柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定

 【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。     

刺参肠道潜在产酶益生菌的筛选和鉴定

从健康刺参Apostichopus japonicus(体质量为10～30 g)肠道中分离出50株细菌,以点种法在选择培养基上对菌株产淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶的能力进行测试,筛选出产3种酶以上的细菌13株,并定量测定了其中9株菌的淀粉酶和蛋白酶活力。依据产酶能力选6株细菌进行溶血试验。结果表明:6株菌均不产生溶血素,不具有潜在的致病性,选3株产酶细菌BC26、BC228、BC232进行毒力测试,经一个月观察证实,无论给刺参腹腔注射细胞浓度为107cfu/mL的菌悬液,还是投喂含细菌浓度为109cfu/g的干饲料,刺参都是安全的;对细菌16S rDNA序列同源性的分析表明,BC26、BC228、BC232菌株分别与芽孢杆菌Bacillus sp.FA132、假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.NBRC102016和塔斯马尼亚弧菌Vibrio tas-maniensis 04102的相似性均为99%。     

刺参肠道潜在产酶益生菌的筛选和鉴定

从健康刺参Apostichopus japonicus(体质量为10～30 g)肠道中分离出50株细菌,以点种法在选择培养基上对菌株产淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶和纤维素酶的能力进行测试,筛选出产3种酶以上的细菌13株,并定量测定了其中9株菌的淀粉酶和蛋白酶活力。依据产酶能力选6株细菌进行溶血试验。结果表明:6株菌均不产生溶血素,不具有潜在的致病性,选3株产酶细菌BC26、BC228、BC232进行毒力测试,经一个月观察证实,无论给刺参腹腔注射细胞浓度为107cfu/mL的菌悬液,还是投喂含细菌浓度为109cfu/g的干饲料,刺参都是安全的;对细菌16S rDNA序列同源性的分析表明,BC26、BC228、BC232菌株分别与芽孢杆菌Bacillus sp.FA132、假交替单胞菌Pseudoalteromonas sp.NBRC102016和塔斯马尼亚弧菌Vibrio tas-maniensis 04102的相似性均为99%。     

剩余污泥碱性发酵产蛋白酶菌株的筛选与鉴定

为了能够缩短剩余污泥碱性发酵周期,从碱性发酵剩余污泥中筛选产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,利用形态学、生理生化、分子生物学特征对筛选到的菌株进行鉴定。结果表明,从碱性厌氧发酵剩余污泥中最终筛选获得2株产蛋白酶活力较高的耐碱细菌HIT-01菌株和HIT-02菌株,经鉴定分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)。为进一步利用筛选获得的优势菌株构建生物菌剂、从而快速启动污泥碱性发酵开拓了新思路。     

新疆阿勒泰和温泉县冷水鱼肠道产低温蛋白酶菌株的筛选及其酶学性质的研究

[目的]从50株冷水鱼肠道产蛋白酶菌株中筛选优良产酶菌株,并研究其酶学性质,为高效低温蛋白酶技术的研发奠定基础。[方法]对比脱脂乳平板初筛结果确定供试菌株,对选定菌株进行表型及16S rRNA/26S rRNA序列同源性分析,确定产酶菌株的进化地位。用Folin酚显色法复筛,并研究最佳产酶菌株所产蛋白酶的酶学性质。[结果]从6株供试菌株中筛选出一株高产酶菌株P-D-10,初步鉴定隶属于Pseudomonas。酶学性质的初步研究显示,P-D-10产生的蛋白酶最适反应pH在8.5左右;在0～60℃均有催化活性;具有10和40℃2个最适酶活温度;热稳定性较差,在70℃水浴10 min后剩余酶活力仅为20.14%。除了Tween-80对该酶酶活力有促进作用外,其他金属离子、还原剂、表面活性剂和金属离子螯合剂对该酶酶活力均有不同程度的抑制作用。[结论]筛选获得的高产酶菌株P-D-10隶属于Pseudomonas,是一株具有研究与应用潜力的产低温蛋白酶菌株。     

饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡肠道内容物pH、消化蛋白酶活性及菌群的影响

【目的】研究蛋鸡饲粮中添加不同水平的碳酸氢钠对肠道内容物pH、消化蛋白酶活性和肠道菌群的影响,以探讨饲粮中添加碳酸氢钠对蛋鸡消化机能的影响。【方法】选取21周龄海兰褐壳蛋鸡450只,随机分为5组,每组6个重复,每重复15只鸡;对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加0.1%,0.5%,2.5%,5%NaHCO3的试验饲粮,试验期133d。试验期末采集各组肌胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠食糜及粪便,测定各段食糜和粪便的pH、肌胃食糜的胃蛋白酶活性、十二指肠食糜的胰蛋白酶和糜蛋白酶活性以及回肠和盲肠食糜中菌群的变性梯度凝胶电泳(DGGE)指纹图谱,并计算回肠、盲肠食糜的多样性指数和相似性指数。【结果】1)饲粮中添加0.1%和0.5%的碳酸氢钠对蛋鸡肠道各段pH无显著影响,而饲粮中添加2.5%和5%的碳酸氢钠可显著提高蛋鸡肌胃、十二指肠和空肠内容物以及粪便的pH(P0.05)。2)饲粮中添加2.5%和5%的碳酸氢钠可显著降低肌胃中胃蛋白酶、十二指肠中胰蛋白酶和糜蛋白酶活性(P0.05)。3)饲粮中添加碳酸氢钠可改变蛋鸡回肠和盲肠的微生物多样性指数。【结论】饲粮中添加高剂量的碳酸氢钠(2.5%和5%)显著影响蛋鸡消化道内环境,降低蛋鸡的蛋白消化机能。     

獭兔肠道菌群的研究进展

獭兔是一种皮肉类兼用的重要经济动物,在规模化养殖中,其易出现腹泻等消化道疾病,给獭兔养殖带来巨大经济损失。肠道菌群对獭兔的免疫、消化等有重要影响。文章主要就獭兔道菌群结构及抗生素、微生态制剂等对獭兔肠道菌群影响进行概述。     

鸡肠道乳酸菌的分离及其对肠道菌群的影响

从肉鸡肠黏膜上分离得到6株菌,均为G+菌,生理生化鉴定表明,S2为嗜酸乳杆菌,S4为德氏乳杆菌乳亚种,S6为德氏乳杆菌德氏亚种,S1,S3和S5为粪肠球菌。在肉鸡雏苗中投喂添加由S2,S4,S6制备的微生态制剂和土霉素,检测好氧性异养菌、鸡伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和乳酸菌的数量。结果表明,在投喂冻干菌粉后,在30 d后乳酸菌数量达到稳定并在肠道内定殖。同时,由于乳酸菌的抑制作用,肠道中的鸡伤寒沙门氏菌数量下降最明显。乳酸菌对鸡肠道的好氧性异养菌没任何影响。乳酸菌对鸡肠道菌群的影响与抗生素具有相近的效果。     

饲粮添加复合益生菌对产蛋后期蛋鸡生产性能、肠道抗氧化能力和肠道氨氮含量的影响

为研究饲粮添加嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌复合制剂对产蛋后期生产性能和肠道健康的影响,选取2 160只50周龄的海兰褐蛋鸡随机分为3组,分别饲喂基础日粮(NC组)以及添加250 mg·kg^-1(LD组)或500 mg·kg^-1(HD组)嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌复合制剂的日粮。结果表明：与NC组相比,LD和HD组蛋鸡产蛋率在49 d时分别提高了2.62%和2.20%,HD组蛋鸡平均日采食量(ADFI)显著降低(P<0.05)。与NC组相比,LD组的回肠组织中过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和盲肠总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05);HD组中盲肠和回肠的T-AOC、GSH-Px活性,CAT活性以及盲肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著增加(P<0.05)。LD组盲肠内容物中乙酸、正戊酸和异戊酸含量显著上升(P<0.05),HD组中乙酸、丙酸和正丁酸含量显著升高(P<0.05);HD组盲肠内容物中氨氮、尿素含量和尿酸酶相对活性显著降低(P<0.05),尿酸水平升高(P...     

