银杏产黄酮内生真菌的分离与鉴定

为了保护银杏资源,寻找生产黄酮类物质的替代品,采用选择性培养基,从银杏Gingkgo biloba L.的根、茎和叶中分离7株内生真菌,经高效液相色谱分析,证实3株内生真菌可产生槲皮素和山萘素类黄酮物质,其中内生真菌Enf 7的黄酮产量最高,达到70mg·100g-1干菌丝,可作为生产银杏黄酮的候选菌株.根据真菌的孢子结构、菌丝形态、菌落生长速度等形态学特征,结合核糖体RNA基因的居间序列(internal transcribed spacer,ITS)的碱基差异,确定3株产黄酮内生真菌分别属于安培菌属的白粉菌寄生菌Anpelomyces humuli、茎点霉属的头状茎点霉Phoma glomerata和镰孢属的茄镰孢Fusarium solani.     

罗布麻产黄酮内生真菌的筛选与鉴定

以罗布麻叶中内生真菌为研究对象,用化学显色法和薄层层析显色法对产生黄酮的内生真菌进行筛选,并根据形态特征对筛选到的内生真菌进行鉴定。结果表明:内生真菌菌株P-1和P-2均能产生黄酮;菌株P-1为镰孢菌(Fusariumsp.),菌株P-2为嗜松青霉(Penicillin pinophilum)。     

鱼腥草中产槲皮素内生真菌的分离鉴定

【目的】探索鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）中是否存在产槲皮素的内生真菌。【方法】采用组织块法对鱼腥草内生真菌进行分离培养,分离纯化后收集菌丝利用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）检测其代谢产物中的槲皮素,并分析其产量。采用形态学和内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析鉴定产槲皮素的内生真菌。【结果】从鱼腥草不同部位共分离得到9株内生真菌,其中由根中分离得到的菌株YXC-G1具有产生槲皮素的能力,为笋顶孢属（Acrostalagmus sp.）真菌,菌丝中槲皮素的含量为8.296 mg/g。【结论】从鱼腥草根部分离到1株产槲皮素的内生真菌YXC-G1,其可作为生产槲皮素的备选菌株。     

柑橘内生真菌的分离与鉴定

自2002—2004年,对广东梅州、重庆北碚、湖南石门的不同种类的柑橘（柑、橙、柚）进行了12次定点取样分离,共分离到柑橘内生真菌5642株,其中有5136株已鉴定,分别属于24个属,在这24个属中,出现频率在1％以上的只有Colletotrichum spp.,Fusarium spp.,Alternaria spp.,Penicillium spp..柑橘内生真菌的静息部位依种类而异,Colletrichum spp．主要分布在柑橘的叶片、枝条、果皮内;Fusarium spp．则主要分布在根中。     

银杏内生真菌多样性与产黄酮类物质真菌的分离和鉴定

\t\t\t\t\t目的\t\t\t\t\t了解陕西宜君核桃(Juglans regia L.)内生真菌的多样性及分布特征,为活性菌株筛选、抑菌机理研究等奠定基础。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t方法\t\t\t\t\t采用组织分离法对不同季节、组织部位的核桃内生真菌进行分离,以形态学和ITS序列分析相结合的方法进行鉴定,通过相对多度、均匀度、多样性指数等分析核桃内生真菌的多样性。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结果\t\t\t\t\t共分离得到内生真菌798株,归属于38个属,有9个属的真菌属于优势类群,相对多度较高的3个属依次为Alternaria、Anthina、Colletotrichum。不同组织部位中,茎部内生真菌多样性最为丰富,分布有32个属,占菌株总数的87.84%,其中1年生茎的相对数量和多样性指数最高,分别为41.37%和1.16,干茎分离得到的内生真菌属丰度最高,为20属;不同季节中,秋季内生真菌的相对数量及多样性指数最高,分别为31.45%和1.12,夏季中分离得到的内生真菌为19属,丰度最高。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结论\t\t\t\t\t宜君核桃内生真菌具有丰富的多样性,丰富度指数、相似性系数反映出不同季节、组织部位内生真菌的分布存在差异。\t\t\t\t     

中国红豆杉内生真菌的分离鉴定及其产紫杉醇的特性

为筛选出微生物工业化发酵生产紫杉醇类药物的优良菌株,采用高效液相色谱(HPLC)及液质联用(HPLC-MS)等方法,对秦巴山区中国红豆杉进行了内生真菌的分离鉴定及其紫杉醇含量测定。结果表明:分离到1株内生真菌(H-21),为极细孢枝孢霉(Cladosporium tenuissimum);其代谢产物中存在紫杉醇,含量为163.5μg/L。     

