与鸭C4结合蛋白互作的鸭疫里默菌外膜蛋白的筛选及鉴定

旨在筛选并鉴定与鸭C4结合蛋白（C4b-binding protein，C4BP）互作的鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer，R.anatipestifer）外膜蛋白。本研究将保存的R.anatipestifer复苏培养，提取外膜蛋白，以鸭C4BPα作为诱饵蛋白进行His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱鉴定，筛选与鸭C4BP可能发生互作的候选外膜蛋白；将各候选蛋白进行克隆、原核表达，免疫小鼠制备多克隆抗体，利用Far-western blot验证与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白；针对候选蛋白及C4BPα各功能结构域进行克隆及原核表达，利用Far-western blot鉴定候选蛋白及与C4BP的相互作用位点；利用ELISA对补体因子C3b、C4b及C4BP在R.anatipestifer表面沉积情况进行测定，验证候选蛋白的功能。结果显示，经His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱分析，共筛选出3个与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白，即ECE-1、SODs和Omp62；成功获得3个外膜蛋白多克隆抗体，ELISA检测3种多克隆抗体效价均超过1∶6 400，Western blot检测3种多克隆抗体可以与重组蛋白发生特异性反应；Far-western blot结果显示，仅ECE-1能够与C4BP发生相互作用，并且只有ECE-1全长能与鸭C4BP相互作用，而鸭C4BP与ECE-1的相互作用区域位于C4BPα的SCR 2和SCR 3；当健康鸭血清稀释度为3.125%时，ECE-1抗体能够显著促进补体因子C3b、C4b在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05），当健康鸭血清稀释度为6.25%时，ECE-1抗体能够显著抑制C4BP在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）。本研究成功筛选并鉴定出1个与C4BP互作的R.anatipestifer外膜蛋白ECE-1，为进一步阐明R.anatipestifer免疫逃逸机制奠定了基础。     

C5a-C5aR轴在鸭疫里氏杆菌感染致鸭肝损伤中的作用

本试验旨在阐明C5a-C5aR轴在鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer）感染致雏鸭肝损伤中的作用。将保存的鸭疫里氏杆菌复苏培养，同时制备鸭抗凝血，将鸭疫里氏杆菌与鸭抗凝血混匀，分别与抗C5a抗体和抗C5aR抗体孵育后进行全血试验，利用ELISA检测C5a及各炎性因子表达水平；利用鸭疫里氏杆菌感染雏鸭，同时分别用抗C5a抗体和抗C5aR抗体处理进行动物试验，采集主要组织进行病理组织学检查；采集雏鸭外周血和肝组织进行细菌计数；采集外周血分离血清后，进行血清酶活性检测，应用ELISA检测血清C5a及炎性因子水平；采集肝组织，利用荧光定量PCR检测主要炎性因子mRNA转录水平。结果显示，在全血试验和动物试验中，与R.anatipestifer组相比，R.anatipestifer +anti-C5a组和R.anatipestifer +anti-C5aR组C5a、TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平显著降低（P<0.05）；阻断C5a-C5aR轴可显著降低鸭疫里氏杆菌感染雏鸭的发病率和死亡率，同时减轻雏鸭心、肝和脾组织损伤；阻断C5a-C5aR轴能显著降低鸭疫里氏杆菌感染雏鸭外周血和肝细菌数及谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase，AST）水平；荧光定量PCR检测发现，与R.anatipestifer组相比，R.anatipestifer +anti-C5a和R.anatipestifer +anti-C5aR组C5aR、Sphk1、FGL2、TNF-α和IL-1β mRNA转录水平显著降低（P<0.05）。本研究成功证实C5a-C5aR轴激活有助于鸭疫里氏杆菌感染雏鸭，阻断C5a-C5aR轴可显著减轻雏鸭组织损伤和炎症反应，为进一步研究抗鸭疫里氏杆菌感染药物提供新思路。     

