贝莱斯芽孢杆菌的鉴定和抑菌作用研究

该研究对6株贝莱斯芽孢杆菌分离株进行测序鉴定、药敏试验与抑菌试验。结果表明：所分离的6株菌16S rDNA序列与贝莱斯芽孢杆菌处于同一遗传进化树分支，对选定的7种抗菌药物均敏感。应用指示菌进行抑菌试验，6株菌及其代谢产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑菌作用，抑菌作用从强到弱依次是：贝莱斯芽孢杆菌菌液、上清液和菌液滤液。     

地衣芽孢杆菌B38对产气荚膜梭菌的抑菌性能研究

试验旨在探究地衣芽孢杆菌38(Bacillus licheniformis 38,B38)对产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,CP）的抑菌性能，以期为新型替抗产品的开发提供基础。采用抑菌圈法对48株芽孢杆菌经过两次筛选，获得一株对CP抑菌效果最好的芽孢杆菌，测定其最小抑菌效价、抑菌产物生成曲线、抑菌谱和代谢产物的稳定性，并通过硫酸铵沉淀法对抗菌物质进行粗提取。结果表明：B38对CP的抑菌圈直径最大可达31.14 mm，其发酵上清液的最小抑菌效价为64 AU/mL，主要对革兰氏阳性菌发挥抑菌作用；B38代谢产物的抑菌活性在6～<12 h呈指数增长，在12～<24 h保持稳定；B38代谢产物经胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K和过氧化氢酶处理后，抑菌活性均大于87.78%，对温度和pH具有良好的耐受性；B38代谢产物中的抑菌物质可以被80%硫酸铵完全沉淀，通过该方法获得的抗菌粗品的MIC为6.25 mg/mL。试验通过抑菌圈法筛选得到了一株对CP具有优良抑菌性能的菌株B38，其发酵产物对蛋白酶、温度和pH具有优良的耐受能力。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性；平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用；与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养，确定其对致病菌的颉颃作用。结果表明：嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性；pH值为3．0时，其有广谱的抗菌活性，对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用，但对肠道内益生菌无抑制作用；在与致病菌混合培养40h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌，48h内可以完全消灭大肠杆菌。体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用。     

一株产抗菌脂肽芽孢杆菌筛选鉴定、产酶特性及其脂肽初步鉴定

为筛选可用于动物生产的优良枯草芽孢杆菌,试验通过抑菌性能筛选,从200余株分离自土壤、枯叶等材料的芽孢杆菌中筛选得到菌种S21,经分子生物学鉴定菌种S21为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);通过产酶定性分析,枯草芽孢杆菌S21产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶;采用酸沉、醇提和半制备色谱对S21产抗菌脂肽纯化,利用ESI-TOF-MS对纯化出的抗菌脂肽进行鉴定,鉴定抗菌脂肽为surfactin家族抗菌脂肽;抑菌试验分析显示枯草芽孢杆菌S21产抗菌脂肽对革兰氏阳性、革兰氏阴性和霉菌都有抑制效果,热耐受性和酸碱耐受性好。综上所述,枯草芽孢杆菌S21有用于动物生产的潜力。     

利用无花果叶发酵提高枯草芽孢杆菌抑菌及抗氧化能力的研究

通过研究以无花果叶为基质培养枯草芽孢杆菌对其抑菌能力、抗氧化能力的影响，为提高无花果叶的综合利用率及深度利用枯草芽孢杆菌提供思路。本研究采用以无花果叶为基质培养枯草芽孢杆菌（试验组），同无花果叶研磨液（对照Ⅰ组）与营养培养基（对照Ⅱ组）培养枯草芽孢杆菌形成对比，采用滤纸片法及抗氧化试剂盒测定三组发酵液的抑菌作用以及抗氧化活性，利用代谢组学技术检测代谢物，分析使其产生差异的代谢物。结果表明：营养培养基枯草芽孢杆菌发酵液抑菌圈直径为19.3 mm，以无花果叶为基质培养枯草芽孢杆菌的发酵液抑菌圈直径为24.3 mm。以无花果叶为基质培养的枯草芽孢杆菌，发酵液清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基能力明显强于营养培养基培养枯草芽孢杆菌。通过代谢组学技术，试验组筛选出98种差异代谢物，对照Ⅱ组中53种差异代谢物。对这些代谢物进行分类发现，脂质类含量最高，生物碱类、抗生素类、萜类、黄酮类、酚类、部分氨基酸类代谢物含量较高，其中，试验组中有59种相关物质，对照Ⅱ组中有28种，这些物质可能对提高枯草芽孢杆菌抑菌能力、抗氧化能力发挥重要作用。     

