长穗偃麦草与中间偃麦草杂种成熟胚离体培养与再生体系的建立

以长穗偃麦草(Elytrigia elongata)和中间偃麦草杂交种(Elytrigia hybrid;E. elongata×E. intermedia)的成熟胚为外植体,进行组培再生体系的研究。结果表明:诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+CH(500 mg/L)+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.2 mg/L),其诱导率为73%,适宜分化培养基为MS+6-BA(4.0 mg/L)+NAA(0.5 mg/L),分化率最高,为37.8%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体偃麦草杂种组织培养再生体系。     

铁线莲‘Blekitny Aniol’组织培养及再生体系建立

对铁线莲(Clematis florida‘Blekitny Aniol’)的带芽茎段进行诱导产生无菌苗,并对其叶片和茎段进行愈伤组织诱导成苗的分化研究,成功建立了铁线莲组织培养再生体系。结果表明,带芽茎段诱导腋芽最佳培养基为MS+1mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,腋芽萌发率为100.0%;茎段诱导愈伤最适宜培养基为MS+2 mg·L~(-1)6-BA+0.01mg·L~(-1)NAA,诱导率为78.3%;叶片诱导愈伤组织最适宜的培养基为MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,诱导率为81.7%;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,分化率可达25.0%;最适宜不定芽的增殖培养基为1/2MS+3 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,增殖倍数为4.94;筛选出最优的生根培养基组合为1/2MS+0.05 mg·L~(-1)NAA,生根率为70.2%。本研究将为铁线莲的推广应用提供参考,也为其他铁线莲属植物引种和开发利用奠定了基础。     

扁穗牛鞭草再生体系的建立

以‘雅安'扁穗牛鞭草(Hemarthria compressa)的幼茎和幼叶为外植体,通过胚性愈伤组织建立扁穗牛鞭草的高效再生体系。结果表明:幼叶比幼茎更适合建立再生体系,最佳诱导培养基为MS+2,4-D 1.0 mg·L~(-1),幼叶和幼茎的出愈率分别为100%和86.96%。最佳分化培养基和不定芽增殖培养基均是MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1),愈伤分化率分别为100%和72.90%,再生苗增殖系数可达18.6。1/2 MS是最适宜的生根培养基,生根率达100%。     

多花黑麦草特高和多年生黑麦草四季高频组培再生体系的优化与建立

对在贵州地区广泛种植的多花黑麦草特高(Lolium multiflorum‘Tetragold’)和多年生黑麦草四季(L.perenne‘Four seasons’)的成熟种子进行了愈伤组织诱导及植株再生的研究,建立了两个品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生体系。结果表明,剥去成熟种子的颖壳,切除1/3胚乳端,将特高接种于CC+7mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA、四季接种于CC+5mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) 6-BA的培养基中,在明显降低组培污染率的同时,能分别得到65.52%和63.55%的最高愈伤组织诱导率;将两个品种诱导出的愈伤组织转移在MS+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+1.25mg·L~(-1) CuSO4+1.0g·L~(-1) CH的继代培养基上,能促进质量较好的Ⅱ型胚性愈伤组织的形成;根据后续转化试验所选用的植物表达载体pCAMBIA 1300的抗性特点,30~40mg·L~(-1)的潮霉素是两个品种愈伤组织最佳的筛选剂和临界浓度;特高的胚性愈伤组织接种在MS+2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.1mg·L~(-1) TDZ的培养基上,可以产生86.37%的最高分化率,四季的胚性愈伤组织接种在MS+6.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA+5.0mg·L~(-1) KT的培养基上,能得到85.40%的最高分化率;生根培养基1/2MS+0.5 mg·L~(-1)NAA+0.5mg·L~(-1) IAA能让两个品种分化出的不定芽形成100%的生根率;以腐殖土∶蛭石∶砂壤土=1∶1∶1的混合材料作为营养土,能保证组培再生苗达到99%以上的成活率。优化建立的高频组培再生体系为下一步的遗传转化奠定了基础。     