刺参肠道微生物组成分析及产酶、溶血性试验

对野生和人工养殖刺参的肠壁及内容物中的菌群数量、种类组成进行了研究;并结合产酶试验和溶血性试验,对刺参肠道益生菌做了初步的体外筛选.结果表明,野生刺参肠壁及内容物中的细菌数量分别为(3.30±0.41)×107 cfu/g、(6.39±0.32)×107 cfu/g,养殖刺参肠壁及内容物中的细菌数量分别为(2.83±0.31)×107 cfu/g、(5.67±0.53)×107 cfu/g.野生刺参肠道优势菌为弧菌属(Vibrio),次优势菌为假单胞菌属(Pseudomonas)和希瓦氏菌属(Shewanella);养殖刺参肠道优势菌为弧菌属(Vibrio),次优势菌为假单胞菌属(Pseudomonas).在224株细菌中,共有160株细菌具有产酶能力,所占比例为71.43％,其中具产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶能力菌株分别为114株、114株、108株,所占比例分别为50.89％、50.89％、48.21％.99株细菌中有23株具有溶血性,所占比例为23.23％.综合分析实验数据,确定6株细菌作为刺参肠道潜在益生菌,菌株代号分别为HS1(Pseudomonas)、HS5 (Bacillus)、HS7(Shewanella)、HS8(Vibrio)、HS10(Vibrio)、HS11(Vibrio).     

獭兔胃肠道乳酸菌的分离与鉴定

为探索獭兔胃肠道中固有的乳酸菌群,丰富乳酸菌应用,选择中性或偏酸性MRS培养基分离并培养健康獭兔胃肠道中的乳酸菌、16S rDNA测序对所获菌株进行种属鉴定、基因组DNA荧光定量PCR检测其在40、80日龄的獭兔胃肠道中的相对含量。结果从獭兔胃、空肠、盲肠、结肠、直肠中均分离出1株粪肠球菌;胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠中均分离出1株短乳杆菌;胃、十二指肠、回肠、盲肠、结肠、直肠中均分离出1株植物乳杆菌;十二指肠、空肠、盲肠、结肠中均分离出1株空肠肠球菌。所获菌株在獭兔胃肠道中普遍分布,并且其相对水平随獭兔日龄的增长而升高,这些菌类有待成为獭兔内源乳酸菌饲料添加剂的备用选择。     

棉花内生细菌的分离及生防益菌的筛选

对不同品种和不同种植地区的健康棉花植株组织中内生细菌进行分离,共得到102个菌株.经鉴定分属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、黄单孢菌属(Xanthomonas sp.)、假单孢菌属(Pseudomonas sp.)、欧文氏菌属(Erwinia sp.)及短小杆菌属(Curtobacterium sp.),其中芽孢杆菌的分离频率最高,为优势种群.对内生细菌数量测定表明,棉花种子、根、茎、叶柄、叶片等组织内均存在大量的内生细菌.不同品种、组织及种植地,内生细菌的数量不同.各组织中内生细菌的种群密度的分布特点是种子中最多,其次为根,再次为茎,叶片、花蕾,叶柄中最少.从87个棉花内生菌的分离菌株中筛选出对棉花枯萎病菌有体外拮抗活性的菌株22个,占菌株总数的25;;15株对立枯丝核菌有抑制作用,占菌株总数的17;.15株对两种病原菌都有抑菌作用,其中有些菌株表现出较强抑菌活性,具有作为生防菌的潜能.     

中药有效成分抽提物体外抑菌试验及对仔猪生长和肠道微生物区系的影响

 复方中药应用常温及低温减压抽提,其提取物对仔猪的饲养试验结果表明,能显著促进小猪生长,并可有效调节肠道的微生物区系。体外抑菌试验表明,抽提物对猪肠道主要致病菌大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌及链球菌等有较强的抑菌效果。     

我国海鲈养殖现状及养殖技术分析

我国海水鱼类的养殖历史最为悠久.400多年前的明朝,人们就开始鲻鱼的人工养殖.改革开放至今,我国海水网箱养殖得到迅速发展,现已成为继藻类、贝类和对虾养殖之后的又一水产支柱产业,并具有巨大的发展潜力.海鲈的养殖水域十分广泛,其在常见的淡水池塘、海水池塘、淡水工厂、海水工厂、网箱、内陆盐碱水域中都能很好生长,优异的环境适应能力、较强的抗病力以及饲料来源广泛等优点使其成为我国优良的人工海水养殖品种.目前海鲈年产量突破10万t,稳居海水养殖鱼类之首.     