芽孢杆菌不同菌种抑菌性强度试验比较分析

研究从不同环境中分离鉴定12种共21株芽孢杆菌,应用滤纸片法进行芽孢杆菌抑菌性的比较试验。结果表明:枯草芽孢杆菌07菌株、枯草芽孢杆菌16菌株、贝莱斯芽孢杆菌02菌株和韦氏芽孢杆菌A菌株对经黄色葡萄球菌抑菌强度达到"++++",对大肠杆菌的抑菌强度达到"++"以上。芽孢杆菌sp.菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌强度达到"+++"。研究表明,芽孢杆菌同一菌种的不同菌株抑菌强度不同;不同菌种之间的抑菌强度差别明显,且对大肠杆菌的抑菌强度尤为突出。     

鸡芽孢杆菌的分离、鉴定及体外抑菌研究

试验从鸡的粪便中分离到8株芽孢杆菌，经过生化试验初步结果为：A1、A2、A3和A7为巨大芽孢杆菌，A4为地衣芽孢杆菌，A5、A6和A8为蜡样芽孢杆菌。采用牛津杯法测定这8株芽孢杆菌的发酵液、代谢产物和菌体对病原菌的抑菌活力，结果表明：这8株芽孢杆菌对大肠杆菌和葡萄球菌都有一定的抑制作用，其中A2、A4和A6抑菌效果较好。这8株芽孢杆菌发酵液的抑菌效果要比代谢产物要好，而其代谢产物的抑菌效果要比菌体要好。     

贝莱斯芽胞杆菌对动物的益生作用研究进展

贝莱斯芽胞杆菌可产生抗微生物脂肽和聚酮、有益酶、黏附分子等代谢产物。作为饲料添加剂，贝莱斯芽胞杆菌可通过提高小肠绒毛高度及降低隐窝深度、增强酸性磷酸酶及碱性磷酸酶活性等机制促进动物生长；通过拮抗病原、增强机体抗氧化能力和调节动物免疫改善动物健康。本文综述了贝莱斯芽孢杆菌作为饲料添加剂对动物的益生作用，为该菌的科学应用提供参考。     

新型有益菌贝莱斯芽孢杆菌的特性及其在养殖业中的应用研究进展

贝莱斯芽孢杆菌是一种新型有益菌，性质稳定、安全性高，具有多酶活性和抗菌特性，可促进饲料的高效转化，降低多种水产致病菌的危害，对促进养殖业绿色健康的发展具有正向作用，在多功能型饲料研究方面具有广阔的开发前景。文章总结近年来贝莱斯芽孢杆菌的特性及其在养殖业中应用的研究结果，以期为贝莱斯芽孢杆菌在养殖业中多方面应用、开发新型功能型动物饲料提供参考。     

11株枯草芽孢杆菌益生特性研究

试验旨在研究11株枯草芽孢杆菌的抑菌、产酶、耐受性和体外消化率等益生特性。从11株枯草芽孢杆菌中初筛得到9株体外抑菌特性和产酶特性均较好的芽孢杆菌;经过热、人工胃肠液、胆盐等耐受性复筛,结果表明9株芽孢杆菌中有6株对胆盐、胃酸、肠液等人工模拟的消化道内环境和生产过程中的热耐受性较强;经模拟动物体消化道的试验结果表明,9株芽孢杆菌中有5株（BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-3、BLCC1-4、BLCC1-6）对不同组合饲料的消化效果较好。综合以上试验结果,既表现出较好的产酶、抑菌和耐受性,又对组合饲料有良好的消化效果的枯草芽孢杆菌有BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-4和BLCC1-6,这4株枯草芽孢杆菌具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力,可进一步开展研究。     

