布鲁氏菌抗体镧系高敏荧光快速检测试剂盒的研制

本试验选用镧系元素铕（Eu）为荧光物质标记布鲁氏菌脂多糖抗原（LPS）,建立了布鲁氏菌抗体高敏荧光免疫层析快速检测试剂盒（Bru-LFICA）。经相关试验验证,得出该试剂盒特异性强,敏感性高,重复性好,符合率高,且兼具操作方便,检测快速（15 min）,价廉,不需特殊设备和专业技术人员等优点,特别适合于基层兽医站、养殖场的即时快速检测。     

猪伪狂犬病gE、gB抗体镧系荧光免疫层析快检试剂盒的研制及效果评估

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记,用纯化的PRV-gE和PRV-gB表达蛋白抗原建立了检测猪伪狂犬病gE、gB抗体的镧系荧光免疫层析快检试剂盒。经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的对比试验,得出该试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好、符合率高,且质量稳定,保质期长,是实现猪伪狂犬病即时现场快速检测的一种血清学检测方法。     

H9亚型禽流感病毒免疫层析快速检测试剂盒的研制及应用

利用胶体金免疫层析技术,在建立H9亚型禽流感病毒免疫层析检测方法的基础上组装成试剂盒.试剂盒由试纸卡,稀释液、样品管、塑料吸管、一次性手套及说明书组成.对试剂盒的特异性、敏感性、保存期和重复性等进行了测定.结果表明,试剂盒在室温可以保存6个月,4℃可以保存12个月;与HA试验相比特异性强、灵敏度高、重复性好,操作简单、方便、快捷,能在10 min内准确检测出样品中是否含有H9亚型禽流感病毒.先后制备了5批试剂盒,对武汉市及周边地区的鸡场共抽检498份样品,经病毒分离鉴定准确率达到100%.     

禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。     

猪蓝耳病抗体高敏荧光免疫层析快检试剂盒的研制

本试验以镧系元素铕(Eu)为荧光标记建立了检测猪蓝耳病病毒抗体的镧系荧光免疫层析快检试剂盒,经特异性、敏感性、重复性试验及与同类产品的比对试验,表明该试剂盒特异性强、敏感性高、重复性好、符合率高;且质量稳定,保质期长,是实现猪蓝耳病即时现场快速检测的简单而实用的血清学检测方法。     

禽流感间接ELISA诊断试剂盒的研制及应用

将成熟的禽流感音接ELISA快速诊断技术试剂盒化，确定其外包装、规格、盒内组成，对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性，可重复性、符合率、与国外同类产品比较，保存期等进行了全面、详细的研究。试剂盒由9种成套试剂组成，在－15℃至－20℃保存540天各项性能仍然很好。该试剂盒与离流感间接ELISA诊断试剂盒对同样血清样品检测，符合率为100％。拥有剂盒，只票面 准备生理盐水，即可对大量血清样品同时进行检测，操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、稳定、快速、更适合于禽流感免疫技术的监测及现地疫病诊断等需要。先后制备诊断试剂盒16个批次，已成功应用于我国省、市兽医站、兽医研究所、农业院校、农科院，农业公司、口岸检疫部门及鸡等各领域对禽流感的定性诊断、流行病学调查、免疫抗体监测等。     

禽流感H9亚型一步法RT-PCR快速检测试剂盒的研制及应用

为建立一种简单、快速、灵敏、准确的禽流感H9检测方法,本研究根据GenBank中收录的禽流感H9病毒高度保守的基因序列,设计1对H9的特异性引物,建立了一步法快速检测禽流感的PCR,对反应条件进行优化后,组装成快速检测试剂盒,并对临床收集的疑似禽流感病料进行检测。结果显示,试验成功建立了禽流感H9病毒一步法RT-PCR检测方法,在此基础上完成了试剂盒的组装,对30份疑似禽流感病料的检出率高达98%以上,检测灵敏度达10^1.5ELD₅₀,稳定性良好, 冷冻保存期达12个月。经证实该试剂盒具有操作简便、经济、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性高等优点,值得推广应用。     

南安市重组禽流感疫苗免疫效果监测情况与分析

本文主要对南安市辖区2017-2019年重组禽流感疫苗免疫效果进行监测和分析。通过检测,H5、H7亚型禽流感免疫抗体合格率均达到90%以上,表明采用重组禽流感疫苗进行群体免疫,具有较好的免疫效果。     

