不结球白菜Ogu胞质雄性不育新种质及其保持系的生理生化分析

以新育成的不结球白菜(Brassica campestris L．ssp．chinensis Makino var．communis Tsen et Lee)新种质及其保持系为试材，对不育基因表达过程中叶片的色素含量及花药组织的游离氨基酸、脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量以及α、β-淀粉酶活性进行测定，结果发现不育新种质的脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量及α、β-淀粉酶活性均远远低于保持系，表明这些生化指标与小孢子发育有密切的联系，而游离氨基酸总量差异不大，可能它对小孢子发育的影响不大。新不育种质与保持系叶片色素含量差异不大，表明新种质达到了细胞质和细胞核的协调一致，从而克服了原不育材料的低温黄化现象。     

不结球白菜胞质雄性不育新材料90-2花器特点及分子鉴定

不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis)起源于中国,在全国各地区尤其是南方广泛栽培,是国内重要的绿叶菜之一[1].由于不结球白菜杂种优势非常明显,目前国内外主要推广的品种大多数为F1.不结球白菜杂种一代的生产过去主要采用自交不亲和,但自交不亲和系繁殖成本较高,亲本生活力易下降,制种时杂交率很难达到100%,容易出现假杂种;雄性不育系不仅亲本繁殖容易、杂种一代纯度高,而且有利于新品种的自身保护.     

不结球白菜不同品种或品素对POL胞质雄性不育恢保能力的研究

１９９３～１９９７年通过对不结球白菜ＰＯＬ胞质雄性不育系与不同品种或品系８则交Ｆ１及后代兄姝交、回交的世代遗传分析，研究其对雄性的恢保能力。试验结果表明，６４份不结球白菜品种或品系对该不育系雄性不育性的恢保能力不同，可分为完全保持系（４份）、完全恢复系（２份）、半恢复半保持系（７份）、高保持系（１７份）、高恢复系（１份）和不稳定保持系（３３份）６种类型。半恢复半保持测交Ｆ１的兄寻交及回交可育株；不     

不结球白菜雄性不育新种质不育系与保持系的生理生化分析

以新选育成的不结球白菜不育新种质及其保持系为试材,对不同时期的保持系和不育系的叶片、花蕾和花朵进行可溶性蛋白质、可溶性糖、脯氨酸、O_2~-·、丙二醛以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)3种保护酶的测定。结果表明:在营养生长期,不育系叶片中可溶性蛋白质含量与其保持系相近,而可溶性糖和脯氨酸含量显著低于保持系;在盛花期,不育系叶片中的可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量均高于其保持系。不育系花蕾和花朵的可溶性蛋白质、可溶性糖和脯氨酸含量低于其保持系,而O_2·和丙二醛含量高于其保持系。     

不结球白菜Pol胞质雄性不育系及其保持系的部分生理生化指标分析

对不结球白菜Pol胞质雄性不育系及其保持系的可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸含量及其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性的变化进行研究,结果表明:不育系不同时期的蕾和花中可溶性糖、可溶性蛋白质和脯氨酸含量均低于其保持系;SOD、POD和CAT活性则是不育系高于其保持系;POD同工酶电泳分析发现不育系和保持系也存在差异,这说明上述物质含量和酶活性变化可能与不结球白菜Pol胞质雄性不育有关。     

不结球白菜不同品种或品系对POL胞质雄性不育恢保能力的研究

１９９３ ～１９９７ 年通过对不结球白菜ＰＯＬ胞质雄性不育系与不同品种或品系测交Ｆ１ 及后代兄妹交、回交的世代遗传分析,研究其对雄性不育的恢保能力。试验结果表明,６４ 份不结球白菜品种或品系对该不育系雄性不育性的恢保能力不同,可分为完全保持系（４ 份） 、完全恢复系（２ 份） 、半恢复半保持系（７ 份） 、高保持系（１７ 份） 、高恢复系（１ 份） 和不稳定保持系（３３ 份）６ 种类型。半恢复半保持测交Ｆ１ 的兄妹交及回交可育株∶不育株呈１∶１ 分离,可育株自交呈３∶１ 或全恢复可育性。控制该胞质雄性不育的细胞核基因由１ 对主效基因和若干微效基因所组成,恢复可育基因为显性,该不育性对温度敏感。     