Screening and Identification of Outer Membrane Proteins of Riemerella anatipestifer Recruited Duck C4b-binding Protein

The purpose of this experiment was to screen and identify the outer membrane proteins of Riemerella anatipestifer (R. anatipestifer) interacting with duck C4b-binding protein (C4BP). The preserved R. anatipestifer was resuscitated, then the outer membrane proteins of R. anatipestifer were extracted and His pull-down and LC-MS/MS were conducted by using duck C4BPα as the bait protein, and the candidate outer membrane proteins that might interact with duck C4BP were screened out. The candidate proteins were cloned, prokaryotic expression was conducted and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing the mice. Far-western blot was conducted to verify the outer membrane proteins of R. anatipestifer interacting with duck C4BP. The clone and prokaryotic expression of functional domains of candidate proteins and C4BPα were conducted, and Far-western blot was used to identify the interaction sites between candidate proteins and C4BP. The deposition of complement C3b, C4b and C4BP on the surface of R. anatipestifer were detected by ELISA to verify the function of the candidate proteins. The results showed that a total of 3 outer membrane proteins of R.anatipestifer interacting with duck C4BP were screened out by His pull-down and LC-MS/MS, namely ECE-1, SODs and Omp62. The polyclonal antibodies of 3 outer membrane proteins were successfully prepared, the titers of 3 polyclonal antibodies were more than 1∶6 400 by ELISA, and the result of Western blot showed that 3 polyclonal antibodies could specifically react with corresponding recombinant proteins. The results of Far-western blot showed that only ECE-1 could interact with C4BP, and only the full length of ECE-1 could interact with duck C4BP, and the interaction region between duck C4BP and ECE-1 was located in SCR 2 and SCR 3 of C4BPα. Anti-ECE-1 antibody could significantly increase the C3b and C4b deposition on the surface of R. anatipestifer using 3.125% normal duck serum (NDS, P<0.05), while anti-ECE-1 antibody could significantly decrease the deposition of C4BP on the surface of R. anatipestifer using 6.25% NDS (P<0.05). The study successfully screened out and identified one outer membrane protein (ECE-1) of R. anatipestifer interacting with duck C4BP, which provide a basis to further study the mechanism of R. anatipestifer immune escape.     

鸭疫里默氏杆菌MFS外排泵rant基因缺失株的构建及其介导的耐药性

旨在构建鸭疫里默氏杆菌rant基因缺失株及回复株,明确MFS外排泵Rant对鸭疫里默氏杆菌耐药性的影响。本研究以鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株为研究对象,通过自杀质粒pRE112介导的同源重组,以红霉素抗性标记进行正向筛选,获得基因缺失株Δrant,并以大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭质粒pCPRA作为载体,构建回复株cΔrant。采用微量肉汤稀释法测定11类临床常用抗生素对野生株、缺失株及回复株的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）,并测定3株菌的生长曲线,评价菌株对雏鸭的致病能力。结果表明,与野生株和回复株相比,四环素类抗生素对缺失株的MIC值明显下降,其他类抗生素的MIC值无变化;缺失株的生长速率明显下降;rant基因的缺失显著降低鸭疫里默氏杆菌的毒力。结果提示,鸭疫里默氏杆菌rant基因介导四环素类抗生素的外排,并可明显影响鸭疫里默氏杆菌的生长和毒力。     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Riemerella anatipestifer from Muscovy Duck

