羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

对陕西省关中某奶山羊养殖场呼吸道症状引发死亡的羔羊进行病原检测.无菌采集死亡羔羊肺脏组织接种50 mL/L绵羊血琼脂平板,分别置于恒温培养箱与厌氧培养箱中36℃±1℃培养24 h,厌氧培养平板无菌生长,恒温培养血平板上可见大量溶血的灰白色、半透明的圆形菌落,挑取单菌落纯化培养后对分离株进行染色镜检、生化鉴定、16S r...     

云南羊溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

采用PCR鉴定、16S rDNA基因鉴定方法,对从云南某羊场病羊肺脏中分离到的1株革兰氏阴性小球杆菌进行系统鉴定,并对分离株的致病性和药物敏感性进行研究。鉴定结果表明:分离株溶血性曼氏杆菌PCR鉴定为阳性;分离株16S rDNA基因序列与GenBank上公布的其它溶血性曼氏杆菌同源性为96%~99%,与溶血性曼氏杆菌D171参考株同源性高达99%,因此将分离株系统鉴定为溶血性曼氏杆菌。致病性实验表明:分离株对小白鼠有致病性,该分离株对头孢呋辛、头孢曲松等头孢类抗生素和四环素最为敏感。本研究为我国南方省份曼氏杆菌病的防控和深入研究奠定了基础。     

1株羊源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定、药敏试验及致病性研究

[目的] 对某养殖场由呼吸道症状引发的山羊死亡病例进行病原学诊断,并对分离到的病原进行药敏试验及致病性分析。[方法] 无菌条件下剖检并采集死亡羊只肺脏及气管组织,接种于TSA固体培养基,37 ℃培养22~24 h;挑取疑似菌落,纯化后进行革兰染色镜检和生化鉴定;对经表型鉴定的分离菌株进行16S rDNA PCR扩增、测序,并进行遗传进化树构建和同源性分析;采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药敏试验;利用动物攻毒试验确定分离菌株对羔羊的致病性。[结果] 从临床样本中分离到1株细菌,命名为DMQ-Y-Mh。纯化后的分离菌株镜检为革兰阴性短杆菌,经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析,将分离菌株鉴定为溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）。分离菌株对环丙沙星、阿奇霉素、庆大霉素敏感,对左氧氟沙星、土霉素、氟苯尼考中度敏感,对替米考星、恩诺沙星、泰乐菌素耐药。攻毒羔羊于72 h内死亡,剖检眼观气管及肺脏支气管内有黏性分泌物;肺脏组织有深红色病灶,与正常肺脏组织界限明显,可再次从死亡羔羊肺脏及气管组织分离到溶血性曼氏杆菌。[结论] 溶血性曼氏杆菌是造成该养殖场发生羊只死亡的病原菌,药敏试验结果为指导临床用药提供了参考。     

绵羊源溶血性曼氏杆菌的分离、鉴定及其生物学特性分析

从四川省某绵羊场患有呼吸道疾病的动物中分离和鉴定溶血性曼氏杆菌,并对其血清学、lktA基因型、主要毒力因子和药物敏感性以及对小鼠致病性等进行分析.结果 共分离获得19株溶血性曼氏杆菌,其中血清A1型7株、A2型11株.lktA基因型分析发现9株为lktA1型,7株为lktA4型,4株属于lktA8型,1株属于lktA6...     

2株山羊溶血性曼氏杆菌鉴定与分型

为了研究感染羊引起肺炎的溶血性曼氏杆菌的分子特征,分别从2只山羊肺部分离细菌,在血琼脂平板上分离纯化后,经培养、革兰染色镜检、生化试验、16S rDNA序列鉴定,结合临床症状鉴定这2株细菌为溶血性曼氏杆菌,分别命名为NH1、NH2。采用PCR方法,对2株溶血性曼氏杆菌进行血清型1型、2型和6型的鉴定,结果2株细菌均为血清型2型。采用多位点序列分型法对2株溶血性曼氏杆菌的7个管家基因扩增并测序,结果等位基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf的序号分别为1、1、3、1、1、1和4, 2株分离菌序列型一致,均是ST46。通过纸片扩散试验检测细菌对抗菌药物的敏感性,MH1对链霉素耐药,对多西环素和妥布霉素中介,对其他13种药物均敏感;MH2对链霉素中介,对其他15种药物均敏感。     