应用正交试验法优化‘新农1号’狗牙根再生体系

以‘新农1号’狗牙根(Cynodon dactylon(L.)Pers.)成熟颖果为材料,通过正交法探讨激素、外源添加物等对狗牙根愈伤诱导、继代及分化的影响,优化‘新农1号’狗牙根再生体系。结果表明:各因子对‘新农1号’狗牙根愈伤诱导的影响程度为2,4-D6-BA脯氨酸;优化诱导培养基为添加2,4-D(2.0 mg·L~(-1))+6-BA(0.01mg·L~(-1))+脯氨酸(200mg·L~(-1))的MS培养基,此时愈伤诱导率达69.5%;对继代增殖而言,各因子对胚性愈伤诱导率、愈伤增殖率、褐化率的影响程度不同,对胚性愈伤诱导率的影响程度为2,4-DABA6-BA,对愈伤增殖率的影响程度为6-BAABA2,4-D,对褐化率的影响程度为2,4-D6-BAABA。综合3个指标结果认为,‘新农1号’狗牙根愈伤继代的优化培养基为2,4-D(2.0mg·L~(-1))+6-BA(0.20 mg·L~(-1))+ABA(2.0 mg·L~(-1))的MS培养基,其胚性愈伤率和愈伤增殖率分别可达71.67%和61.67%,且褐化率较低;对分化而言,优化的分化培养基为MS+6-BA(1.0mg·L~(-1)),小植株形成强度可达49.44%。     

黄花苜蓿花药培养再生体系的建立与单倍体鉴定

花药组织培养再生体系的构建是单倍体育种的重要途径之一。本研究对呼伦贝尔黄花苜蓿(Medicago falcate‘Hulunbeier’)进行了花药组织培养研究并建立了花药组培再生体系。结果显示,液体悬浮培养基比固体培养基更适合呼伦贝尔黄花苜蓿花药愈伤组织的培养,其愈伤形成的培养条件为B5培养基+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.25 mg·L~(-1) 6-BA+0.4mg·L~(-1) NAA+3.0mg·L~(-1) KT;分化培养基为MS+1.0mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+2%蔗糖+0.7%琼脂;生根培养基为1/2MS+0.1mg·L~(-1) NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂;获得的再生植株经流式细胞仪鉴定,其单倍体比例高达27%。     

两个高羊茅品种成熟种子再生体系的建立

以2个高羊茅品种(“Plantation”和“沪坪1号”)的成熟种子为外植体,在MS培养基上分别添加不同浓度的2种植物生长调节剂,探索其愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳激素配比及其相互间的影响,以建立简便高效的再生体系。结果表明,完整高羊茅种子最佳的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,诱导率为71%;而把成熟种子进行纵切后得到的半粒种子的较优的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 2.5 mg/L,诱导率占半粒种子外植体的60%,占完整种子(2个半粒种子)外植体的90%以上;在最优诱导培养基上产生的愈伤组织的最佳继代培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,其胚性愈伤诱导率为70%,而添加6-BA则抑制2,4-D对胚性愈伤组织的诱导;不同品种的最优的分化培养基不同——“Plantation”的最优分化培养基为MS+2,4-D 1 mg/L+6-BA 1 mg/L,而“沪坪1号”的最佳组合是MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,分化率分别达到50%和56%。生根培养基采用已报道的组合1/2MS+NAA 0.5 mg/L,生根率达100%。     

草地早熟禾午夜2号植株再生研究

以草地早熟禾(Poa pratensis L.)品种午夜2号成熟种子为外植体,进行植株再生研究,建立高频再生体系,为草地早熟禾进行原生质体培养和细胞融合奠定基础。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂,其诱导率为52.3%;最佳继代培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.3mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂;最佳分化培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(1 mg/L)+3%蔗糖+0.6%琼脂、分化率为57.5%;生根培养基同分化培养基,供体材料经100d的培养后获得再生植株。     

披碱草×野大麦杂种F_1幼穗培养再生体系的建立

以披碱草×野大麦杂种F_1幼穗为外植体,诱导出胚性愈伤组织,建立了植株再生体系,对影响愈伤组织诱导、分化、生根的基本培养基、激素种类及质量浓度等进行筛选。结果表明:愈伤组织诱导以MS为基本培养基+3mg/L 2,4-D较好;外植体在MS+3mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的诱导培养基上经过20d培养,小穗愈伤组织诱导率达28.3%;愈伤组织的分化培养基为MS+1mg/L 6-BA+1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂,愈伤组织分化率达78%;生根培养基以1/2MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L NAA+蔗糖+7g/L琼脂为最佳,生根率可达86.7%,移栽后成活率可达100%。     

