核桃属种质资源的EST-SSR标记研究

 用18对EST-SSR引物对核桃属（Juglans L.）中的6个黑核桃组（Sect. Rhysocayon）样品、14个核桃楸组（Sect. Cardiocaryon）样品、28个核桃组（Sect. Juglans）样品和山核桃属（Carya Nutt）中的4个长山核桃（C. illinoinensis Koch.）样品进行了PCR扩增。在18个EST-SSR位点上共获得110个等位基因,每个位点扩增等位基因3 ~ 10个,平均6.1个;各位点的观察杂合度为0.057 ~ 0.574,平均为0.323;各位点PIC值在0.3723 ~ 0.8795之间,平均为0.6890。18对EST-SSR引物在长山核桃、黑核桃组、核桃楸组、铁核桃和核桃样品中,EST-SSR位点平均有效扩增率分别为87.5%、96.3%、98.8%、100%和99.8%,说明核桃EST-SSR在种、属间具有良好的通用性。聚类分析表明：在属间和核桃属内组间的聚类清晰,结果与传统分类一致。在核桃种内,参试样品可分为新疆、华北和西藏3个地理生态型,来自陕西的核桃样品与来自北京、山东、河南的样品混聚在一起,表明陕西核桃与华北核桃应属于同一地理生态型。在铁核桃种内,‘金沙江铁核桃1’、‘金沙江铁核桃2’与‘永平铁核桃1’聚为铁核桃种。‘三台’和‘丽江铁核桃1’铁核桃样品,还有‘丽江核桃1’与西藏核桃聚在一起,说明‘丽江核桃1’应属于西藏核桃地理生态型,并且部分铁核桃与西藏核桃的亲缘关系较近。这可能是由于铁核桃与核桃混生,自然杂交使一些铁核桃后代含有了核桃基因。     

普通核桃(Juglans regia)3个群体遗传结构的SSR分析

以新疆伊犁野核桃、喀什实生核桃及部分栽培品种共80份种质材料为试材,利用来自黑核桃的7对SSR引物进行群体遗传结构分析。结果显示,7对引物多态性带比率为92.3%～100%,均具有较高的多态性;伊犁野核桃、喀什实生核桃及栽培品种3个群体的期望杂合度分别为0.2325、0.3085、0.305,香农系数分别为0.3361、0.4669、0.4646,多态性带百分率分别为56.52、95.83、86.84%,表明3个核桃群体具有较高的遗传多样性水平,3个指标均显示喀什群体的最高、伊犁的最低;从3个群体中随机选出10个株系或品种进行聚类分析,所有参试株系或品种相互交叉,说明伊犁野核桃、喀什实生核桃和栽培品种之间存在基因渗透和交流(基因流Nm=2.0934);讨论了伊犁野核桃、喀什实生核桃和栽培品种的亲缘演化关系,研究结果为"我国是世界栽培核桃的起源中心之一"的论断进一步提供了分子证据。     

基于SSR标记的核桃种质资源遗传多样性与遗传结构分析

以58份核桃品种(优株)为试材,利用荧光SSR分子标记方法评价了58份种质资源的群体遗传多样性,分析其遗传结构特征,构建NJ聚类图,以期准确了解58份核桃种质的遗传背景和亲缘关系,为核桃属种质资源的合理利用、遗传资源的保存以及开发合理的育种方案和策略提供参考依据。结果表明：1)试验筛选出的15对SSR引物具有较高的多态性,共扩增出109个多态性等位基因(Na),平均每对引物的观测等位基因数(Na)为7.267,平均有效等位基因(Ne)3.069,平均观测杂合度(Ho) 0.519,平均期望杂合度(He)0.653,平均多态性信息量(PIC)0.603 5,平均香农指数(I)1.327。2)58份核桃品种(优株)间遗传距离范围为0.181～0.742,变幅为0.561,品种间遗传距离≥0.5的比例为44.19%,≥0.6的比例为13.5%,遗传基础较宽广,遗传信息丰富,遗传多样性水平较高。3)基于Nei遗传距离聚类分析,58份核桃品种(优株)可聚成3个类群,聚类结果与表型性状、亲缘来源有关,与地理位置相关度不大。4)群体遗传结构分析中,Q>0.6占比81.03%,基因混合来源比例较...     

草莓属种质资源亲缘关系的SSR 标记分析

 用20对SSR引物对草莓属83份资源包括14个种和自然五倍体以及未鉴定的材料进行PCR扩增。在20个SSR位点共获得363个等位基因。每个位点扩增等位基因8 ~ 34个,平均18.2个,各位点多态性信息含量（PIC）在0.6691 ~ 0.9431,平均为0.8598。聚类分析表明,同属一个种的草莓资源被紧密地聚在一起。以种为单位,3个八倍体种智利草莓、弗州草莓和栽培种凤梨草莓亲缘关系很近,而八倍体种与其他低倍性野生种亲缘关系较远;在低倍性草莓种中,伞房草莓、五叶草莓、日本草莓、蝦夷草莓、高原草莓、黄毛草莓和绿色草莓聚在一组,具有较近的亲缘关系,而森林草莓、东北草莓、东方草莓、麝香草莓和自然五倍体草莓聚在一组,具有较近的亲缘关系。自然五倍体草莓可能起源于森林草莓或东北草莓与东方草莓或麝香草莓的自然杂交。     