In order to understand the drug resistance of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck,this study carried out bacterial isolation and culture,Gram staining microscopy,pathogen detection,biochemical test,16S rRNA sequence analysis,PCR identification,drug sensitivity test and drug resistance gene detection for Muscovy duck suspected of Riemerella anatipestifer infection.The results of bacterial isolation showed that on the blood agar medium,the isolated bacteria grew creamy needle tip size colonies with smooth surface,neat edge,luster and translucency.The Gram-negative bacillus brevis was detected by Gram-negative staining microscopy,and it was named GZQN201907.In the biochemical test of GZQN201907,urea reaction was positive,but glucose,maltose,lactose and other biochemical reactions were negative.The 16S rRNA phylogenetic tree was in the same branch as Riemerella anatipestifer.And the OmpA gene of PCR identification results of the isolated strain were positive.The drug sensitivity test was sensitive to 18 antibiotics including cefuroxime,erythromycin and ceftazidime,moderately sensitive to carboxypicillin and ciprofloxacin,and sensitive to neomycin and cotrimoxazole.And the resistance genes could detect the β-lactam resistance genes VIM and TEM,tetracycline resistance genes tetB,macrolide resistance genes ermB and ermF.The results of drug sensitivity test and drug resistance gene detection indicated that GZQN201907 showed the same resistance phenotype and gene detection results for β-lactam,tetracycline and macrolide.In the animal regression test,all the ducklings inoculated with GZQN201907 died within 72 h,while the control group showed no symptoms,indicating that GZQN201907 was virulent to the ducklings.One strain of Riemerella anatipestifer from Muscovy duck was successfully isolated,which laid a foundation for the prevention and treatment of Riemerella anatipestifer from muscovich.     

番鸭源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解番鸭源鸭疫里默氏杆菌的耐药性,本研究对疑似鸭疫里默氏杆菌感染的发病番鸭进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、病鸭病原检测、生化试验、16S rRNA序列分析、PCR鉴定、药敏试验和耐药基因检测。细菌分离结果显示,分离菌在鲜血琼脂培养基上长出表面光滑、边缘整齐、有光泽、半透明的奶油状针尖大小菌落;革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短小杆菌,命名为GZQN201907。GZQN201907生化试验中尿素反应阳性,葡萄糖、麦芽糖、乳糖等生化反应呈阴性。其16S rRNA系统进化树与鸭疫里默氏杆菌处于同一分支;并且分离菌鸭疫里默氏杆菌OmpA基因PCR鉴定结果为阳性。其对头孢呋辛、红霉素、头孢他啶等18种抗菌药耐药,对羧苄西林和环丙沙星中度敏感,对新霉素和复方新诺明敏感。而耐药基因能检测出β-内酰胺类耐药基因VIM、TEM,四环素类耐药基因tetB,大环内酯类耐药基因ermB和ermF。药敏试验与耐药基因检测结果说明,GZQN201907对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类3类药物的耐药表型和耐药基因检测结果一致。动物回归试验中接种GZQN201907的雏鸭在72 h内全部死亡,而对照组雏鸭未出现任何症状,说明GZQN201907对雏鸭有致病力。试验成功分离到1株番鸭源鸭疫里默氏杆菌,为鸭疫里默氏杆菌病的防治奠定基础。     

贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为了解贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）的流行血清型、毒力和耐药情况，本试验从贵州省三穗县6个规模养鸭场临床疑似RA感染的病鸭体内分离出6株分离菌，对病原菌进行分离鉴定、毒力基因检测和耐药性分析。细菌分离鉴定结果显示，分离菌在巧克力琼脂培养基上长出表面光滑、圆形半透明的滴状菌落；革兰氏染色呈阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；分离菌均不具运动性，尿素、触酶和氧化酶试验均为阳性，符合RA生化特性，将6株分离菌分别命名为SS-RA1~SS-RA6；6株分离菌的16S rRNA基因序列与NCBI上RA参考菌株的基因序列相似性≥98%，说明6株分离菌均是RA；SS-RA1~SS-RA4为血清2型且含有8种毒力基因（OmpA、CAMP、wza、AS87_04050、Fur、SIP、TbdR1和luxE基因），SS-RA5和SS-RA6为血清11型，缺失AS87_04050基因，仅含有上述其余7种毒力基因；动物回归试验结果显示，攻毒组雏鸭均全部死亡，对照组雏鸭未表现明显临床症状，表明6株分离菌对雏鸭均有致病力；药敏试验结果显示，6株分离菌仅对羧苄西林、哌拉西林、头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢拉定和头孢哌酮7种抗菌药物敏感，对其他13种抗菌药物均表现不同程度的耐药，对氨基糖苷类和大环内酯类抗菌药物的耐药率为100%。本试验成功分离得到6株RA，为贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌病的疫苗选择和药物防治提供理论依据。     