贝莱斯芽孢杆菌生物学特性及体外降解霉菌毒素研究

为了筛选一株抗逆性强、抑制致病菌、产酶及维生素等益生物质且可降解霉菌毒素的益生菌，对自主筛选得到的贝莱斯芽孢杆菌（BLS-1）进行最适温度、pH、生长曲线及产酶、抑菌能力、抗逆性研究，并通过发酵罐发酵，对发酵液中多种酶及维生素含量进行了考察；通过体外降解的方式考察BLS-1对多种霉菌毒素的降解能力。结果表明：自主筛选的贝莱斯芽孢杆菌BLS-1在pH 2.5～3.5、胆盐浓度0.1%～0.5%及胃液肠液环境中具备良好的耐酸、耐胆盐、耐胃肠液能力；最适温度37℃、最适pH为6、培养时间24～30 h时芽孢形成率最高，生长进入稳定期并于28 h达到芽孢量顶峰；菌株发酵液代谢产物及菌体对大肠杆菌具有中敏的抑制作用；发酵液中含有多种酶、维生素等益生物质，且对玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）、黄曲霉毒素（AFB1）、伏马毒素（FB）、赭曲霉毒素（OT）有降解作用。贝莱斯芽孢杆菌BLS-1生物学特性良好，抗逆性强，可抑制大肠杆菌，同时对玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、黄曲霉毒素、伏马毒素具有降解作用。     

芽孢杆菌中新型非核糖体肽类抗菌活性物质的发掘、分离鉴定及特性研究

本研究旨在基于对细菌次级代谢产物的筛选,寻找新型非核糖体肽类抗菌物质。通过对烟台沿海地区的土壤、海水及近海常见海洋生物中的细菌进行培养,分离纯化得到细菌的单克隆,以大肠杆菌（E.coli）ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 29213为指示菌进行初步筛选,以耐多黏菌素和碳青霉烯E.coli B2（bla_NDM-5+mcr-1）和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） T144作为指示菌对有活性的细菌进行二次筛选。通过提取基因组进行PCR扩增产物测序比对,确定活性菌种属。采用有机萃取法对细菌的次级代谢产物进行萃取,通过凝胶层析和制备液相色谱进行纯化,利用分析型液相色谱进行纯度检测,进—步利用质谱对纯化后的抗菌活性物质进行结构鉴定。测序结果表明,活性菌属于解淀粉酶芽孢杆菌种,将其命名为解淀粉酶芽孢杆菌9-14（活性菌9-14）。抑菌试验结果表明,活性菌9-14的代谢产物对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、MRSA T144、E.coli ATCC 25922和E.coli B2均具有高效抑制作用。活性菌9-14代谢产物是由氨基酸链组成的环状脂肽,属于伊枯草菌素的衍生物。对活性菌9-14代谢产物的生物学特性及其抑菌谱研究发现,活性菌9-14的代谢产物具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,该抗菌物质经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K和木瓜蛋白酶处理后抗菌活性没有明显减弱,具有较好的稳定性;该抗菌物质对所用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌同样具有抑制作用,对绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌、粪肠球菌和蜡样芽孢杆菌均不表现活性。本研究得到一种新型的抗菌物质,以该抗菌物质为抗菌药物的前体,可为食品安全和疾病控制提供一定的参考依据。     

青贮用拮抗黄曲霉并降解黄曲霉毒素菌株的筛选与鉴定

为筛选一株用于青贮的拮抗黄曲霉且能够降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的芽孢杆菌菌株,本试验以香豆素为唯一碳源和能源进行菌株的初筛,以抑菌活性、AFB1降解率试验进行菌株的复筛。通过形态、生理生化特性以及16S r DNA序列分析对抑菌、毒素降解活性最好的菌株进行种属鉴定,并研究其对p H和温度的耐受性。结果表明:初筛获得45株能在以香豆素为唯一碳源和能源的培养基上生长的菌株,复筛发现N-1a对黄曲霉具有较强抑菌活性,对AFB1的降解率达到95%,并且对温度和pH具有良好的耐受性,最后鉴定N-1a菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

牛类芽孢杆菌BD3526发酵液中抗菌物质的特性及初步分离

牛类芽孢杆菌BD3526在组合培养基中培养发酵48 h,对发酵液中的抗菌物质进行特性研究及初步分离。蛋白酶处理结果表明,牛类芽孢杆菌BD3526发酵上清液含有肽类抗菌活性物质,且具有良好的热稳定性、耐酸碱性。通过对抗菌物质特性的研究发现,其对选取的革兰氏阳性菌具有较强的抑菌活性,而对选取的革兰氏阴性菌没有抑菌活性。通过Sephadex LH-20凝胶柱层析初步分离纯化发现,牛类芽孢杆菌BD3526产生的抗菌物质与麸皮发酵液中产生的抗菌物质有所不同,表明可能有新的抗菌物质产生。     