芡欧鼠尾草的组织培养和快速繁殖

以芡欧鼠尾草(Salvia hispanica)成熟种子为外植体,1/2MS为基本培养基,研究不同浓度的外源激素对愈伤组织的诱导、增殖和生根的影响,从而初步建立了芡欧鼠尾草组织培养的快速繁殖体系。结果表明,诱导种子愈伤组织的最适宜培养基为1/2MS+10.0mg·L~(-1) 6-BA+1.0mg·L~(-1) NAA+0.4mg·L~(-1) ZT,诱导率为66.5%;不定芽增殖的最适培养基为1/2MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+0.5mg·L~(-1) NAA,增殖倍数为7.69;生根的最适培养基为1/2MS+0.5mg·L~(-1) NAA,生根率达100%,平均生根数为5.68;移栽后植株生长良好,成活率较高,达97%。     

短芒大麦草组织培养体系的建立

以短芒大麦草幼穗为外植体,建立了比较稳定高效的组织培养体系.研究结果表明,在含有3.0～4.0mg/L 2,4-D的MS+ 300mg/L CH+3％蔗糖+0.7％琼脂(pH5.8)培养基上,短芒大麦草幼穗切段愈伤组织诱导率可达到80.0％以上;经MS+ 300mg/LCH+0.5mg/L 2,4-D +3％蔗糖+0.7％琼脂(pH5.8)培养基上继代培养后,其胚性愈伤组织在MS+ 300mg/LCH+ 0.5mg/L 2,4-D +0.1 mg/L 6-BA +3％蔗糖+0.7％琼脂(pH5.8)分化培养基上的分化率为62.9％;短芒大麦草组培苗在1/2MS+ NAA0.1mg/L+蔗糖1％+琼脂0.7％ (pH5.8)培养基上生根后,移栽成活率可达到98.0％以上.     

杂交狼尾草不同外植体愈伤组织诱导

本研究以杂交狼尾草(Pennisetum americanum×P.purureum)种子和心叶为外植体研究不同质量浓度2,4-D与6-BA组合对愈伤组织诱导及6-BA,NAA对分化的影响。结果表明种子最佳的胚性诱导培养基MS+5.0mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-1 6-BA,诱导率为75%,心叶最佳的胚性诱导培养基MS+3.0 mg·L-12,4-D+0.5mg·L-1 6-BA,诱导率为60%;种子愈伤组织诱导高于心叶,为较好外植体。种子分化的最佳培养基为MS+3mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA,分化率62.5%。该研究建立了稳定有效的再生体系,为杂交狼尾草的遗传转化和定向改良提供了技术支撑。     

热研5号柱花草高频、优质愈伤组织的诱导

本研究按应用正交试验,以MS为基础培养基,分析热研5号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.Reyan No.5)在诱导高频、优质愈伤组织过程中激素6-BA、2,4-D浓度和外植体类型对诱导效果的影响。结果表明,6-BA是影响柱花草愈伤组织的诱导率以及褐化率的最主要因素,其次是2,4-D和外植体;柱花草愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2,4-D(0.2~0.5 mg·L-1)+3%蔗糖+0.7%琼脂粉,p H 5.8。子叶、真叶、下胚轴、生长点、上胚轴、根均能诱导愈伤组织,根的愈伤诱导率为80%,其余外植体的诱导率均在95%以上,下胚轴上段形成的愈伤组织芽的分化率高于其他外植体。     

青绿苔草(Care breviculmis)愈伤组织诱导与再生体系的建立

为建立青绿苔草高效的再生体系,本研究以青绿苔草的种子为外植体,探究不同植物激素配比对愈伤组织诱导、愈伤分化和生根的影响。结果表明：MS+1.5 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+2.0 mg·L^-1 2,4-D为诱导愈伤的最佳培养基,诱导率可以达到68.3%,愈伤表现为松散的黄色颗粒;MS+1.0 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA为最佳分化培养基,分化率为93.8%,不定芽数量达到40个,长势良好;不定芽在1/2 MS培养基中生根效果最好,其根长、株高和生根数量均显著高于其他处理。本研究建立了高效的青绿苔草再生体系,为研究青绿苔草的遗传转化及应用生物技术育种奠定了基础。     

扁蓿豆愈伤组织诱导和分化条件的研究

以扁蓿豆3个品系的下胚轴和子叶为外植体,研究不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基对愈伤组织分化的影响.结果表明:下胚轴的愈伤组织诱导率普遍高于子叶;品系B1、B2最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA,品系B3最佳愈伤组织诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.7mg/L 6-BA;适宜分化的培养基均为MS+1mg/L KT+1mg/L 6-BA.     

