利用流式细胞仪鉴定鸭茅倍性

鸭茅为世界重要禾本科牧草之一,多为四倍体或二倍体。快速鉴定其倍性可为鸭茅遗传背景研究及多倍体材料的创制提供技术支撑,加快育种进度。采用流式细胞术,筛选4种细胞核DNA解离液,对比2种流式细胞仪检测方法,最终建立鸭茅倍性鉴定高效技术体系。结果表明,不同解离液处理后的细胞核DNA含量存在一定差异。利用Otto制备鸭茅细胞核悬浮液效果较理想,峰型完整,碎片峰较少且样本峰信号清晰,其荧光变异系数为5%左右。内外标法检测各有优势,外标法检测更快速更简便,而内标法准确性更高。在以外标检测为主的基础上,共在46份鸭茅材料中鉴定出二倍体鸭茅22份,四倍体鸭茅24份,为鸭茅遗传育种提供材料。     

利用流式细胞仪鉴定9个居群蒙古冰草的染色体倍性

利用3种分离液制备了乌拉尔图小麦细胞核悬浮液,其中Otto缓冲液制备效果最好。选用该分离液制备了9个居群蒙古冰草的单细胞悬浮液,在显微镜下统计细胞数,并利用流式细胞仪检测其染色体倍性,用二倍体乌拉尔图小麦作为对照。结果发现,流式细胞仪检测结果与传统的染色体制片法的结果一致,均为二倍体。     

流式细胞仪快速检测鸭茅与多花黑麦草染色体倍性的研究

以鸭茅（Dactylis glomerata）和多花黑麦草（Lolium multiflorum）不同倍性的种质为材料,对流式细胞仪测定牧草多倍体的技术方法和结果进行评价,旨在利用流式细胞仪技术快速确定供试牧草的染色体倍性。采用根尖染色体计数法确定鸭茅‘北绿’品种和多花黑麦草‘Mammoth B’品种为四倍体,以这两个品种的相对核DNA含量和核内DNA复制的平均周期值作为参照,经流式细胞仪检测表明,鸭茅‘早生绿’品种和PI316209种质材料为四倍体,种质PI237602和PI368880为二倍体,PI316209种质的倍性与种质背景信息所提供的倍性存在差异;多花黑麦草‘Musashi’品种为四倍体,‘Tachimasari’和‘Wasehope Ⅲ’两个品种为二倍体。研究结果为流式细胞仪如何在同一物种范围内检测不同倍性样品提供了依据。     

利用流式细胞术鉴定桑树染色体倍性的方法

利用流式细胞术可以快速、准确地鉴定植物染色体倍性,但需要针对不同植物样本的制备及具体操作对应用方法进行选择和优化。为了建立适合桑树染色体倍性快速鉴定的流式细胞术应用方法,以桑树幼叶为材料,比较以不同解离液及机械解离方法和不同离心漂洗次数制作样本用流式细胞术检测的效果,并用不同染色体倍性桑品种的幼叶为材料,以效果最佳的方法进行验证试验。优化的样本制备方案为:采集0.2 g桑树幼叶,置于预冷的平面玻璃上,加入Mg SO4解离液后,用双面刀片快速切碎,转移至培养皿中静置3~5 min,用300目细胞筛网过滤至1.5 m L离心管中,得到500μL单细胞核悬浮液,再加入PI溶液(最终质量浓度为50μg/m L)和RNase A溶液(最终质量浓度为30μg/m L),4℃避光环境下染色30 min,经300目细胞筛网过滤后用流式细胞仪检测。如果采集叶片后不能立即进行检测,可在-80℃下保存待测。试验结果还表明,用在-80℃保存10 d和40 d的冷冻幼叶与用新鲜幼叶制备的样本所得到的检测效果相似。初步建立的适合桑树染色体倍性鉴定的流式细胞术应用方法效果最佳,具有细胞碎片少、主峰清晰、杂峰少等优点。     

流式细胞术鉴定黄花苜蓿染色体倍性水平

采用流式细胞术检测47份黄花苜蓿种质材料的染色体倍性水平,同时结合传统的根尖染色体制片法进行验证.结果表明,47份黄花苜蓿种质材料中45份为四倍体(2n=4x=32),核DNA含量为1.85±0.09 pg/2c;2份为二倍体(2n=2x=16),核DNA含量为1.016±0.021 pg/2c.研究结果为黄花苜蓿遗传育种、种质资源的合理利用及苜蓿属的系统进化研究提供了理论依据.     

