山羊卵泡卵母细胞体外成熟体外受精研究

对山羊孵巢卵泡卵母细胞的采集方法、 PMSG处理山羊促进多卵泡发育及受精体系进行了研究。结果表明：切割法获可用卵数高于抽吸法， PMSG处理获卵总数及可用卵数高于对照组， BO液法的受精率高于 TALP液法，而 TALP液法的桑椹胚率高于 BO液法。     

中国黄牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

自屠宰场和临时屠宰的黄牛体内取卵巢2批共25次,黄牛97头,共得可用卵巢卵母细胞657个。用TCM—199加雌激素(FSH、LH、雌二醇—17β)培养于5％CO_2与95％空气的39℃的CO_2培养箱中,使第1批成熟率达到55.04％,第2批成熟率达到61.7％。第1批受精率达到61.97％,移于兔输卵管中发育到卵裂,移于羊输卵管中发育到晚期桑桩胚和早期囊胚。第2批废卵率为38.3％;第10次的体外培养发育率为23.8％;羊输卵管培养发育率达到91％。利用肝素(0.005mg/ml)使精子获能,授精时的精子浓度为25×10~6/ml。用小滴培养法(小滴量为50μl)加盖无菌石蜡培养。结果证明中国老龄黄牛的卵巢还是有利用价值的。     

体外成熟猪卵母细胞的体外受精研究

实验采用体外成熟的猪卵巢卵母细胞，将鲜精以前培养结合咖非因法获能后进行ＩＶＦ实验．体外成熟卵ＩＶＦ后的卵裂率为２４．７％～３８．４％，与目前文献报道的近似；授精时精子浓度为２×１０５／ｍＬ，１×１０６／ｍＬ和５×１０６／ｍＬ体外受精后的卵裂率分别为４０．８％（８２／２０１）．４５％（８５／１８９）和３０．５％（５０／１６４）．前二者无显著差异，但都与最后一组差异显著．我们认为，在本实验条件下，体外受精时适当的精子浓度要比目前常用的１×１０６／ｍＬ低．我们将肝素结合咖啡因的精子在能方法与前培养结合咖啡因法进行了比较，卵裂率分别为１０．７％（９／８４）和４０％（３２／８０），前者虽然在牛体受精实验中很成功．但在猪效果差．将体外成熟体外受精卵移入同步的受体猪输卵管后．有一头母猪成功地产下了５只“试管猪’，存活３只．     

牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究

本研究分析了卵巢不同性周期阶段（卵泡期、黄体期）、外源激素（ＦＳＨ、ＬＨ、雌激素）和不同卵泡液浓度（１０％,２０％,３０％）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大（６３９％和５８７％）;成熟培养基中添加ＦＳＨ（１０ｍｇ／Ｌ）,ＬＨ（５ｍｇ／Ｌ）和同时添加ＬＨ、雌二醇（１ｍｇ／Ｌ）,可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为６３０％,６４０％,６９１％;卵泡液（１０％,２０％,３０％）代替血清,其成熟率分别为５０７％,５７６％,５１９％,２０％ｂＦＦ效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下（１×１０６～２×１０６个／ｍＬ）,Ｐｅｒｃｏｌ液处理精子的受精率（４７１％）显著低于上浮法处理精子的受精率（５７１％）（Ｐ＜００５）。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

采集繁殖和非繁殖季节山羊卵巢，回收大腔（３－６ｍｍ）和小腔（＜２ｍｍ）卵泡卵母细胞，进行体外成熟和受精，结果如下：①繁殖季节的大腔和小腔卵母细胞体外成熟率（６８．４％，２７．５％）均显著（Ｐ＜０．０５）高于非繁殖季节（５２．５％，２０．６％）；②１和１．５周岁龄羊与成年羊相比，前两者的小腔卵泡卵母细胞采集数显著（Ｐ＜０．０５）多于后者（２５．６，２２．５：１５．１），但卵母细胞体外成熟主无显著差异     

山羊大腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

从屠宰场采集卵巢。抽吸法回收2～6mm大腔卵泡卵母细胞。随机抽样后,测量其直径为167.42±17.43μp。A,B级卵泡卵母细胞进行体外成熟培养,其成熟率为67.50％。山羊新鲜精液以BO液或MD-H液处理后,与体外成熟卵母细胞进行授精,受精率分别为56.61％（17／30）和63.33％（19／30）,两组间差异不显著（P＞0.05）。BO和MD-H液均适宜于山羊精子获能处理。体外受精卵的2细胞胚发育率为16.67％（6／36）,4细胞胚发育率为2.78％（1／36）。     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

猪体外受精技术中生殖细胞体内外成熟及获能的比较

猪体内、外成熟卵子与体外获能精子进行受精，其卵裂率分别为４３．６％和１９．６％，两者差异极显著。体内获能精子与体外成熟卵子进行受精，其受精率和卵裂率分别为５５．０％和２２．５％，增高于体外获能精子组的水平，但差异都不显著，体内获能精子不能经受常规的精子冷冻程序。     

成熟培养基中添加成分对哺乳动物体外受精的影响

概述了在成熟培养基中添加成分，包括ＬＨ，ＦＳＨ，ｈＣＧ，Ｅ２促乳素，表皮生长因子，颗粒细胞以及血清等对卵母细胞体外成熟及随后的体外受精与体外发育能力的影响，并对其作用机理进行了初步探讨。     