新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究

以新农1号狗牙根(Cynodon dactylon (L.) Pers.‘Xinnong No.1')成熟颖果为外植体,研究不同激素浓度组合对愈伤组织诱导、继代及分化的影响.结果表明:在愈伤组织诱导中,适宜的培养基为添加2.00 mg·L-12,4-D+0.01 mg· L-1 6-BA+500 mg·L-1脯氨酸的MS培养基,出愈率可达71.2％,愈伤形态为半透明水渍状且淡黄色颗粒较多;继代改造培养基中添加2,4-D 0.5 mg·L-1 +6-BA 0.5 mg·L-1+ABA 2.0 mg·L-1+ GSH 2.0 mg·L-1的MS培养基上培养4周后,愈伤组织增殖率可达41.3％;分化过程中,在不添加任何激素的1/2MS培养基中培养10 d后,将胚性愈伤组织转入添加6-BA 1.0 mg·L-1的MS培养基中,很快绿点变密,继而分化成苗,愈伤组织再生频率达25％,小植株形成的强度为16.7％.     

鸭茅成熟种子愈伤组织诱导影响因素

以鸭茅(Dactylis glomerata)成熟种胚为外植体,探讨了种子预处理、品种选择、培养基及激素配比对其愈伤组织诱导过程的影响,为鸭茅高频再生体系建立奠定了基础。结果表明,3个预处理条件中,次氯酸钠浓度对安巴鸭茅种子愈伤诱导率影响达显著水平(P 0.05)。10个鸭茅品种中,以安巴愈伤诱导能力最佳。不同培养基愈伤诱导率及愈伤形成后的形态发育存在差异,SH、MS、LS培养基均具有较高的愈伤诱导率,其中SH诱导效果最好,愈伤呈现淡黄或黄、干爽松脆。在添加2,4-D的基础上配合30μmol·L~(–1) dicamba可以促进鸭茅种子的愈伤诱导;同时,2,4-D与较低浓度的6-KT组合也有利于愈伤的诱导。综上所述,鸭茅种子先放置于4℃处理24 h,而后用75%酒精处理5 min,1.1%NaClO灭菌处理30 min,最佳诱导培养基为SH+2.0 mg·L~(–1) CPA+0.1 mg·L~(–1) 6-KT+30μmol·L~(–1)dicamba+0.5 mg·L~(–1) 2,4-D,愈伤诱导效率较高且在后期较易形成胚性愈伤,初步建立了一套鸭茅高效稳定的组织培养再生体系。     

蒙农杂种冰草成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生

以蒙农杂种冰草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的诱导进行植株再生,结果表明:在附加甘露醇(0.2mol/L)和2,4-D(2.0mg/L)的MS培养基中,冰草成熟胚可诱导产生愈伤组织,诱导率为87.6%,但质量较差;将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA的继代培养基中继代改造,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤;将筛选改良的愈伤组织置于分化培养基MS+ZT(3.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)中,分化率为82%;分化小苗在1/2MS培养基上可生根并得到完整植株.本研究还建立了一套有效的以成熟胚为外植体的蒙农杂种冰草组织培养再生体系.     

野生结缕草成熟胚愈伤组织诱导及再生体系的研究

以野生结缕草(Zoysia japonica)的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。试验结果表明,不同的预处理方法对愈伤组织的诱导有较大的影响,经研钵研磨去除种子颖壳,30%NaOH浸泡1min,流水冲洗30 min处理的成熟胚在MS+2,4-D(3 mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)为最佳,愈伤组织诱导率达82.67%。将愈伤组织在2,4-D(2 mg/L)和6-BA(0.2~0.5 mg/L)的继代培养基中继代1~2次,可明显改善愈伤组织状态,增加胚性愈伤数。筛选继代后的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+KT(1 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)中,分化率达86%。分化后的簇状植株移栽成活率达100%。     

匍匐翦股颖愈伤组织诱导及其分化的研究

以匍匐翦股颖Penn A-1和L-93的成熟种子为外植体,进行了愈伤组织诱导与分化的研究。结果表明:不同浓度2,4-D对Penn A-1和L-93愈伤组织进行诱导,L-93的诱导率都高于Penn A-1。当以2,4-D和6-BA不同浓度配比对愈伤组织进行诱导时,以MS+2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA为Penn A-1和L-93最适的愈伤诱导培养基,诱导率较高;MSO培养基为适宜的分化培养基,分化率达90.9%;MSO+0.2 mg/L IBA为最佳生根培养基。