不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选

[目的]构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库,筛选与细胞色素C还原酶铁硫蛋白(BcRISP1)互作的蛋白.[方法]从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA,通过长距离PCR,扩增双链cDNA(ds cDNA).采用SMART建库技术构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花全长cDNA文库.利用BcRISP1基因的开放阅读框,构建诱饵表达载体pGBK T-7-BcRISP1转化AH109酵母菌,根据酵母双杂交技术筛选出与BcRISP1互作的片段,并进行质粒共转化验证.[结果]经检测,文库的转化率为每μg pGADT7-Rec 1.80× 106转化子,文库滴度为1.21×107 CFU·mL-1,重组率为94％,成功构建可以用于酵母双杂交的cDNA文库.酵母双杂交技术获得了与BcRISP1互作的阳性克隆,试验表明诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,质粒共转化试验初步验证了BcRISP1与CYP81G、PIP2蛋白的互作关系.[结论]cDNA文库的成功构建为后期互作蛋白的顺利筛选奠定了基础,利用酵母双杂交技术成功获得与BcRISPl互作的蛋白CYP81G和PIP2,为明确不结球白菜Pol胞质雄性不育相关基因的信号传递通路提供更多的依据,以期从分子水平上进一步阐明不结球白菜Pol胞质雄性不育的机制.     

温度对不结球白菜波里马胞质雄性不育系育性的影响

采用田间试验和人工控温处理相结合的方法，并结合花药发育的细胞形态学研究结果，对不结球白菜波里马胞质雄性不育系（Ｐｏｌｃｍｓ）Ａ３、Ａ１１育性与温度的关系进行了研究。结果表明：温度对育性的影响发生在花蕾发育早期，６℃左右的日均温是Ａ３、Ａ１１温度敏感的临界低温；温度作用至花期育性发生变化的时间间隔与花蕾发育所处时期的温度条件有关，生长适温（２０℃左右）下这一时间间隔为１２～１６ｄ，而自然低温下可长达６０～７０ｄ；进入抽薹开花期的植株在低温处理后，育性不发生明显的变化     

Active oxygen metabolism in the floral buds and leaves of the new cytoplasm male sterile (CMS) line and its maintainer line of non-heading Chinese cabbage

The cytoplasm male sterile (CMS) line and its maintainer line of the newly-bred non-heading Chinese cabbage were taken as experimental materials. The production rate of superoxide anion radical (O₂ ⁻), contents of malondialdehyde (MDA) and hydrogen peroxide (H₂O₂), and the activities of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD), catalase (CAT) as well as ascorbate peroxidase (APX) were determined in buds of different developmental stages and leaves during vegetative and florescence stages. As showed by the results, there were higher levels of MDA and H₂O₂ contents, higher O₂ ⁻ production rate and higher activities of SOD, POD, and CAT in the buds of the CMS lines than that in the buds of the fertile lines, while the APX activity was different from the other three enzymes above. There were differences in activities of protective enzymes in leaves but no significant differences in MDA contents and O₂ ⁻ production rate, which showed that the differences in metabolism of active oxygen between CMS and its maintainer were mainly apparent in reproductive organs. __________ Translated from Journal of Nanjing Agricultural University, 2006, 29(1): 18–22 [译自: 南京农业大学学报]     

白菜胞质雄性不育系及保持系叶片色素含量及其超微结构

以白菜胞质雄性不育系、原不育材料及其保持系为试材，比较了不同发育时期叶片色素含量及其超微结构的差异。结果表明，莲座期原不育材料色素含量极显低于新不育种质及保持系；而在苗期及抽薹期，色素含量差异均不显。各时期不育材料细胞器发育明显滞后于保持系。莲座期，原雄性不育材料叶绿体呈椭圆形，片层结构疏松，叶绿体数目及叶绿素含量明显低于新不育种质及保持系。保持系及新不育种质叶绿体发达，片层结构较多。同期保持系线粒体结构发达，内脊丰富，内含物充实；而不育系线粒体结构简单，内脊较少，线粒体的数目高于保持系。到抽薹期，无论叶绿体还是线粒体都呈退化状态，叶绿体内累积淀粉粒，线粒体内脊减少，不育系线粒体严重空泡化。     

不结球白菜叶片脯氨酸与可溶性蛋白含量的QTL分析

用不结球白菜杂交品种暑绿的112个双单倍体纯系构建了包含186个分子标记的遗传连锁图谱,利用复合区间作图法检测了叶片脯氨酸含量和可溶性蛋白含量两性状的数量性状基因座(QTL)。结果表明:叶片脯氨酸含量由位于第5连锁群上与分子标记C20相距7.2cM的QTL控制,其加性效应和贡献率分别为0.37%和8.32%;可溶性蛋白含量由位于第3连锁群上与分子标记AE153相距0.8cM的QTL控制,其加性效应和贡献率分别为0.004%和8.12%。     