Atypical Pasteurella haemolytica type A from poultry

Atypical strains of Pasteurella haemolytica that failed to ferment maltose were isolated from nodular necrosis in the liver and heart blood of domestic fowl (Gallus domestica). These strains did not typically behave like either of the two well-known biotypes of P. haemolytica. The strains utilized trehalose and produced hydrogen sulfide (H2S), thus behaving like P. haemolytica type T, and produced acid in xylose but not in salicin, thus behaving like P. haemolytica type A. Most of the properties of the strains, however, conformed closely to those of P. haemolytica type A. Detailed characteristics of the isolates are described and discussed.     

Enolase在鸭疫里默氏杆菌侵袭鸭脑微血管内皮细胞中的作用

旨在明确鸭疫里默氏杆菌烯醇化酶(Enolase)在其侵袭鸭脑微血管内皮细胞(DBMEC)以及血脑屏障(BBB)中的作用。本研究以鸭疫里默氏杆菌RA-LZ01株为亲本株，利用同源重组和结合转移的方法构建enolase基因缺失株ΔEnolase和回复株cΔEnolase，并测定RA-LZ01、ΔEnolase和cΔEnolase对DBMEC黏附和侵袭能力的差异；用上述菌株感染雏鸭，测定雏鸭血液和脑组织中的载菌量。结果表明，与亲本株RA-LZ01相比，缺失株ΔEnolase对DBMEC的黏附率和入侵率均极显著降低；回复株cΔEnolase恢复了对DBMEC的黏附和入侵能力。感染RA-LZ01、ΔEnolase和cΔEnolase菌株的雏鸭的血液载菌量无显著差异；与感染RA-LZ01和cΔEnolase菌株的雏鸭相比，感染ΔEnolase菌株的雏鸭脑组织中的载菌量极显著降低。以上结果说明，Enolase与鸭疫里默氏杆菌黏附和入侵DBMEC以及入侵雏鸭脑组织显著相关，可能为介导鸭疫里默氏杆菌突破鸭血脑屏障的毒力因子。     

牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】了解西藏拉萨地区牦牛链球菌的感染情况、致病性及其耐药性,为牦牛源链球菌的研究提供新的数据。【方法】对55份牦牛鼻拭子进行细菌分离培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列PCR扩增以鉴定分离菌的种属特性。通过人工感染试验小鼠评价分离菌的致病性,采用药敏纸片扩散法检测分离菌的耐药性。【结果】分离菌在血平板上长出灰白色、表面光滑的α溶血圆形菌落,革兰氏染色镜检呈链状排列的阳性球菌。分离菌可发酵葡萄糖、乳糖、海藻糖和山梨醇,不发酵麦芽糖和甘油,硝酸盐还原试验、靛基质试验、V-P试验和MR试验均呈阴性。经16S rRNA基因序列比对分析,确定有25株链球菌(Tibet-1～Tibet-25),检出率为45.46%(25/55),其中17株多动物链球菌,8株马链球菌。分离菌16S rRNA基因序列与NCBI上已发布的链球菌相似性在97.04%～99.77%之间,其中Tibet-1、Tibet-2、Tibet-3、Tibet-5、Tibet-9、Tibet-10、Tibet-11、Tibet-14、Tibet-15、Tibet-16、Tibet-17共11株牦牛源多...     

