成年(黄占)鹿耳皮肤成纤维细胞的分离与培养

本试验对1头黄占鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶(Ⅰ型)消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存。利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黄占鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黄占鹿的核型式为4(M)+62(A),XY(A,M);对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%。     

成年黇鹿耳皮肤成纤维细胞的分离与培养

本试验对1头黇鹿的耳缘皮肤组织采用0.1%胶原酶（Ⅰ型）消化组织块法进行原代培养,反复传代纯化,获得了成纤维细胞,进行了生物学特性观察,并对各代细胞进行了常规冷冻保存.利用Photoshop软件对F12代细胞染色体进行了核型分析,结果表明该黇鹿的染色体数目为68,常染色体中1号和7号为M染色体,其余的均为A常染色体;X染色体是最大的A染色体,Y染色体是最小的M染色体;该黇鹿的核型式为4（M）＋62（A）,XY（A,M）;对部分冷冻细胞进行了解冻培养,解冻存活率和贴壁率分别为61.04%、38.85%.     

藏野驴皮肤成纤维细胞分离培养及生物学特性分析

为了研究藏野驴成纤维细胞分离培养方法及生物学特性,以7岁龄藏野驴耳部皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行细胞原代培养,采用胰酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,通过细胞形态观察、生长曲线测定、细胞周期和免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果显示,成纤维细胞生长曲线呈“S”形,细胞生长状态良好,细胞特异性标记免疫荧光染色显示FSP-1呈阳性表达。结果表明,成功建立了藏野驴成体耳部皮肤成纤维细胞体外分离、培养和鉴定方法,为藏野驴种质资源保护、细胞水平及分子水平的研究奠定了基础。     

关于成纤维细胞培养的几点体会

动物细胞培养是动物细胞工程的一项基本技术,它是细胞融合、细胞拆合、细胞凋亡研究、染色体导入和基因转移等项技术的基础。同时动物的细胞还是医学研究尤其是肿瘤学研究的极其重要的材料。因此做好细胞培养就显得至关重要。下面,笔者就成纤维细胞培养,谈谈自己的体会。1成纤维细胞培养方法成纤维细胞的培养可以采用组织块培养法和消化培养法,消化培养法可以在较短时间内获得大量细胞,但其操作比较繁琐,污染机会较大,因此如果在时间允许的情况下,多采用组织块培养法获取细胞。目前组织块培养法一般操作程序是:对组织块先采用粗切,再使用细…     

牛胎儿皮肤成纤维细胞体外培养及其特性研究

该试验研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化方法及其生长特征.牛胎儿皮肤细胞贴壁传代2～4次.可成功获得均一稳定的成纤维细胞群体.取传至4代的牛胎儿皮肤成纤维细胞进行细胞计数,并绘制其生长曲线.     

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。     

华南虎皮肤成纤维细胞的分离培养

应用酶消化法（胶原酶消化：0.1%胶原酶Ⅰ型＋0.1%BSA;胰蛋白酶消化：0.25%胰蛋白酶＋1mM EDTA）和植块法从华南虎皮肤组织中分离成纤维细胞。研究结果表明,植块法较适合分离华南虎皮肤成纤维细胞,胶原酶消化法次之,而胰蛋白酶消化法不宜用于分离华南虎皮肤成纤维细胞。DMEM/F12（1：1）培养基＋10%FCS＋10 ng/ml EGF＋5μg/ml胰岛素＋100 IU/ml青霉素＋100μg/ml链霉素组成的培养体系适用于华南虎皮肤成纤维细胞的体外培养。     

野牦牛成纤维细胞的分离培养与传代

为了提高野牦牛成纤维细胞分离培养效果,研究了组织保存方法、原代培养方法、培养液类型、添加细胞生长因子和冷冻保存液配方对野牦牛体细胞分离培养与传代的作用。结果表明,PBS、D/F12和TCM199适合野牦牛皮肤组织的保存,D/F12和TCM199培养液适合组织块培养,组织块成活率达到（86.29±4.62）%,组织块法适合野牦牛成纤维细胞的原代培养;D/F12培养液培养野牦牛成纤维细胞效果较好,群体倍增时间和平台期密度分别为38.47 h和2.075×10⁶/mL,正常二倍体核型百分率为84.33%;表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）产生了较明显的促增殖作用,平台期细胞密度明显增加;2种冷冻保存液（D/F12添加胎牛血清和二甲亚砜及胎牛血清添加二甲亚砜）均能用于野牦牛细胞冷冻,细胞存活率分别是87.33%和89.00%。     

鸭胚成纤维细胞培养技术的改良

细胞培养技术是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术,从20世纪初被创立以来,在细胞学、遗传学、病毒学、免疫学和基因功能组学等多领域中扮演重要角色.笔者通过实践对鸭胚成纤维细胞培养技术的改良与探索,发现采用半胚不过滤法可以快速简单有效地制备大量活鸭胚成纤维细胞.     

