解液组成、酶解温度、摇床转数及渗透压稳定剂种类,研究人参根腐病菌-尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)原生质体制备技术.结果 表明:将人参尖镰孢菌野生型菌株0083分生孢子在YEPD培养基中培养11h,酶解温度37℃、摇床转数180 r/min,渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaC1的条件下,酶解液(崩溃酶、溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶质量浓度分别为0.01,0.03,0.02,0.005 g/mL)酶解0.25 g菌丝时,收获的菌丝体最有利于原生质体的形成和释放,共获得2.8× 107/mL原生质体.用聚乙二醇PEG介导外源DNA随机插入的方法,成功获得具有绿色荧光信号和潮霉素B筛选标记的转化子,转化效率(以单位质量的DNA的转化子数计)为1400/mg.选取转化子FOG1菌株经过6代继代培养后,菌落形态、产孢量和绿色荧光蛋白的表达与菌株0083无明显差异.因此,利用聚乙二醇(PEG)为媒介的遗传转化体系是稳定高效的遗传转化体系.     

尖孢镰孢菌与番茄互作早期milRNA调控功能研究

[目的]MicroRNA通过调控其靶基因在生物活动中起到重要的作用,本研究目的是为了明确尖孢镰孢菌与番茄互作早期相关milRNAs的分子功能及调控机制。[方法]采用实时荧光定量PCR法对尖孢镰孢菌番茄专化型菌株侵染寄主早期pri-milRNAs和milRNAs靶基因进行基因表达分析,利用STRING蛋白互作网络数据库和Cytoscape软件预测该菌株milRNAs与靶基因间的蛋白互作网络,并结合DAVID在线分析工具对相关基因进行生物学功能分析。[结果]实时荧光定量PCR结果表明,供试的pri-milRNA＿2a和pri-milRNA＿2b与FOXG＿03470、pri-milRNA＿3b与FOXG＿04910、pri-milRNA＿4与FOXG＿08812、pri-milRNA＿6与FOXG＿00067表达趋势基本相反,4个miLRNA与相应基因可能存在靶标关系;蛋白互作网络预测结果可知,尖孢镰孢菌fox＿milRNA＿1、fox＿milRNA＿2、fox＿milRNA＿3和fox＿milRNA＿8的靶基因间互作较为紧密。其中,fox＿milRNA＿1的靶基因FOXG＿04240与f...     

尖孢镰刀菌西瓜专化型遗传转化体系的优化

以尖镰孢霉西瓜专化型[Fusarium oxysporum Schlechtendahl ex Fries f.sp.niveum(E.F.Smith)Snyder et Hansen]为试材,以农杆菌[Agrobacterium tumefaciens(Smith & Townsend)Conn=Rhizobium radiobacter(Beijerincket van Delden)Yonng et al]的T-DNA为介导,将抗潮霉素基因插入西瓜枯萎病菌基因组中,对遗传转化体系进行优化,并对5个突变体菌株和野生型镰刀菌的最适生长温度和培养基进行筛选.结果发现,乙酰丁香酮(AS)浓度为300～400μmol/L,农杆菌OD660为0.1～0.2,野生型镰刀菌分生孢子浓度为(0.1～5.0)×106个/mL时,转化效率最高,约为500个转化子/106个分生孢子;F3181、F3280、F2192、F2195、F3179突变菌株的最适生长温度为25～28℃.     

分蘖洋葱鳞茎粗提物对西瓜枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)的影响

采用分蘖洋葱鳞茎粗提物对西瓜枯萎病病原(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)菌丝生长、孢子萌发、病原菌生物量及产孢量等抑制作用进行研究.结果表明,分蘖洋葱鳞茎粗提物对西瓜枯萎病病原菌的菌丝生长、孢子萌发率、病原菌生物量及产孢量均有一定的抑制作用.当分蘖洋葱鳞茎粗提物浓度为1 000 mg·mL...     