基于SSR标记的黄桃种质资源亲缘关系分析

利用SSR标记技术对12个黄桃品种（系）进行遗传多样性检测.结果发现,SSR标记能够揭示材料间的遗传多样性,从蔷薇科苹果属35对SSR引物中筛选出8对扩增稳定的特异性引物,构建其指纹图谱.8对SSR引物共扩增出78条DNA片段,其中44条具有多态性,多态性比率为54.6％,材料间的遗传相似系数在0.64 ～0.88之间,平均为0.759.通过聚类,从分子水平对黄桃品种（系）的遗传关系进行分析,并对12份黄桃种质材料进行了SSR标记分类,为黄桃种质资源的研究利用提供参考.     

化州橘红种质资源的SSR标记分析

利用核基因组简单序列重复（Simple sequence repeat,SSR）DNA标记,对11份化州橘红及其相关种质的遗传多样性进行了研究。结果表明：6对SSR分子标记引物共扩增出32个等位基因,每对引物可扩增3～8个等位基因;11份种质在SSR位点上的PIC值介于0.1763到0.4400之间,平均为0.2761。聚类分析表明,在Nei s遗传相似系数0.85处,可将所研究的种质分为6组,其中有5组分布有化州橘红种质,表明化州橘红不同种质间有较大的遗传差异。     

油梨转录组SSR分子标记开发与种质资源亲缘关系分析

选取海南大学油梨种质资源圃的‘Fuerte’油梨花朵和小果进行转录组测序,获得18 010条序列,总长度为29 422 056 bp。利用MISA软件检索转录组测序数据,获得分布于4 687个序列中的6 312个SSR位点。经统计发现,SSR在所检测的序列中出现的频率为35.05%。分析SSR位点特征显示,所有类型的SSR平均长度为18.90 bp,SSR之间的平均距离为4.66 kb。‘Fuerte’油梨转录组中SSR序列以二核苷酸、三核苷酸重复类型为主,两者占SSR总数的87.15%。二、三、四核苷酸重复类型中优势基元分别为AG/CT、AAG/CTT、AAAT/ATTT。利用Primer 3.0对SSR序列设计引物13 398对。以32份油梨种质资源为研究对象,对随机挑选的100对SSR引物进行有效性验证,并用于对这些油梨种质进行亲缘关系分析。发现其中40对引物具良好多态性,共扩增出219条谱带,其中171条为多态性谱带。经计算,平均每对引物产生4.275个多态性片段。He和PIC均值分别为0.529和0.456。UPGMA聚类和PCA分析结果较一致,在系数设定为0.74时可将32...     

核桃SSR反应体系的优化

以清香、香铃、爱米格为试材,利用CTAB法提取基因组DNA,将PCR体系的主要成分设定5个梯度,根据每个成分的变化引起的PCR-SSR的效果差异,探讨了核桃SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响,并对引物WGA321的适宜退火温度进行优化。最终确定了引物WGA321的最适退火温度为48～52℃,PCR反应体系的最佳条件为:15μL体系中,Mg2+1.0mmol/L,dNTPs浓度0.40mmol/L,TaqE用量为0.5U,DNA模板1.0ng/μL,引物浓度为0.4μmol/L。利用此反应体系对部分核桃品种进行PCR扩增并电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合核桃的亲缘关系分析。     

核桃种质资源遗传多样性的RAMP标记分析

以核桃嫩叶为试材,对34份核桃种质资源进行了RAMP技术分析研究,以期建立基因组DNA的有效提取方法。结果表明:利用11对引物共扩增出185个条带,其中多态性条带142个,多态性条带比率62.5%~93.3%;34份核桃样品间的相异系数0.0274~0.4848。表明34份核桃种质资源具有较丰富的遗传多样性,用RAMP进行核桃资源的DNA指纹分析可行;核桃的遗传基础具有一定的地域特征,"石门核桃"种群在遗传关系上是相对独立的栽培群体。     

河北核桃( Juglans hopeiensis Hu)光合特性的研究

 以河北核桃‘艺核1号’等为试材, 利用CI-301PS便携式光合作用测定仪, 在田间条件下,研究了河北核桃的光合特性。结果表明: ‘艺核1号’光饱合点为1643 μmol·m^{- 2} ·s^{- 1}左右, 光补偿点为50 μmol·m ^{- 2} ·s^{- 1}左右, 最适温度为29℃; 光合速率日变化为“中午降低型”的双峰曲线; 净光合速率的季节变化为双峰曲线, 第1峰出现在5月中旬, 第2峰出现在8月上旬; 影响光合速率日变化的主要因子依次是气孔导度、光合有效辐射、叶温、胞间CO₂ 浓度和蒸腾速率。河北核桃净光合速率低于普通核桃, 接近于核桃楸。     