波尔山羊耳成纤维细胞的分离培养与保存

本文研究了波尔山羊耳成纤维细胞的体外培养,包括分离纯化和生长特征,同时还研究了成纤维细胞的冷藏和冷冻保存.结果表明,波尔山羊耳成纤维细胞贴壁生长,一般经历潜伏期、指数增生期和平台期;4℃体外冷藏时间为5 d;冷冻保存时4℃平衡1 h、-80℃过夜,然后直接投入液氮中,解冻后培养得到61.6%的贴壁率.     

"遭遇"藏獒

你见过草原上乱窜的旱獭、天空中翱翔的兔鹰、成千上万迁徒的羊群和牦牛吗？如果这些还难不倒你,那我还有一招：你和凶猛异常的藏獒面对面过吗？今夏,我到甘肃南部藏区就实实在在“遭遇”了一回。     

青海藏獒体尺与毛特性的相关性分析

对青海省玉树州称多县、杂多县、囊谦县、果洛州玛多县、达日县及甘德县共100只藏獒(♀55只、♂45只)的体尺、毛特性进行了研究,并对各项指标进行了相关性分析。结果表明:(1)青海藏獒体尺指标中,在性别组间除胸围指标外,其余各指标间差异显著(P0.05)。(2)成年公藏獒的产毛量、粗毛长度、细毛厚度、粗毛伸直长度比母獒高,差异极显著(P0.01)。(3)无论是公藏獒还是母藏獒,其体重与产毛量、体尺间均呈极显著正相关,其中体重、体高、体长、胸围、管围与产毛量间相关系数在0.820 1~0.858 4之间。(4)青海藏獒产毛量与毛特性指标间,与粗毛长度、细毛厚度以及粗毛伸直长度间有极显著的正相关性(P0.01),而毛特性指标间除粗毛细度与绒毛细度呈较强的负相关外,其余指标间均呈正相关,但相关性强度不一。     

西门塔尔牛表皮干细胞的分离培养与生物学特性研究

旨在建立西门塔尔牛表皮干细胞(epidermal stem cell, EpSCs)分离培养体系,探究其生物学特性,为西门塔尔牛种质资源保存提供新方法,为干细胞治疗研究提供种子细胞。采用3～4月龄西门塔尔牛背部表皮,通过酶消化法和组织贴壁法两种方法分离培养西门塔尔牛EpSCs,绘制EpSCs生长曲线探讨其增殖能力。通过免疫荧光鉴定EpSCs表面标记物(ITG β1、P63和CD71),通过RT-PCR分析EpSCs特异性基因(ITG β1、KRT19和ITG α6)表达情况。通过体外诱导EpSCs分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞检测其分化潜能。结果显示,组织块贴壁法获得的EpSCs纯度较低,酶消法获得的EpSCs纯度较高,细胞传代至P28代时开始逐渐老化。EpSCs细胞生长曲线呈“S”型。免疫荧光结果显示EpSCs表面特异性标记物ITG β1、P63和CD71呈阳性表达,RT-PCR结果显示EpSCs高度表达ITG β1、KRT19和ITG α6,不表达CD31基因。EpSCs诱导分化脂肪细胞时,产生可被油红O着色的脂滴,经鉴定细胞阳性表达脂肪细胞PPAR-γ和LPL特异性基因。Ep...     

中国工作犬管理协会藏獒专业委员会致所有藏獒组织和热爱藏獒事业朋友的倡议书

首先,感谢大家致力于爱护、发展藏獒事业,关心、支持中国工作犬管理协会藏獒专业委员会成立大会。     

藏獒的保护与开发利用

藏獒(Tibetan Mastiff),又称藏狗、番狗、羌狗,是广泛分布在青藏高原及其周边地区的护卫犬,是在青藏高原独特的自然生态环境中,经过藏族牧民的严格选择和培育而形成的优秀的犬品种。藏獒体型高大,体格硕壮,头部粗壮,目光凶悍,额宽,吻粗短,颔下耷,四肢粗壮,胸部宽阔。藏獒有纯白     

牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存

利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。     

牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离培养及生物学特性比较分析

旨在建立牦牛与犏牛睾丸支持细胞分离培养及鉴定方案,比较两种牛睾丸支持细胞的生物学特性.本研究分别采集24月龄的3头健康公牦牛与3头F1代公犏牛睾丸组织作为2个样品组,其中每组3个生物学重复,分别通过混合酶消化、差速贴壁和饥饿处理分离得到两种牛的睾丸支持细胞,采用DMEM高糖及DMEM/F12培养基培养睾丸支持细胞,筛选...