牡丹内生真菌高抑菌活性菌株的筛选及培养基优化

为了从牡丹内生真菌中筛选具有高抑菌活性的菌株,并对其发酵培养基进行优化,试验采用测量抑菌圈的方法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌株,筛选一株抑菌活性最强的菌株并通过正交试验对培养基各营养组分进行优化。结果表明:抗菌活性菌株筛选发现,JYH4的抑菌圈直径最大;优化后的培养基组分为葡萄糖6%、蛋白胨6%、磷酸氢二钾0.5%。说明JYH4具有较高的抑菌活性,在优化后的培养基中对枯草芽孢杆菌的抑菌效果更为显著,其抑菌圈直径达到18.77 mm。     

高产中性蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学性质研究

为了获得高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株，试验从不同环境样本中分离细菌并进行16S rDNA序列鉴定，利用酪蛋白琼脂培养基对产蛋白酶菌株进行初筛、福林酚法检测中性蛋白酶活性，结合形态学和分子生物学鉴定对高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株进行分类鉴定，通过对培养时间、温度和pH值的调节，研究该菌株的酶学性质。结果表明：成功筛选出1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)A1,该菌株具有较强产中性蛋白酶能力，中性蛋白酶活性为31.40 U/mL,所产中性蛋白酶的最适反应温度为50℃、最适pH值为7,在pH值=6～8时稳定性较好，对碱性环境有一定的耐受性，5.0 mmol/L的Ca²⁺和Mn²⁺对中性蛋白酶活性有显著促进作用(P<0.05),Zn²⁺和Fe²⁺对中性蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05),Mg²⁺无明显作用。说明贝莱斯芽孢杆菌A1可以作为生产中性蛋白酶的备选菌株。     

饲用枯草芽孢杆菌抑菌性能的研究进展

文章综述枯草芽孢杆菌在体内、体外的抑菌性能，旨在保障枯草芽孢杆菌的饲用效果，重点总结3方面：其一，枯草芽孢杆菌抑菌性能评估方法；其二，枯草芽孢杆菌的体外抑菌作用（牛津杯法体外抑菌试验评估）；其三，饲用枯草芽孢杆菌对畜禽肠道菌群的调控效果（体内抑菌试验评估）。体外试验文献显示，枯草芽孢杆菌对肠道有害菌和饲料源有害菌的抑菌报道较多，对肠道有益菌和其他商业益生菌的抑制研究很少，且不同菌株的抑菌性能差异较大，这与饲用枯草芽孢杆菌对畜禽肠道有益菌及个别有害菌调控出现差异化结果相符。文章建议完善枯草芽孢杆菌体外抑菌评估的体系，这有助于筛选安全的菌株及高效地研制单一和复合饲用枯草芽孢杆菌制剂。     

乳酸杆菌及芽孢杆菌对32种抗菌药物的敏感性研究

本文通过分离鉴定出6株猪源乳酸杆菌（简称RS），并对6株RS、1株植物乳酸杆菌以及4株芽孢杆菌进行了药敏试验。结果表明：猪源乳酸杆菌对抗菌药物的耐受性达31．25％～53．13％。其中对RS-2和RS-4株菌不敏感的药物达17种之多；而植物乳酸杆菌仅对10种药物有耐受性。对大多数抗菌药物极敏感，与猪源乳酸杆菌存在明显差异；芽孢杆菌对多种抗生素敏感，只有杆菌肽抑菌圈为零。     

6株猪源芽孢杆菌的分离鉴定及其益生性研究

本研究旨在通过高温处理和常规厌氧菌分离法从健康肥猪粪便中分离芽孢杆菌,并通过培养性状、生化试验、PCR、肠道耐受、抗菌活性和接种试验动物等方法鉴定筛选性状稳定、优良的益生性芽孢杆菌。结果显示,共分离到6株芽孢杆菌,其中1株巨大芽孢杆菌、1株死谷芽孢杆菌、2株解淀粉芽孢杆菌和2株枯草芽孢杆菌;分离菌对多黏菌素和青霉素耐药性较强,对其他12种常用药物较敏感,对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好;4种芽孢杆菌均可在酸性、高胆盐和高温条件下生存,特别是巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌耐受能力较强;分离的芽孢杆菌对小鼠均无致病性,其中巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌有较明显的促进试验动物生长的作用。结果提示,巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌可作为益生性芽孢杆菌的初步选择。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。