北冰洋产淀粉酶海洋细菌的筛选与鉴定及其产酶条件的优化

[目的]筛选与鉴定北冰洋产淀粉酶海洋细菌,并对筛选出的细菌进行产酶条件优化。[方法]从156株北冰洋海洋细菌中筛选出淀粉酶高产菌株Arc B84A,并对其进行了菌株形态学鉴定、16S rRNA分子鉴定以及产酶条件优化。[结果]菌株Arc B84A属于交替假单胞菌属。菌株Arc B84A的最佳产酶条件为：培养基起始pH值为7.0～8.0;最佳碳源为0.5%葡萄糖;最佳氮源为1.0%蛋白胨;Tri-tonX-100、Tween-20、Tween-80等表面活性剂可以提高菌株淀粉酶活性,其中1.0%Tween-80的效果最为明显。[结论]该研究为海洋细菌淀粉酶的生产与应用提供了理论依据。     

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria, NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441 bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans (AY665978.1) 16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。     

暗纹东方鲀胃蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶催化 N-卞氧羰酰 L-赖氨酸对-硝基酚酯(CBZ-Lys.pNP)的 Km 值为 0.112 mmol/L.几种矿物质离子对酶活力的影响表明,Ca2+,Mn2+,Mg2+对酶有激活作用,Zn2+,Fe2+对酶有抑制作用.     

一株亚硝酸盐降解菌的分离鉴定

为寻找对亚硝酸盐具有高效降解能力、稳定和安全的优良菌株,采用亚硝酸盐氧化细菌(Nitrite-oxidizing bacteria,NOB)富集、分离技术从湖州某水域淤泥中分离得到一株纯培养菌株N3。提取细菌的总DNA,利用细菌16S rDNA特异性引物进行多聚酶链反应(PCR)扩增;扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和Sanger末端终止法测序分析,用NCBI-Blast软件将测序结果在Genbank等数据库中进行同源性检索。结果表明,N3的DNA扩增产物片断大小为1441bp,测序结果经检索证实N3与标准菌株Cellulosimicrobium cellulans(AY665978.1)16S rDNA保守性片段有100%的同源性,可以判定所分离得到的N3菌株为纤维单胞菌属的纤维化纤维单胞菌(Cellulosimicrobium cellulans)。     

鹅肠道纤维分解菌的分离筛选及酶活力研究

从吉林白鹅回肠、盲肠内壁刮取物中分离筛选出4株纤维素分解细菌。在羧甲基纤维素钠、豆秆粉等组成的液体发酵培养基中菌株M6的最大酶活力达到51.4 U。酶的最适作用温度60℃,其中菌株M6产生的酶在pH 4时酶活力较高,而其他3株菌产生的酶在pH 6时酶活力较高。模拟鹅盲肠条件,将单菌株及复合系菌株分别接种到苜蓿、玉米秸秆及羊草中,发现接种H1&#215;M2&#215;M6菌株的苜蓿中的粗纤维降解率达到了7.87%。     

鹅肠道纤维分解茵的分离筛选及酶活力研究

从吉林白鹅回肠、盲肠内壁刮取物中分离筛选出4株纤维素分解细菌.在羧甲基纤维素钠、豆秆粉等组成的液体发酵培养基中菌株M6的最大酶活力达到51.4 u.酶的最适作用温度60℃,其中菌株M6产生的酶在pH 4时酶活力较高,而其他3株菌产生的酶在pH 6时酶活力较高.模拟鹅盲肠条件,将单菌株及复合系菌株分别接种到苜蓿、玉米秸秆及羊草中,发现接种H1×M2×M6菌株的苜蓿中的粗纤维降解率达到了7.87%.