绵羊肺脏中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及其药物敏感性分析

为了对引起绵羊肺炎的病原进行分离、鉴定和耐药性分析,本研究通过无菌采集绵羊肺脏并对细菌进行分离纯化、生化试验和PCR鉴定,然后对所得到的溶血性曼氏杆菌分离株进行药物敏感性研究。结果显示,分离纯化得到的细菌为革兰氏阴性短杆菌,具有弱溶血性,经生化试验和PCR鉴定为溶血性曼氏杆菌;耐药性分析显示该菌株对恩诺沙星、庆大霉素、四环素等大部分药物敏感。本研究为绵羊溶血性曼氏杆菌感染的有效防制提供有用的信息和数据。     

1株奶牛源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定与生物学特性研究

为了对送检奶牛肺脏组织进行病原菌的分离鉴定并研究分离病原菌的生物学特性,试验采用细菌的分离纯化、革兰氏染色镜检、理化试验及16S rDNA序列分析对分离菌进行鉴定,并检测其血清型、多位点序列分型(MLST)、毒力基因、致病性和耐药性。结果表明：该菌株能发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖等,不发酵甘露糖;革兰氏染色镜检显示该菌呈红色的球杆状,为革兰氏阴性菌;16S rDNA序列分析结果显示该菌株为溶血性曼氏杆菌,命名为202102NF,为血清型1型;202102NF的7个管家基因adk、aroE、deoD、gapDH、gnd、mdh和zwf序列号分别为1,2,1,2,1,2,1,序列型为ST1;202102NF携带LKTA、GCP、POMA、NANH、ADHE、HF等多种毒力基因;小鼠腹腔注射202102NF 18 h内死亡,镜检可见攻毒组的小鼠肝脏和肾脏发生肿大、颜色加深,肺部出现出血斑,肠道有大量炎性渗出物;202102NF对诺氟沙星中介,对多黏菌素B、头孢噻肟、左氧氟沙星等17种抗菌药物均敏感。说明202102NF为血清型1型的溶血性曼氏杆菌,其序列型为ST1,携带多种毒力基因,具有较强的毒...     

牛源荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

探明一起牛运输热的病原及生物学特性,本研究采集病死牛心血、肺脏,对其进行细菌分离、生化试验和PCR鉴定,并对分离株进行毒力基因检测、致病性研究。结果显示,该分离菌为革兰氏阴性菌,呈球状或短杆状、两端钝圆、两极浓染。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、木糖等碳水化合物,不发酵脲酶和吲哚,产生少量酸而不产气,符合溶血性曼氏杆菌的生化特性。PCR鉴定为荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,并完成了毒力基因的检测。结果表明,引起该批牛运输热的病原为携带毒力基因的荚膜血清A1型溶血性曼氏杆菌,本研究结果为进一步研究溶血性曼氏杆菌的致病机制、防控措施等提供参考。     

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及药敏试验

从云南、山东16个鸭场有典型浆膜炎临床症状的病(死)鸭中分离到14株细菌,经形态、培养特性、生化特性、PCR等生物学特性鉴定,上述菌株均为鸭疫里默氏杆菌,型鉴定试验表明其中2株为RA-1型、4株为RA-2型,药敏试验表明山东分离株对头孢氨苄、痢特灵、链霉素、庆大霉素较敏感,云南分离株对氨苄青霉素、痢特灵、头孢氨苄较敏感。动物致病性试验显示RA-1、RA-1型分离菌株均可使健康鸭发病或死亡。     

绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌双重PCR检测方法的建立及应用

为建立同时检测绵羊肺炎支原体(MO)和溶血性曼氏杆菌(Mh)的方法,本研究根据MO的hsp70基因和Mh的gcp基因分别设计引物,建立了同时检测这两种病原的双重PCR检测方法.实验结果显示该方法能够特异性的扩增MO (135 bp)和Mh (227 bp) DNA片段,其最低检出量分别为2.06×103拷贝/μL和6.37 c fu/mL,与单一PCR相同.该方法对常见的致病菌无交叉反应.对临床样本的检测结果显示MO和Mh的检出率分别为56.25％和52.50％,与单独PCR符合率为100％.研究结果表明,本研究所建立的双重PCR检测方法具有特异性强、敏感性高等特点,为临床上MO和Mh混合感染的快速检测、鉴定以及流行病学调查提供了方便、快捷、准确的方法.     

鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药物敏感性分析

为了解当前广西鸡源致病性沙门氏菌的优势流行菌株及耐药情况,掌握其最新流行特点,本试验采集疑似病鸡的组织病料,对沙门氏菌进行增菌和分离培养,运用VITEK System ATB Expression法ID 32E肠杆菌鉴定试剂条对分离菌株进行生化试验鉴定,应用玻片凝集试验进行血清型鉴定,采用ATB VET药敏试剂条对30种肠杆菌抗菌药物进行药物敏感性试验。结果显示,从310份疑似鸡病料中分离鉴定出34株致病性沙门氏菌;这些分离菌株中有A群1株、C2群1株、B群15株和D群14株,另有3株未定型,其中以B群鼠伤寒沙门氏菌和D群鸡白痢沙门氏菌为优势菌株;34株分离株均对美洛培南、亚胺培南、大观霉素和安普霉素敏感,对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素的耐药率小于10%,对阿莫西林、链霉素、氟甲喹、噁喹酸、磺胺甲噁唑、四环素和呋喃妥因耐药率介于50%和90%之间,而对青霉素、苯唑西林、夫西地酸、利福平和甲硝唑的耐药率达到100%,并且存在多重耐药现象。结果表明,鸡源致病性沙门氏菌的流行菌株具有一定的地域性,当前广西以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,流行菌株耐药性严重,应高度关注。     

Isolation,Identification and Analysis of Serotype and Antibiotic Susceptibility of Pathogenic Salmonella from Chickens

To investigate the situations of predominant strain and antibiotic resistance of pathogenic Salmonella from chickens in Guangxi Zhuang Autonomous region, Salmonella was pre-enriched and isolated from tissues of clinical suspected chickens, and the Salmonella isolates were identified by biochemical test using ID 32E System for the identification of Enterobacteriaceae of VITEK System ATB Expression, serotypes were determined by slid agglutination test, antibiotic susceptibility was analyzed by ATB VET Susceptibility Test Strip of Enterobacteriaceae antibiotics.The results showed that 34 Salmonella strains were obtained from 310 clinical samples, of which 1 strain belonged to A serogroup, 1 to C2 serogroup, 15 to B serogroup, 14 to D serogroup and 3 to untyped serogroup, and S.typhimurium of B serogroup and S.pullorum of D serogroup were the predominant serotypes.All Salmonella isolates were sensitive to meropenem, imipenem, spectinomycine and apramycine, and the resistance rates to chloramphenicol, kanamycine and gentamicine were less than 10%, and the resistance rates to amoxicillin, streptomycine, flumequine, oxolinique, sulfamethizol, tetracycline and nitrofurantoine ranged between 50% and 90%, while the resistance rates to penicilline, oxacilline, fusidique, rifampicine and metronidazole reached to 100%.The results indicated that the serotype distribution of pathogenic Salmonella from chickens exhibited regional characteristics, and S.typhimurium and S.pullorum were the predominant serotypes in Guangxi Zhuang Autonomous region, and antibiotic resistance of Salmonella isolates was very serious which should be highly concerned.     