喜树内生真菌的分离与鉴定

以我国特有药用植物——喜树(Camptothecaa cuminata Decne.)为试验材料,对喜树的根、茎、叶、种子进行内生真菌的分离,共分离得到菌株151株。对其中70株内生真菌进行了鉴定,鉴定为15个属,11个科,10个目,5个纲,分属3个亚门。鉴定结果在一定程度上反映了喜树内生真菌的生物多样性,并为筛选产喜树碱及其类似物的菌株奠定了一定的基础。     

黄檗植物产小檗碱的内生真菌的分离鉴定

[目的]探索黄檗植物产小檗碱的内生真菌的分离与鉴定。[方法]从黄檗中分离内生真菌,采用改良的碘化铋钾试剂及薄层层析法对其代谢产物进行分析,对可能产生小檗碱的菌株进行扩大培养,然后对培养后提取物采用KBr涂片法进行红外光谱检测,并以氘代甲醇为溶剂进行核磁共振氢谱检测,最后进行初步形态学分类。[结果]从黄檗中分离得到13株内生真菌,其中菌株BBH6可能产生小檗碱：通过扩大培养以及红外光谱检测和核磁共振氢谱检测,最终确定内生真菌BBH6能够产小檗碱;该菌株菌丝发达,分生孢子暗色,多细胞,由横纵隔膜分成砖格状,依据真菌形态分类法,该菌株应归属于真菌门的交链孢霉属。[结论]该研究为药用植物内生真菌的研究提供了参考依据和借鉴。     

板栗内生真菌的分离及其鉴定

以研究板栗内生真菌的分布特性为目的,采用组织分离法,从板栗(Castanea mollissima)的叶、叶柄、茎韧皮部、茎木质部得到69株内生真菌,并利用直接调取制片法和裁片培养法,鉴定为14个属,其中叶部32株涉及8个属,叶柄11株涉及4个属,茎韧皮部25株涉及10个属,茎木质部1株涉及1个属。鉴定结果表明:板栗的不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存有明显差异性。为板栗的病虫害防治的进一步研究提供了一定的理论基础,具有一定的参考意义。     

长春花内生真菌的分离及鉴定

[目的]为研究内生真菌与长春花悬浮细胞互作奠定基础。[方法]从长春花茎杆韧皮部分离出内生真菌,对分离出的菌株进行鉴定,用PDA培养基、PDA培养基+长春花悬浮细胞的水提物对内生真菌进行液体培养,薄板层析检测内生真菌液体培养物的提取物及发酵液。[结果]从常规PDA培养基中分离得到11株菌株,而从其他PDA培养基中没有分离到内生真菌。分离出的11株菌株的大型分生孢子呈纺锤形或镰刀形,其代谢产物通过薄层层析,没有检测到长春花生物碱。表明分离出的内生真菌本身不能直接合成长春花生物碱,而可能对生物碱的合成起促进作用。[结论]从长春花中分离得到的内生真菌属镰刀菌属。     

珙桐营养器官解剖学研究

对我国珍稀特产树种珙桐叶、茎、根器官进行了解决学研究,发现其叶为两面叶,气孔平列型,仅分布于下表皮,栅栏组织发达。茎的皮层和髓生活薄壁细胞丰富,次生木质部导管散生,导管端壁具校状复穿孔。根的初生木质部为四原型。根、茎、叶薄壁组织细胞中均有丰富的结晶体,部分细胞壁出现网状结构。     

珙桐芽体组织培养研究

采用基本培养基、附加BA、附加IBA三因素三种浓度正交设计实验,研究了以珙桐芽作为外植体诱导其顶芽发育的过程和初代培养中愈伤组织及变异的表现.结果显示,3个因素处理下珙桐顶芽的启动率分别为14.3%、38.1%、52.4%.培养基1/2MS+BA 1.5mg/L+IBA 1 mg/L的组合效果最好,可显著提高芽的再生率.诱导出的愈伤组织种类较多,对上部芽的生长影响不同,表明新生出叶片变异程度与激素浓度相关.     