不同倍性鸭茅同功酶比较研究

采用生化遗传学的方法,对我国亚热带地区几个二倍体和四倍体野生鸭茅不同生育期的酯酶,过氧化物酶同功酶进行了比较研究。结果表明,鸭茅二倍体各品系之间,四倍体各品种（系）之间的同源性较高,遗传差异较小,二倍体与四倍体之间,酯酶,过氧经物酶同功酶等都有较大差异。     

应用流式细胞技术鉴定桑树倍性的样品选择

利用流式细胞仪对桑树不同叶位的叶片、同一叶位的不同部位、叶芽和种子胚根等进行倍性测定,筛选合适的桑树倍性鉴定材料。结果表明,未完全展开幼叶的检测效果优于第1叶位叶和第2叶位叶,第1叶位叶的检测效果优于第2叶位叶;同一叶位幼叶叶基部分的检测效果优于叶尾部分;叶芽的检测效果最好,而且制备样品的杂质较少,是用于流式细胞术研究的最佳材料。胚根也可以作为流式细胞仪检测的材料,这为更早检测桑树的倍性提供了候选材料。研究结果为选取不同时间段的不同材料进行桑树倍性检测提供了依据,也为其他植物倍性鉴定取材提供了参考。     

苜蓿花药培养及倍性鉴定

在不同低温预处理时间,不同培养基和不同激素组合下进行了苜蓿花药培养实验。结果表明,花药4℃低温预处理24h、48h较72h诱导效果好。NB培养基对愈伤组织的诱导效果比战培养基好。最佳愈伤组织诱导培养基组合为NB＋2,4-D0．5mg／L＋NAA0．3mg／L＋6-BA0．5mg／L＋KT3．0mg／L。通过不同蔗糖浓度对愈伤组织的诱导效果比较,表明低浓度的蔗糖有利于降低愈伤组织的褐化率,高浓度的蔗糖有利于单倍体愈伤组织的诱导。分化培养的最佳组合为MS＋NAA0．2mg／L＋6-BA3．0mg／L。诱导生根最好的培养基为1／2MS培养基,最适合蔗糖浓度为10g／L。     

利用流式细胞仪检测定性牛精液的分离效果

利用德国生产的ＰＡＲＴＥＣ流式细胞仪，对使用Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心技术分离出的荷期坦牛定性精液进行了定性检测，结果表明原精液中，Ｘ－与Ｙ－精子的比例为１．２６：１，富含Ｙ－精子的精液中Ｘ－与Ｙ－精子的比例为０．７３：１。     

采用流式细胞仪鉴定紫花苜蓿花药愈伤组织的变异

本试验采用流式细胞仪,对3个基因型8个继代周期的苜蓿愈伤组织DNA含量进行测定。通过DPAC软件(data pool application of cytometre)分析出细胞DNA含量变异百分率和处于S期细胞的百分率,并采用SPSS 10.0软件分析出愈伤组织继代时间与DNA含量变异率之间的关系。结果表明,本试验所采用的3个基因型8个继代周期24个紫花苜蓿愈伤组织样本DNA含量均发生了变化,且全都出现了DNA加倍的现象。在24个样本中,DNA含量变异率最大的是自选系大叶0510的愈伤组织继代15周时的样本,变异率达到了19.45%。通过SPSS 10.0软件分析,表明紫花苜蓿愈伤组织DNA含量变异细胞百分率与继代时间存在相关性,随着继代时间的延长,染色体变异率有增加的趋势,但这种趋势不是无限增大的。继代0～12周是愈伤组织DNA含量变异的集中发生期,以后随着继代次数的增加,DNA含量变异率趋向于稳定。     

鸭茅的栽培技术及利用

鸭茅又名鸡脚草、果园草,原产于欧洲、北非及亚洲的温带地区,为世界著名禾草之一,现已遍及世界温带地区。1植物学特征鸭茅为禾本科鸭茅属多年生草本植物,属须根系,密布于10～30cm的土层内,深的可达1m以上。茎直立或基部弯曲,疏丛型,高70～120cm。叶片蓝绿色,幼叶呈折叠状。基部叶片密集下披,长20～30cm,宽0.7～1.2cm。鞘叶无毛,通常闭合达中部以上;叶舌膜质,圆锥花序,长5～20cm,小穗积聚于分枝的上端,通常含2～5朵小花。种子为颖果,黄褐色,长卵圆形,千粒重1～1.2g。2生物学特性鸭茅适宜温暖湿润的气候条件,抗寒性低于猫尾草和无芒雀麦,最适…     

鸭茅的栽培技术及利用

鸭茅又名鸡脚草、果园草,原产于欧洲、北非及亚洲的温带地区,为世界著名禾草之一,现已遍及世界温带地区.     