红斑丹毒丝菌的分离鉴定及药敏试验

为确定引起广东潮州某猪场后备母猪发病的病原,采用自制的含马血清的牛心浸汁替代琼脂培养基,从送检的肝脏组织病料中分离到菌落形态一致的1株细菌,根据其菌落形态特征、革兰染色观察、生化特性和16SrDNA序列分析,最终鉴定为红斑丹毒丝菌,将其命名为CZ1。CZ1对31种常用抗菌药物的药敏试验结果显示,该菌对青霉素类和头孢菌素类、四环素类、呋喃类、大部分氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类均敏感;对磺胺类药物、利福平和氟罗沙星耐药。对菌株CZ1和实验室早前分离的韶关株SG7分别进行小鼠LD50测定,测得CZ1株和SG7株的LD50分别为1.02×10^4 CFU/mL和7.3×10^3 CFU/mL,表明CZ1株的毒力弱于韶关分离株SG7株。用大鼠分别制备抗CZ1株和SG7株高免血清,血清玻片凝集试验显示,抗CZ1株和SG7株高免血清均能与自身菌株新鲜培养物发生强的凝集反应。交互凝集试验显示,抗CZ1株高免血清能与SG7株新鲜培养物发生强的凝集反应,抗SG7株高免血清能与CZ1株新鲜培养物发生强的凝集反应,表明此次潮州分离株CZ1与SG7株很有可能属于同一种血清型分离株。而2种抗血清均不与现有疫苗株GC42发生凝集反应,提示猪丹毒病的病原血清型可能发生了变化。     

山羊败血性链球菌的分离鉴定与药敏实验

通过临诊观察、病理剖检和细菌分离鉴定,确诊1例急性山羊败血性链球菌病。从患病羊心血分离的致病菌为革兰氏阳性菌,镜下呈单个球状或链状排列,在鲜血琼脂平板上呈β溶血,对头孢哌酮、头孢呋辛、米诺环素、环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、呋喃妥因等抗菌药物高度敏感,可用于山羊链球菌病的治疗。     

致肉牛运输热溶血曼氏杆菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

为探明一起肉牛运输热的病原及生物学特性,本研究无菌采集病死牛心血、肺脏、肝脏和脾脏,对其进行细菌分离、生化试验和PCR鉴定,并对分离株进行毒力基因检测、致病性研究。结果显示,7株分离菌均为革兰氏阴性短杆菌,具有微弱的β-溶血,瑞氏染色可见两极浓染及明显的荚膜。生化试验结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、甘露醇、甘露糖、木糖等碳水化合物,不发酵脲酶、MR-VP和吲哚,产生少量酸而不产气,结果符合溶血曼氏杆菌生化特性。PCR鉴定均为荚膜血清A2型,分离菌均含有四型菌毛相关基因ptfA、参与复制相关基因dnaN、白细胞介素相关基因LktC3种毒力基因。分离菌对小鼠的LD50值在107.83～108.50 CFU/mL之间,不同菌株间小鼠LD50值存在一定差异,但差异不明显。结果表明,引起该批肉牛运输热的病原为携带毒力基因的荚膜血清A2型溶血曼氏杆菌,本研究结果为进一步研究溶血曼氏杆菌的致病机制提供参考。     

西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla_TEM基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

黑龙江省近几年频繁发生以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎以及急性死亡为特征的传染病,为猪场造成严重经济损失,为了确诊是否有副猪嗜血杆菌感染,采集病死猪肝脏、脾脏和肺脏等病料,进行副猪嗜血杆菌的分离;对其理化特性进行鉴定,应用PCR方法对其16S rRNA基因扩增后进行克隆测序,将测序结果在GenBank上进行BLAST分析,把相近的基因序列应用DNAStar软件进行同源性和进化关系分析;用分离菌株进行药物敏感性试验,筛选敏感药物。结果分离出一种具有多形性的NAD依赖性菌株,经鉴定为副猪嗜血杆菌;16S rRNA基因进化分析结果表明,分离菌株与以往报道的副猪嗜血杆菌中国、日本和美国分离株属于同一亚群,而西班牙分离株属于单独的亚群;分离菌株对壮观霉素和头孢拉定高度敏感。