西瓜专化型尖孢镰刀菌的分离鉴定及水稻根系分泌物对其生长的影响

利用尖孢镰刀菌选择性培养基从西瓜枯萎病发病部位分离出病原菌,通过Booth＇s镰刀菌分类鉴定标准和专化型试验,确定该菌株为西瓜专化型尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum f．sp．niveum）。以该菌株为材料,研究水稻根系分泌物对其生长的影响。结果表明,2个水稻品种ELIO和4007的根系分泌物均能显著抑制其孢子萌发和孢子产生。当根系分泌物的加入量为1．5mL时,ELIO和4007对孢子萌发的抑制率分别为37．8％和41．0％;当加入20mL水稻根系分泌物时,ELIO和4007对孢子产生的抑制率达到96．3％和76．4％。水稻根系分泌物对西瓜尖孢镰刀菌孢子产生过程的抑制作用主要发生在孢子萌发阶段和孢子在尖孢镰刀菌瓶状小梗上的生成阶段,而对菌丝营养生长没有影响。西瓜与旱作水稻间作的盆栽试验表明,间作系统中西瓜苗的鲜重和株高分别提高了186．0％和80．5％。单作西瓜枯萎病发病率为66．7％,死亡率为44．4％,而间作处理中西瓜均生长正常。间作条件下,西瓜根际土壤中的尖孢镰刀菌数量显著降低,与单作根际土壤相比减少了91％。表明：水稻根系分泌物能显著抑制西瓜专化型尖孢镰刀菌生长,采用旱作水稻与西瓜间作能有效缓解西瓜枯萎病的发生。     

新疆西瓜枯萎病菌营养体亲和性的初步研究

选用１５个采自新疆不同地区的西瓜枯萎病菌株,在含ＫＣｌＯ３培养基上诱导出抗氯酸盐的不能利用硝酸盐营养体突变株（ｎｉｔｍｕｔａｎｔ）,在不同氮源培养基上划分出ｎｉｔ１,ｎｉｔ２,ｎｉｔ８,ｎｉｔＭ和ｎｉｔＸ５种突变类型,其中ｎｉｔ１出现频率最高。将各菌株的ｎｉｔ突变株和测试菌株的ｎｉｔＭ或ｎｉｔ８配对,结果１５个菌株分为６个不同的营养体亲和群（ＶＣＧｓ）,其中１号小种的菌株划为ＶＣＧ１亲和群,０号小种划为ＶＣＧ２,２株非致病菌株分别为ＶＣＧ３和ＶＣＧ４,２株只出现ｎｉｔＸ突变类型的菌株分别为ＶＣＧ５和ＶＣＧ６。表明营养体亲和群与生理小种存在一致关系,营养体亲和性可以作为西瓜枯萎病菌生理小种鉴定和病原菌种群遗传结构研究的有效手段之一。     

河北省西瓜枯萎病菌形态比较和致病力测定

对从河北省西瓜种植区采集到的西瓜枯萎病病株进行病菌的分离培养,获得了38株西瓜枯萎病菌菌株。通过在PSA培养基上培养和观察,发现以菌落形态特征为依据,可将供试菌株大体分成三类：I类,气生菌丝呈白色绒状,菌落颜色为白、淡紫、紫色;Ⅱ类,气生菌丝呈白色絮状,菌落颜色多为淡紫色;Ⅲ类,气生菌丝不发达,菌落颜色为白色、淡紫色。以中等抗性的西瓜品种“Crimson sweet”为寄主进行致病力测定,结果表明不同菌系的致病力差异达到了极显著水平,致病力最强的是来自隆尧的FON3菌株,其次是来自望都的FON15菌株,最弱的是来自大名和平乡的FON10和FON12。     

几种典型生物与化学杀菌剂对西瓜枯萎病菌的抑菌作用

采用管碟法测定8种典型生物与化学农药制剂对西瓜枯萎病菌(尖孢镰刀菌西瓜专化型,Fusarium oxysporumf.sp.niveum)的抑菌活性.结果表明,代森锰锌、盐酸吗啉胍、中生菌素、春雷霉素对西瓜枯萎病菌无抑菌活性,多菌灵、枯草芽孢杆菌、甲基托布津、乙蒜素对西瓜枯萎病菌具有较强抑菌活性,抑菌圈半径依次为9.6、7.5、4.8、3.5 mm.采用生长速率法测定药剂对西瓜枯萎病菌的相对抑菌率及EC50,结果表明,多菌灵的抑菌活性最强,持效期大于14d,16 mg/L处理药后14d相对抑菌率仍为100％;其次为生物农药活菌制剂枯草芽孢杆菌,其EC50为1.437 2 mg/L,是用于防治西瓜枯萎病的较理想药剂.     