流式细胞仪分离精子研究进展

本文概述了近年来用流式细胞仪分离动物X、Y精子的研究进展、存在的问题和应用前景。流式细胞仪分离精子的研究已经取得了很大进展 ,在某些动物 (如牛 )分离的精子已开始用于人工授精。尽管该技术还存在许多亟待解决的问题 ,但随着流式细胞仪的改进和与各项辅助生殖技术 (如手术授精、体外受精、胞质内精子注射、低剂量精子人工授精 )结合 ,性别分离精子必将在实践中得到广泛的应用 ,产生巨大的社会和经济效益     

利用流式细胞仪分离奶牛精液的性别控制效果观察

目前,常见的牛性别控制方法有早期胚胎性别鉴定法和利用流式细胞仪进行X、Y精子分离法两种。流式细胞仪精子分离法是根据X、Y精子在DNA含量上的差异来分离精子。分离后的X、Y精子用于人工授精或显微授精可在授精之前就控制其性别,因而被认为是更具有实用价值的方法。此次研究通过对分离后精子的人工授精效果和性别控制效果进行试验观察,以期为该方法的进一步应用提供依据。1材料与方法1.1公牛及采精公牛为大庆田丰生物有限公司饲养的荷斯坦牛,共12头。饲以全价营养日粮,每天喂给鸡蛋1枚。采用常规的假阴道法采集精液。1.2精液的处理将采…     

利用流式细胞仪检测解冻山羊精子活性氧和质膜完整性

将冻精颗粒分别用2·9%柠檬酸钠、2·9%柠檬酸钠 GSH、VB12和TALP解冻,用DCFH-DA染色,流式细胞仪分别检测各组的荧光强度(FI),测定各种处理的ROS生成。将用干、湿两种方式解冻的精液用羟化荧光素和PI双染色,上流式分析质膜完整性。结果表明用VB12解冻,荧光强度(FI)最低,为2·97,有96·76%解冻精子的质膜出现不同程度的破损。     

野生鸭茅的栽培与利用

鸭茅是遍及世界温带地区的一种优良多年生禾本科牧草,在五峰县海拔1200m以上的高山地区也有少量野生分布。经多年人工驯化种植,目前已分布较广。其适口性好、抗旱、抗寒及再生能力强,产量高、是建立人工草地、改良天然草场的理想禾本科草种。1 植物学特征 本地野生鸭茅为多年生疏丛型禾草,须根密集,茎杆直立,高1.1m——1.45m。茎叶光滑无毛,茎扁园,灰白色,由下至上逐渐变成绿色;横切面呈纺锤形,切面0.3cm×0.8cm～0.4cm×0.9cm。叶鞘长于     

基于流式细胞术对不同倍性草莓基因组大小的测定

以不同倍性草莓资源的嫩叶为材料,根据待测样品倍性预估基因组大小后分别选择水稻日本晴、番茄、玉米B73作为内参,利用流式细胞仪测定样品的基因组大小。不同草莓资源的基因组大小分别为：二倍体森林草莓（233±0.78）Mb、绿色草莓（234±0.82）Mb;四倍体西南草莓（492±2.12）Mb、伞房草莓（雄株）（488±7.07）Mb、伞房草莓（雌株）（491±4.95）Mb;六倍体麝香草莓（644±1.73）Mb;八倍体栽培草莓品种‘章姬’（793±7.78）Mb、‘蒙特瑞’（761±0.00）Mb;十倍体野生资源择捉草莓（938±6.36）Mb、十倍体栽培品种‘桃熏’（1007±6.36）Mb。     

流式细胞仪分离精子法概述

本文论述了流式细胞仪（FCM）分离精子的工作原理、分离精子的应用效果，并且分析了流式细胞仪分离精子目前存在的问题．提出了奶牛X精子和Y精子分离技术的前景展望。     

利用流式细胞仪建立牦牛X、Y精子分选体系的研究

旨在探索与优化牦牛精子分选条件,建立高效的牦牛X、Y精子分选技术体系.本研究制备了牦牛精液细胞悬液,采用不同量的DNA染料Hoechst33342和诱惑红共孵育精子细胞.利用流式细胞仪分选牦牛X、Y精子,通过比较分选效率、分选后精子活力及发育潜能,优化分选条件.运用RT-PCR检测分选精子的纯度,利用精子分析系统检测分...     

流式细胞仪在免疫学研究中的应用

随着现代激光技术、电子检测技术和电子计算机技术等的迅速发展,流式细胞仪(FCM)在免疫学、生物学、遗传学、血液学、临床检验等领域中得到了更加广泛的应用。在免疫学研究领域,FCM以快速、灵活及定量等特点被广泛地应用于基础研究和临床治疗的各个方面,尤其是与单克隆抗体技术的结合,使其在免疫分型、分选、免疫监测、免疫细胞的系统发生及特性研究等方面发挥了重要的作用,成为现代免疫学研究不可缺少的工具。该文对近年来流式细胞仪在免疫学研究中的应用进展进行了综述。