禽流感灭活疫苗的研制与疫苗免疫试验

将分离到的３个不同毒株禽流感病毒分别接种９～１０日龄鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,配以油佐剂制成油乳剂灭活疫苗,接种５周龄的非禽流感疫苗免疫鸡,注苗后无不良反应。免疫后每周采血一次,测ＨＩ抗体,结果表明免疫后７天抗体普遍上升１～２个滴度,１４天平均抗体水平在７．５ｌｏｇ２以上,２１天抗体水平在８～９ｌｏｇ２以上,免疫后２１天攻毒,免疫组鸡无临床症床和死亡,对照组出现临床症状,但未死亡,攻毒一周后,     

荧光免疫层析技术在毛发样本吗啡检测中的应用

为有效解决检测时间窗口期偏短、检测灵敏度和准确性不高、血液和尿液等检材采集不够便捷等困扰毒品现场快速检验领域的国际性难题和关键技术,应用荧光免疫层析技术并配合专用的快速分析仪器检测毛发检材中微量吗啡,在检出率不小于90%的前提下,在进样量为80μL时,对浓度为2 ng/mL的吗啡毛发样品进行采样分析,检测限应小于等于0.16 ng/mg,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高分析灵敏度和准确度。研究结果表明,此技术符合毒品相关阳性检测临界浓度标准,与以往血液、尿液和唾液等生物检材的快速检测技术相比,具有检测时间窗口期可长达半年、检测灵敏度和准确性更高、毛发检材采集更便捷等优点,是一种可广泛用于阿片类药物及其他毒品的初筛检测的有效方法。论文对荧光免疫层析技术应用于毛发样本中的吗啡检测的相关技术及操作进行介绍,以期为相关毒品检测提供参考。     

免疫胶体金试剂盒检测家畜血吸虫病的效果及分析

目的观察浙江省农科院研制的免疫胶体金试剂盒对家畜血吸虫病检测效果。方法用试剂盒检测疫区放养耕牛、圈养猪和鸡的感染率及感染强度,同时用粪便毛蚴孵化法为标准,观察试剂盒的敏感和特异性。结果用免疫胶体金试剂盒于2005年和2006年间分别检测牛749头和613头,阳性率分别为55.4%和71.9%;检测圈养猪108头,鸡12只,阳性率分别为84.3%和91.7%;粪检检测出阳性牛18头,免疫胶体金的漏检率达33.3%;结论免疫胶体金技术检测家畜血吸虫病,假阳性率和假阴性率均很高,免疫胶体金试剂盒检测技术需进一步改进提高。     

禽流感病毒多重荧光RT-PCR检测技术的建立与初步应用

国内外检测禽流感病毒最常用和经典的方法是鸡胚病毒分离,该方法是O IE推荐的方法,但是耗费时间长。为缩短检测时间,目前我们已成功建立了灵敏、特异的荧光RT-PCR检测方法,并已经应用于活禽、禽组织及环境中禽流感病毒的快速检测与H 5、H 7、H 9亚型的分型鉴定。鉴于我国2004年年初暴发H 5N 1亚型禽流感疫情,以及高致病力禽流感通常由H 5和H 7亚型引起,因此在平时疫情检测和实施扑灭措施时对这些病毒亚型进行快速检测和定型非常重要,在本研究中,为能进一步提高检测效率,节约成本,我们进一步研制开发的H 5/H 7和H 5/N 1多重荧光PCR…     

我国自主研制出快检牛结核试剂盒

历时3年,由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,研制出快速检测牛结核方法及检测试剂盒,近日正式接到国家发明专利证书,其在诊断效果上毫不逊色于国外技术,成本却只有国外产品的1／4,打破了国外进口垄断。     

我国自主研制出快检牛结核试剂盒

<正>历时3年,由江苏省扬州大学兽医学院院长秦爱建教授带领的课题组,研制出快速检测牛结核方法及检测试剂盒已正式接到国家发明专利证书,其在诊断效果上毫不逊色于国外技术,成本却只有国外产品的1/4,打破了国外进口垄断。     