不结球白菜谷胱甘肽还原酶基因NhccGR1的克隆与表达分析

利用cDNA-AFLP技术,从芜菁花叶病毒(TuMV)侵染的不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)幼叶中分离到1条编码谷胱甘肽还原酶的基因片段,通过电子克隆得到其cDNA全长为1 503 bp,编码501个氨基酸,命名为Nhc-cGR1。对该基因进行生物信息学分析,并利用实时定量PCR研究其在TuMV侵染和水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、乙烯(ET)诱导下的表达情况。结果表明:该基因作为病原相关基因参与了TuMV病害响应,并通过增加自身表达量来激活细胞内的信号转导途径,诱导各种防卫反应相关基因的表达;同时,SA和JA抑制该基因的表达,外施ET能诱导其正向表达。     

温度预处理对不结球白菜杂种F1花药培养的影响

以不结球白菜杂种一代‘99H秋-25’ב99H秋-23’和‘苏州青’בSI’为试材,研究了低温预处理和高温预培养对花药培养效果的影响。结果表明:0~4℃的低温预处理花药1d,花粉可以完成其进行雄核发育所需要的诱导过程,而且绝大部分花粉(93.6%)仍然保持存活,花药分化率达到1.33%;而未经预处理的花药在诱导过程完成时,大多数退化死亡。高温(33℃,24h)处理可明显提高花药再生植株的诱导率。     

2个不结球白菜品种硝酸盐累积差异的生理机制

采用0.5、2.0、5.0 mmol.L-1NO3-3个浓度和3.75 mmol.L-1NO3-与1.25 mmol.L-1NH4+混合浓度,对2个不结球白菜品种上海青(低硝酸盐累积品种)和亮白叶1号(高硝酸盐累积品种)进行水培试验,研究了供氮水平对硝酸还原酶活性(NRA)、硝酸盐含量和光合速率的影响。结果表明:不结球白菜硝酸盐含量存在品种和器官差异(P<0.05)。亮白叶1号硝酸盐含量高于上海青,不同器官硝酸盐含量从高到低依次是:叶柄、叶片、根系,硝酸盐含量随外界供NO3-浓度的增加而增加,部分供NH4+降低了硝酸盐含量;上海青NRA高于亮白叶1号(P<0.05),不同器官NRA从高到低依次是:叶片、根系、叶柄,叶片和根系的NRA随外界NO3-浓度的增加而升高,部分供NH4+降低了不结球白菜NRA;在全NO3-处理下上海青叶片光合速率显著高于亮白叶1号(P<0.05),提高NO3-浓度可在一定程度上促进光合速率,部分供NH4+使光合速率有所降低。总之,上海青比亮白叶1号具有更高的NRA和光合速率,使其具有更强的NO3-还原同化能力,从而减少了NO3-在体内的积累。     

盐胁迫下不结球白菜幼苗叶片内肽酶同工酶变化及生化特性研究

研究了不同盐浓度胁迫下不结球白菜暑绿幼苗叶片中可溶性蛋白质含量、内肽酶同工酶及其活性的变化和内肽酶同工酶生化特性.结果表明,暑绿叶片中存在5种内肽酶同工酶(EP1～EP5),其中,EP3和EP5为半胱氨酸型内肽酶,EP1和EP2为丝氨酸型内肽酶,而EP4几乎不被所试的各种内肽酶抑制剂所抑制;内肽酶的最适pH为6.0,最适温度为50 ℃;EP3、EP4和EP5的热稳定性较好,在60 ℃下保温1 h后还保留较高活性.100 mmol·L-1 NaCl处理暑绿4 d后,EP4活性增强,其他4种同工酶活性变化不明显;200 mmol·L-1 NaCl处理相同时间,叶片1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)等蛋白发生明显降解,EP2、EP4、EP5活性随着时间推进不断升高,而EP1、EP3活性明显降低,显示EP2、EP4、EP5可能在盐胁迫诱导的暑绿叶片衰老中起主要作用.     

Cd、Zn污染对小白菜营养品质的影响

针对潮褐土区域土壤重金属Cd、Zn污染的特点,采用盆栽的试验方法,研究了Cd、Zn对小白菜营养品质指标的影响,结果表明：小白菜在Cd、Zn单因素处理条件下,其营养品质指标叶绿素、还原糖和Vc都随添加重金属浓度的增加呈逐渐下降之势;粗蛋白含量表现出低浓度处理降低,高浓度处理升高的趋势;粗纤维含量随土壤中Cd添加浓度的增加呈逐渐增加之势,随土壤中Zn添加浓度的增加呈先降后升的趋势,当小白菜在Cd、Zn复合处理条件下时,重金属Cd、Zn对粗蛋白的影响表现出协同正效应,对还原糖、叶绿素和Vc的影响表现出协同负效应,对粗纤维的影响表现为拮抗作用。     

不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。