濒危植物珙桐的组织培养技术研究

以珙桐成熟胚为试材,研究了不同生长调节剂组合对珙桐成熟胚离体分化的影响,并获得了完整的植株。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基组合为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+3 mg/L IBA+1 mg/L GA3+蔗糖30 g/L;诱导不定芽的最佳培养基组合为1/2MS+1.0mg/L6-BA+蔗糖20 g/L;最有利于不定芽的增殖与伸长的培养基组合为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L GA3+蔗糖20 g/L;诱导生根的最佳培养基组合为1/2MS+0.8 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+蔗糖10 g/L。     

云南三江口自然保护区珙桐生境土壤水分物理性质分析I

[目的]研究云南三江口自然保护区珙桐的土壤环境。[方法]在云南三江口自然保护区设3个采样地,研究0～20、20～40 cm土层土壤含水量、pH与物理性质。[结果]该自然保护区珙桐生长地的土壤含水量较高,pH偏酸性,容重、孔隙度等物理特性适宜珙桐生长及繁殖。[结论]为三江口自然保护区珙桐种子的自然萌发引种繁殖提供科学依据。     

微波提取珙桐叶黄酮工艺研究

采用正交试验方法,确立了微波法提取珙桐黄酮的工艺条件。结果表明,最优提取条件:乙醇浓度70%,提取时间4min,固液比1:30(g/ml),黄酮产率为3.306%。     

Isolation and Identification of an Endophytic Strain with Antibiosis Ability from Davidia involucrate Brail.

[Objective]The aim was to isolate and identify an endophytic bacteria strain with antimicrobial activity from Davidia involucrate Brail.[Method]Endophytic strain with antibiosis ability was isolated from D.involucrate Brail by using cylinder-plate method.Then,it was identified through physiological and biochemical tests,16S rDNA homology analysis as well as some gene-specific sequence analysis.[Result]B221 stain had antimicrobial activity against a variety of rice plant pathogens,and it was identified as Bacillus subtilis.[Conclusion]This study enriches the research on endophyte within D.involucrate Brail,application of Bacillus bio-control,and therefore has laid a good foundation for the development of fungus used in biological control of crop pathogens.     

高通量测序技术分析光叶珙桐根际土壤微生物多样性

【目的】通过了解不同地区光叶珙桐根际土壤微生物的种类和多样性差异,为光叶珙桐的引种繁 育提供基础数据和理论依据。【方法】采用高通量测序技术对昭通 3 个地区光叶珙桐根际土壤微生物种类及多 样性进行研究,分析了物种组成和丰度、Alpha 多样性、Beta 多样性和菌群结构。【结果】结果表明,细菌群 落中 α- 变形菌纲 Alphaproteobacteria 最丰富（＞ 17.02%）,真菌群落在不同地区存在明显差异,在永善三江口 Pezizomycetes 最丰富（17.01%）,彝良小草坝 Archaeorhizomycetes 最丰富（29.79%）,镇雄塘房 Sordariomycetes 最丰富（20.77%）;3 个地区中永善三江口、镇雄塘房的光叶珙桐根际土壤微生物种群结构相似性较高,其中 永善三江口的光叶珙桐根际土壤细菌多样性最丰富,镇雄塘房的光叶珙桐根际土壤真菌多样性最丰富。【结论】 3 个地区的光叶珙桐根际土壤微生物菌群都具有较高的生物多样性,但物种组成分布上存在差异。     

珙桐生理生态学研究进展

珙桐是我国特有珍稀保护物种,在植物系统发育和地史变迁研究上有很高的学术地位,国内外学者进行了大量的研究。介绍了珙桐的天然分布环境、生物学特性、群落特征等,从生态学、遗传学、生理学角度综述了珙桐的研究进展,并提出应加强珙桐生理生态学和细胞生物学方面的研究。     

神农架4个珙桐居群遗传多样性的RAPD分析

用随机扩增多态DNA（RAPD）技术对神农架地区4个居群28个珙桐（Davidia involucrate Baill.）个体进行了遗传多样性分析.16个10 bp寡核苷酸引物共检测到87个位点,多态位点49个,多态百分率56.3％,而居群平均多态位点百分率为30.2％.用POPGENE对数据进行了分析,结果显示:居群的平均Nei’s基因多样性为0.111 8,Shannon’s遗传多样性信息指数为0.165 1,总的居群基因多样性为0.169 2,基因分化系数为0.339 2.这表明神农架地区珙桐的遗传多样性较低,其遗传变异以居群内遗传变异为主.      

珙桐开花动态及繁育系统的研究

通过野外观察,运用杂交指数、花粉-胚殊比、人工授粉和套袋等方法,对珙桐的开花状态、繁育系统进行研究。结果表明,种群平均花期为26d,但同一地点的不同年份,相同年份的不同地点均有所不同;同一棵树树冠预部枝条和基部枝条开花时间也有差异。花序从开始散粉到散粉末期一般持续8-10d,开花过程中柱头高于花药的位置,雄花的花药散粉时间早,两性花2-3d。两性花柱头具可授性的时间早两性花花药开裂1-2d。由于其杂交指数等于4,花粉-胚珠比等于14885.2,结合人工套袋和授粉试验结果确定该种的繁育系统以异交为主,还有一定程度的自交。花粉竞争可能是珙桐结籽率低的原因之一。