广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析

本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示，245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%（152/245），共鉴定出19种血清型，其中主要血清型有阿贡纳（Salmonella Agona，29/152，19.08%）、科瓦利斯（S.Corvallis，25/152，16.45%）以及肯塔基（S.Kentucky，20/152，13.16%）。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑（100%）、萘啶酸（90%）、四环素（75%）、氨苄西林（65%）、头孢他啶（55%）、环丙沙星（55%）的耐药率较高，有85%（17/20）的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示，95%（19/20）的菌株具有gyrA突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly），其中有57.89%（11/19）的菌株发生gyrA双突变（Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly），5.26%（1/19）发生gyrA三突变（Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly）；100%（20/20）的菌株具有parC突变（Tyr62Ser、Ser85Ile）。45%（9/20）分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性（PMQR）基因（aac（6'）-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB），最常见的是aac（6'）-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因bla_TEM-1、bla_OXA-1和bla_CTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示，肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性，部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重，对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重，具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能，为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。     

1株大黄鱼源金黄杆菌的分离鉴定和耐药性分析

【目的】 探究引发浙江省某养殖场大黄鱼发病的病原及其致病性和耐药情况。【方法】 无菌条件下剖检发病大黄鱼，取其肝脏和肾脏组织，划线分离培养细菌，通过形态学观察、生理生化试验、16S rRNA基因序列分析鉴定分离菌的种属特性，通过人工感染和组织切片制备评价分离菌对大黄鱼的致病性，最后通过药敏纸片法检测分离菌的耐药性。【结果】 分离菌在培养基上外观为表面凸起、光滑和边缘整齐的黄色圆形菌落；革兰氏染色后光学显微镜下呈现出单个分散或成对分布的红色短棒状杆菌；该分离菌可在麦康凯琼脂上生长，可利用葡萄糖产酸；16S rRNA基因序列相似性分析及系统进化树显示，该分离菌与金黄杆菌相似性高达97.0%以上并聚为一类。动物回归试验结果显示，分离菌可引起大黄鱼的肝脏、肾脏和脾脏发生明显病变，半数致死量为6.32×10⁴ CFU/mL，表明其对大黄鱼具有较强致病性；药敏结果显示，分离菌对阿米卡星和左氧氟沙星敏感，对庆大霉素、新霉素和红霉素中度敏感，对头孢克肟、氨苄西林、卡那霉素、呋喃唑酮等耐药。【结论】 本研究分离了大黄鱼源致病株金黄杆菌，并通过其致病性和耐药性研究为金黄杆菌引发水产动物发生病害的防控和治疗提供参考。     

鸭疫里默氏菌感染对鸭肠道菌群结构的影响

试验旨在分析鸭疫里默氏菌（RA）感染不同时期鸭肠道菌群结构变化规律，探讨鸭疫里默氏菌对鸭肠道微生物的影响及引起鸭致病的可能机制。采用细菌16S V4-V5区扩增通用引物，扩增鸭疫里默氏菌未感染组（鸭疫里默氏菌感染0 d组），鸭疫里默氏菌感染后1、2、3、5、9和14 d的鸭直肠内容物样本DNA，将扩增得到的产物进行DNA建库后基于Ion S5^TMXL测序平台测序。测序得到的Raw Reads数据总量为4 710 688条序列，平均每个样本84 119条序列。共注释到数据库的操作分类单元（OTUs）数目为4 528。Alpha多样性分析结果表明，菌群多样性指数Shannon和Simpson在鸭疫里默氏菌感染组和未感染组间差异不显著（P>0.05），菌群丰富度指数Chao1、Ace、Observed-species和PD-whole-tree在鸭疫里默氏菌感染后0~5 d逐渐降低，从5~14 d又逐渐增加，尤其在鸭疫里默氏菌感染后3和5 d均显著低于未感染组（P<0.05）。Beta多样性分析表明，未感染组与6个时间点的感染组间菌群差异均显著（P<0.05），其中，未感染组与感染后3 d的物种差异最大，之后依次为感染后2、5、9、1和14 d。物种丰度聚类热图显示，在未感染组和不同时间感染组，物种丰度相对较高的微生物菌属均不同。在门水平，鸭疫里默氏菌感染组主要以厚壁菌门（Firmicutes）、unidentified-Bacteria、拟杆菌门（Bacteroidetes）、梭杆菌门（Fusobacteria）及变形菌门（Proteobacteria）为主；在属水平，Bacteroides在感染组和未感染组均为优势菌属，感染组中弯曲杆菌属（Campylobacter）和梭杆菌属（Fusobacterium）明显增加。本试验分析了鸭疫里默氏菌未感染组和感染不同时间组肠道菌群的差异，寻找到一些特征菌属，可为鸭疫里默氏菌的致病性研究提供理论依据。     