西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)营养体亲和群研究

从浙江各地、江苏南部和上海等地采集的西瓜枯萎病株和其他瓜类植株上,分离纯化尖孢镰孢霉(Fusarium oxysporum)菌种23个(每个菌种来自一个植株样本).接种试验表明:酉瓜植株上分离的19个菌种,有16个对长蜜、新红宝和圳宝等3个酉瓜品种表现为致病性,而其他菌种表现为非致病性.所有23个菌种均获得抗氯酸盐的硝酸盐营养突变株(nit mutant).根据来自同一菌种nit突变株的营养体亲和性与突变类型鉴定,选择3个西瓜致病菌的Nit M类型突变株(W 024～5,W 072～4和W 014～9)为营养体亲和性测试株.各菌种上获得的nit突变株分别与测试株作营养体亲和性配对反应,23个菌种可划分成8个营养体亲和群(VCG)和1个营养体自身非亲和类型.16个西瓜致病菌中,除一个为营养体自身非亲和类型外,其余均属同一亲和群(M1001),而与西瓜非致病菌不存在营养体亲和反应.由此显示:营养体亲和群与西瓜枯萎病菌存在相关性,而与地理分布无关.     

西瓜、水稻根分泌物及酚酸类物质对西瓜专化型尖孢镰刀菌的影响#br#

 【目的】探讨西瓜、水稻根分泌物及其中的酚酸类物质对西瓜专化型尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f. sp. niveum,FON)的影响,阐释西瓜枯萎病的发生和西瓜/旱作水稻间作系统改善西瓜连作枯萎病的机理。【方法】营养液培养法收集西瓜根分泌物(REW)和水稻根分泌物(RER),研究其对FON生长的影响;HPLC法分离鉴定REW和RER中的酚酸类物质,并通过外源添加法研究该类物质对FON生长的影响。【结果】REW能显著促进FON孢子萌发和产孢,与对照相比,1.0 mL和5.0 mL 的REW对FON孢子萌发的促进率分别为46.9%和59.2%;在0.1 mL至2.0 mL范围内,REW对FON产孢的促进率从10.8 %逐渐增加到84.6 %;而RER能显著抑制FON孢子萌发和产孢,1.0 mL和5.0 mL RER对FON孢子萌发抑制率分别为14.3 %和6.1 %;并在0.1 mL至2.0 mL范围内,对该菌产孢的抑制率由4.6%增至37.5%。在REW和RER中同时检测到水杨酸、对羟基苯甲酸和邻苯二甲酸,而阿魏酸和香豆酸分别单独存在于REW和RER中;且RER中以香豆酸含量最高(占总量的37.9%);其酚酸总量是REW的1.4倍。综合FON孢子萌发、产孢能力和菌丝生长三项测定指标,香豆酸的抑菌效果最显著,抑制率分别为9.1%—70.5%、24.1%—100.0%和2.5%—47.5%,其次是水杨酸;而阿魏酸、对羟基苯甲酸、邻苯二甲酸对FON孢子萌发、产孢有不同程度的促进作用,以阿魏酸最为突出,浓度为40—160 mg•L-1时促进率分别为28.6%—114.3%和17.7%—54.8%。【结论】西瓜根分泌物对FON有刺激作用而水稻根分泌物对FON却具有抑制作用,这为阐释西瓜/旱作水稻间作系统改善西瓜连作枯萎病提供了理论依据。     

西瓜枯萎病菌拮抗枯草芽孢杆菌BTF发酵条件优化

为提高拮抗细菌对西瓜枯萎病菌的拮抗作用,应用单因素和响应面对拮抗枯草芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件进行优化。结果表明,最适发酵培养基为葡萄糖20 g/L、蛋白胨10 g/L,磷酸二氢钾5 g/L。最佳发酵培养的时间为60 h,初始p H为7.0,接种量、培养温度和转速分别为9.95%、36℃和120 r/min。在该条件下进行验证,抑菌率为62.12%,可作为西瓜枯萎病生物防治的潜在微生物制剂选项。