牛卵母细胞体外培养成熟前后及体外受精卵SDH的电镜细胞化学研究

本文用Kerple-Fronius和Hajos的电镜细胞化学方法,对牛卵巢2-5mm卵泡中的卵母细胞及体外培养成熟卵和体外受精卵,进行了琥珀酸酶(SDH)定位及活性变化的研究.观察结果培养前的卵母细胞酶活性较明显,主要定位于线粒体膜上,内脊上也有少量的定位.体外培养成熟卵线粒体上的酶活性明显减弱.而体外受精卵在线粒体的膜及内脊上都有很强的酶活性定位.结果表明,牛卵母细胞的SDH活性随卵母细胞的成熟过程减弱,随受精过程增强. 本文还从超微结构角度上,对酶活性变化的原因进行了讨论     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟的初步研究

对超排山羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养的初步研究:试验一,分别用6、7、9、16号针头抽吸2～6mm卵泡,获有用卵母细胞百分率:分别为61.67％(37/60)、65.92％(178/270)、56.73％,(59/104)、31.43％(22/70);试验二,以TCM 199+10mol/L MHEPES+青霉素(6μg/m1)+链霉索(5μg/ml)为基础培养液(BM),再分别加入不同成分,配成5种卵母细胞成熟液:(A)BM+10％EGS(发情羊血清),(B)BM+10％EGS+HCG(2.5μg/ml,),(C)BM+10％EGS+HCG+E,(1μg/ml),(D)BM+10％FCS+HCG十E_2; (E)BM+10％EGS+HCG+E_2+颗粒细胞(1.5×10~6～3.0×10~6个/ml)。在38.5℃,5％CO_2培养26h,排卵后第1天卵巢母细胞体外成熟率分别为67.67％(20/30),60.42％(29/48),83.67％(41/49),67.79％(40/59),80.82％(59/73),排卵后第5天卵巢卵母细胞,在培液D中体外成熟率为71.43％(45/63)。研究表明,超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟母细胞。     

促性腺激素对猪卵母细胞体外成熟的影响

在成熟液中同时添加不同浓度(0.25～2.0μg/mL)FSH和不同浓度(0.25～2.0μg/mL)LH,探讨这2种促性腺激素结合使用对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果显示,当FSH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL及LH的添加浓度为0.25～2.0μg/mL时,猪卵母细胞的核成熟率极显著高于没有添加FSH和LH的对照组(P<0.01),而FSH和LH不同浓度组合之间对猪卵母细胞核成熟影响差异不显著(P>0.05)。结果表明,成熟液中同时添加0.25μg/mLFSH和0.25μg/mLLH便能极显著地促进猪卵母细胞的核成熟率,国产FSH和LH用于猪卵母细胞体外成熟研究是可行的。     

家畜体外受精的研究进展

家畜体外受精技术已日趋成熟。卵泡卵母细胞体外成熟率在牛、猪、绵羊和山羊分别达到90%、87%、83%和79%。精子体外获能方面,趋向于应用肝素代替钙离子载体诱导家畜的射出精子和冷冻精子体外获能,已在牛、猪、绵羊和山羊有试管后代产生。精子注入法是80年代后期发展起来的一种新型的体外受精方法,目前已取得将兔和牛精子注入的成功,并获得了发育正常的后代。     

猪卵母细胞的体外成熟

取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的、胞质不均匀和不含卵丘细胞胞质均匀３类卵母细胞，台盘蓝染色的存活率分别为１００％，１０％和４０％，３者差异极显著。Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ４种培养液培养的成熟率分别为１６．２％，６１．５％，５５．２％，４１．５％，差异极显著。Ｅ，Ｃ，Ｆ３种培养液培养的成熟率分别为３５．５％，４７．８％，５２．６％，在Ｅ培养液中加入ＰＭＳＧ和Ｅ＿２能显著地提高成熟率。Ｃ液与卵泡液［加入２×１０￣（－６）ｍｏｌ／（Ｌ·ｓ）ＦＳＨ］培养的成熟率分别为５０％，４４．４％，受精后的卵裂率分别为１６％，１０％，成熟率、卵裂率间均无显著差异。卵母细胞体外成熟培养３６，４０，４４ｈ后授精，其相应的受精率分别为２６．７％，４４．４％，４５．８％；卵裂率分别为０．３０％，２０％；以培养４０，４４ｈ的效果稍好，但三者差异不显著。     

猪卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

 自屠宰场取猪卵巢825个，得卵母细胞8346个，将其分为3类。分类后卵母细胞在含有pFF或PMSG的TCM-199培养液中于5%CO#-2、95%空气、饱和湿度、39℃下培养36小时。成熟卵母细胞用前培养法加肝素或咖啡因获能的鲜精，以2×10#+5/ml的精子密度体外受精。在授精12-17小时以后，一些受精卵以手术法移至受体母猪输卵管中，另一些则更换BMOC-2培养液继续体外培养。3类卵母细胞间的成熟率与卵裂率有明显的差异。成熟培养液中加入PMSG和pFF，可明显提高卵母细胞成熟率（67.7%:17.8%）和桑椹胚率（6.5%∶2.8%）用笔者的培养液，有些胚胎成功地越过4细胞阻断而获得了猪的纯体外培养桑椹胚（1990.5）。移入受精卵的9头母猪，有3头妊娠，其中1头于1990年9月产5头仔猪。离子测定结果显示不同离子（Na、Ca、Cl、K）在精子某些部分、卵母细胞和受精卵的表面分布有明显改变。RMP检测指出培养前A类和部分B类卵母细胞为负值，C类和剩余部分B类为正值。培养后不同时间3类卵母细胞RMP差异明显，说明其代谢水平强弱不一。受精后皆为负值，说明物质代谢比受精前更为活跃。