苜蓿青贮乳酸菌的筛选及其对苜蓿青贮发酵的影响

为获得苜蓿青贮用乳酸菌,本研究从苜蓿附生乳酸菌中通过抑菌活性、酸化苜蓿粉及结构性糖代谢中间产物的性能指标筛选优良菌株,并研究其对苜蓿(Medicago sativa)青贮发酵的影响。结果表明,1)筛选到抑菌活性较高、酸化苜蓿粉及结构性糖代谢中间产物综合性能较好的菌株ZZU A341,被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum);2)青贮90 d,添加该菌株的处理组pH、氨态氮含量低于添加商业菌株(YX)的处理组,显著低于自然青贮(P<0.05)。综上所述,使用该筛选方法获得的优良乳酸菌可有效改善苜蓿发酵品质。     

江西地区鸭疫里氏杆菌的鉴定及药敏试验

从江西部分地区的25份临床疑似鸭疫里氏杆菌(RA)病例中分离到19株RA。生化特性测定结果表明,19个RA菌株的过氧化氢酶、尿素酶均为阳性,除1株发酵葡萄糖、1株发酵麦芽糖外均不发酵各种糖类,5个RA菌株能液化明胶,15个RA菌株氧化酶阳性,不产生H2S,不还原硝酸盐,吲哚试验、MR试验、VP试验均阴性;80%的菌株对头孢曲松、头孢哌酮、头孢唑啉、罗红霉素等高度敏感,而对阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明、卡那霉素、青霉素等耐药。     

Biochemical characterization of staphylococci isolated from goats

Caprine strains of staphylococci show strong and early results in carbohydrate fermentation tests. Their ability to produce DNase and acetoin is weak but they possess a reasonably high degree of phosphatase activity. All the 82 isolates of Staphylococcus aureus isolated from clinically healthy and sick goats produced acid from D-(+)-glucose aerobically at 37 degrees C within 24 h, 98.8% fermented both D-mannitol and maltose, 98.7% fermented sucrose, and 81.7% fermented D-(+)-xylose with acid production, but none fermented L-sorbose. Of the ten coagulase-negative staphylococci characterized to be of animal origin, three produced DNase, but none fermented dulcitol and L-sorbose. All fermented D-(+)-glucose, maltose and D-mannitol, eight fermented D-(+)-xylose and D-sorbitol with acid production. Whilst other coagulase-positive and coagulase-negative staphylococci showed different antibiotic susceptibility patterns, the ten coagulase-negative staphylococci characterized to be of animal origin showed similar antibiotic susceptibility patterns.     

不同降水量条件下C3植物红砂—C4植物珍珠混生光合特性研究

为探明种间关系和降水变化对混生植物群落光合特性的影响,以C₃植物红砂（Reaumuria soongarica）和C₄植物珍珠（Salsola passerina）为研究对象,沿自然降水梯度测定单生和混生红砂与珍珠光合参数。结果表明：混生可提高红砂的净光合速率、蒸腾速率、气孔导度,平均分别增加12.3%,13.7%,20.4%;而珍珠相反,平均分别减少5.5%,14.1%,28.9%。随降水的减少,混生红砂与珍珠的光合速率并没有显著提高,表明随干旱胁迫梯度增加其互惠作用并没有得到加强,并不支持胁迫梯度假说。西北干旱区和半干旱区红砂的净光合速率（Net Photosynthesis Rate,Pn）、蒸腾速率（Transpiration Rate,Tr）和气孔导度（Stomatal conductance,Gs）整体高于珍珠,平均分别增加6.6%,36.9%,27.8%,但其水分利用效率（Water Use Efficiency,WUE）低于珍珠,降低13.9%。研究表明,红砂可通过种间互惠更好地利用养分资源适应种间竞争及干旱胁迫环境,而混生珍珠竞争作用加强,在我国西北干旱和半干旱区红砂主要是通过提高光合速率来适应干旱环境,珍珠则通过提高水分利用效率来维持生长。     