牛血清淀粉样蛋白A时间分辨荧光免疫层析检测试剂盒研制

本研究旨在研制一种牛血清淀粉样蛋白A（SAA）时间分辨荧光免疫层析定量检测试剂盒,用于牛奶中SAA含量的临床快速检测。采用双抗体夹心法结合荧光免疫层析技术,在结合垫上固定荧光微球标记的抗SAA单克隆抗体及荧光微球标记的鸡IgY的混合物,在硝酸纤维素膜的检测区包被另一株抗SAA单克隆抗体,在硝酸纤维素膜的质控区包被山羊抗鸡IgY。经抗体原料筛选及荧光微球标记抗体的工艺优化后,绘制标准曲线并对试剂盒的空白限、精密度、稳定性及样本测试性能进行初步评估。结果显示,Medix SAA-2单克隆抗体包被与YBX SAA-3单克隆抗体标记为最适抗体配对原料。荧光微球标记抗体的工艺中,荧光微球与抗体的质量投料比为40∶1、偶联剂与荧光微球羧基摩尔比为2∶1的条件为最优组合。试剂盒标准曲线的四参数拟合曲线方程为y=（1.03947-0.00182）/[1＋（x/12.08222）×（-0.84692）]＋0.00182,线性相关系数R²=0.9997。研制的牛SAA检测试剂盒空白限为0.052 mg/L。精密度测试结果显示,批内变异系数 < 15%,批间变异系数 < 20%。室温稳定性试验表明,试剂盒在室温密封存放6个月的荧光T/C值相对跌幅约15%。自制试剂盒与上海蓝基试剂盒的样本对比测试相关系数R²为0.97。综上所述,本试验研制的试剂盒具有操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,能满足临床测定需求,可作为一种新型牛SAA检测的快捷、准确的检测手段。     

高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌抗体

为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌（M. bovis）抗体的可行性,对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示,该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品,而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应（TST）阴性牛血清样品等均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核（bTB）强阳性血清参考品;稳定性试验结果显示,该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%;临床样本检测结果显示,该方法与IDEXX M. bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%,具有较高的一致性,且差异不显著。以上结果表明,高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠,可作为TST检疫的补充抗体检测方法,用于bTB的诊断、检疫和净化。     

检测鸡肉中甲羟孕酮酶联免疫试剂盒的研制

试验旨在利用酶联免疫技术研制一种快速检测鸡肉中甲羟孕酮的试剂盒。经测试,该试剂盒对鸡肉样本的检测限为1 μg/kg,批内、批间相对标准偏差均小于10%;稳定性测试结果表明,试剂盒能在4℃保存12个月;交叉反应率结果表明,单克隆抗体特异性良好。该试剂盒的操作时间仅需45 min,适合现场大量样本的快速检测。     

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。     

H5亚型禽流感病毒荧光检测试纸条的研制

为了对引起家禽重大经济损失和具有公共卫生意义的H5亚型禽流感病毒(AIV)进行快速超敏检测,本研究研制了针对HA蛋白的4株单克隆抗体(MAb)杂交瘤细胞株,通过MAb的两两配对试验,以荧光量子点作为抗体标记生物材料,基于夹心法原理建立了H5亚型AIV荧光免疫层析检测试纸条。结果显示,该方法能够特异性检测出H5N1、H5N2等H5亚型AIV,而与H1N1、H3N2、H7N9、H9N2、NDV等其他病原无交叉反应;对标准检测抗原H5N1(Re-6)的最低检测量为1 ng/mL,比市售H5亚型AIV胶体金检测试纸条灵敏度高100倍;该方法的变异系数(CV)值在10%以内,与商品化的试剂盒检测结果符合率达99.8%。本文建立的H5亚型AIV荧光检测试纸条快速、敏感,检测结果准确可靠,为H5亚型禽流感的流行病学调查和快速诊断提供了基础。     

上杭县禽流感一免和二免免疫效果对比与分析

选取4家规模禽场进行禽流感灭活疫苗一免和二免免疫效果对比试验。结果表明,鸡群一免产生的抗体合格率≥80.0%,能起到群体保护作用;鸭群一免产生的抗体合格率≤63.3%,不能起到群体保护作用。二免鸡群和鸭群的抗体合格率均高于一免,能起到较好的群体保护作用,且鸡群的抗体效价和整齐度优于鸭群。鸭群要想获得较好的免疫效果,必须实施二免。