鸭疫里氏杆菌二价灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】根据鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)血清1型、2型贵州流行株制备二价灭活疫苗,为鸭疫里氏杆菌病的防控及疫苗研制提供研究资料。【方法】以血清1型RA(RA-G06株)、血清2型RA(RA-HS01株)地方流行株为菌种,通过涂板法测定菌株生长曲线,利用改良寇氏法计算菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将2株菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后等比例混合,以卡波姆为佐剂制备二价灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行雏鸭免疫试验;通过检测免疫鸭血清中特异性抗体水平和攻毒保护试验评价疫苗的保护率,对攻毒试验鸭心脏、肝脏、脾脏和脑组织进行组织病理学观察。【结果】RA-G06株和RA-HS01株均在培养12 h时到达峰值,活菌数分别为2.1×10¹¹和3.3×10¹¹ CFU/mL,LD₅₀分别为1.44×10¹⁰和2.63×10⁸ CFU/mL;制备的疫苗安全性良...     

组合微生物利用发酵秸秆产乳酸效果的研究

为了更好的利用玉米芯、玉米秸秆等农业废弃物,提高其综合利用率,减少传统化学方法及秸秆焚烧过程造成的环境污染,试验采用里氏木霉与鸡腿菇混合发酵产粗酶液降解秸秆等废弃物,再利用米根霉将废弃物转化为乳酸。此试验中以商品纤维素酶处理的玉米芯及秸秆为对照进行乳酸发酵试验。鸡腿菇与里氏木霉按5∶2的接种比例,接种时间间隔为12h,在26℃,150r/min培养3d,此时漆酶酶活比鸡腿菇单独发酵酶活提高106%。用以上两菌混合发酵3d的粗酶液在50℃,pH5.0,120r/min下酶解原材料84h,酶解得率为55.2%,米根霉再转化酶水解液产乳酸量为3.69g/L,糖酸转化率为67.40%。     

抑制黄曲霉乳酸菌的筛选与鉴定

黄曲霉是玉米(Zea mays L.)青贮过程的主要污染物之一，本研究旨在从玉米青贮饲料中分离筛选出能够抑制黄曲霉菌生长的乳酸菌，为改善和提高青贮饲料品质提供优良菌种。本试验采用双层平板法，从玉米青贮饲料中筛选抑制黄曲霉的菌株，并对其进行生理生化鉴定及同源性分析，构建系统发育树，明确各菌株的分类地位。结果表明：从青贮发酵不同阶段筛选得到50株乳酸菌，其中有7株乳酸菌对黄曲霉有明显抑制作用(P<0.05),抑菌圈直径均大于3.60 cm,均为革兰氏阳性同型发酵乳酸菌，7株乳酸菌中Q39(49.40%)和Q40(49.60%)抑菌效果最好，抑菌圈直径为4.15 cm和4.17 cm,显著高于其他5株乳酸菌(P<0.05);菌株Q11,Q28,Q40,Q44与22种碳水化合物作用均呈阳性，菌株Q39和Q49与鼠李糖作用呈阴性，与松三糖反应呈弱阳性，菌株Q13相较于其他6株菌株对于碳源的利用情况较弱；经16S rDNA鉴定确定菌株Q39和Q49为植物乳杆菌，Q11,Q13,Q29,Q40,Q44为戊糖乳杆菌。菌株Q39和Q40可作为全株玉米青贮发酵的备选添加菌株。