核桃离体培养和植株再生

 以5个核桃品种(株系) 10年生植株的茎段为外植体, 进行了离体培养和植株再生的研究。结果表明, 附加2 g·L^-1聚乙烯吡咯烷酮的DKW + 6-BA 1.0 mg·L^-1 + IBA 0.01～0.10 mg·L ^-1是诱导茎段萌发最适宜的培养基, 5个品种(株系) 间的萌发率存在差异; DKW + 6-BA 110 mg·L^-1 + IBA 0.01mg·L^-1 + 蔗糖40 g·L^-1是最适宜的增殖培养基; 采用二步生根法最高生根率为41.67% , 生根试管苗移栽于草炭土∶河沙= 1 ∶1的基质中, 控制温度20～30 ℃, 保湿20 d, 期间遮荫, 40 d后成活率95%。     

云南三台核桃ISSR体系优化

试验以云南三台核桃幼叶为试材提取基因组DNA,并用正交设计方法,比较了Taq酶、Mg2+、引物d、NTPs和DNA模板等5因素5水平共25个反应体系的ISSR-PCR扩增结果。确定三台核桃ISSR-PCR的反应体系为:20μL反应体系中Taq酶0.25 U、Mg2+为2.0 mM/L、引物0.8μM/Ld、NTPs 0.4 mM/L1、0×PCR Buffer 2μL和10 ng模板DNA。该体系的建立为今后利用ISSR技术进行三台核桃遗传图谱的构建、基因定位、种质资源鉴定与分类和遗传多样性分析奠定了技术基础。     

西藏林芝地区核桃表型特征研究

通过对西藏林芝地区核桃表型特征进行研究,以期为西藏核桃的选育提供参考。依照核桃的性状调查方法,研究了林芝地区4个居群8个核桃家系:朗县(LX1-4)、米林县(ML7-8)、林芝县(LZ5-6)和2个铁核桃家系:波密县(BM9-10)的叶型、不同居群核桃表型特征以及坚果特征。结果表明:顶叶长与宽之比LX2最大,ML7最小;复叶长与宽比例LZ5最大,BM10最小;复叶最长的为ML7,最短者为BM10。坚果质量:BM>LX>ML>LZ;仁坚比:LX>ML>LZ>BM;壳厚:BM>LZ>ML>LX。坚果纵横径比值最大的为BM9,最小的为LX1。林芝地区朗县核桃可作为优良家系进行繁殖,波密的铁核桃保持着较高的遗传多样性,是选种和育种的优先资源。     

循化地区核桃品比试验及栽培管理要点

以从陕西眉县引进的4个核桃品种"辽核4号"、"香玲"、"西林2号"、"西扶1号"及当地薄皮核桃为试材,研究比较了5个品种的物候期、生长特性、果实性状及产量等性状。结果表明:引进的4个核桃品种均可以在循化地区作为良种进行推广栽植;同时在比较各品种性状的基础上,对循化地区核桃栽培管理要点进行了总结。     

河北省核桃主栽品种坚果特征分析与评价

以河北省9个主栽核桃品种为试材,通过对坚果表型特性及营养品质测定,进行相关性分析及主成分分析,明确了坚果品质的综合评价指标,并筛选出适栽品种。研究结果表明,“早硕”的单果重与侧径、“赞美”的核壳厚度、“辽宁1号”的出仁率及“西岭”的缝合线紧密度均显著高于其他品种;“清香”的蛋白质和黄酮含量、“辽宁8号”的油脂和多酚含量及“上宋6号”的可溶性糖含量显著高于其他品种。经相关性分析发现,单果重与缝合线紧密度呈显著负相关;多酚含量与可溶性糖含量呈显著正相关,与黄酮含量呈极显著正相关;坚果纵径与黄酮、多酚及可溶性糖呈显著正相关,坚果出仁率与多酚呈显著负相关。根据主成分分析法筛选出坚果的纵径、横径、单果重、缝合线紧密度、多酚、蛋白质和油脂含量作为品种评价的关键指标。采用筛选出的评价指标对9个核桃品种进行排序,“早硕”“辽宁1号”“清香”皆具有较好的坚果表现。     

青海高原核桃果实油脂和生长动态变化分析

以地方核桃为试材,拍照记录果实外观形态变化,并对不同发育时期果实质量、果实纵横径、坚果质量、种仁质量、出仁率、油脂含量和成熟种仁中脂肪酸组分等进行测定,以期明确青海高原核桃果实油脂和生长动态变化。结果表明:随着核桃果实生长发育,果实质量、果实纵横径、坚果质量、种仁质量、出仁率、油脂含量等指标总体呈上升趋势,其中果实质量在成熟后期略有下降,并依据指标建立了核桃果实生长发育的数学模型。7月中旬油脂开始积累,并逐渐增加,至果实成熟时种仁中的油脂含量达到最大值69.4%,种仁中主要脂肪酸是棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸,不饱和脂肪酸含量可达91.7%。9月中旬核桃果实充分成熟,且油脂含量最高,是最佳采收时期。可根据核桃果实形态、果实生长曲线和数学模型来判断果实发育时期,采取合理的栽培管理措施,从而提高核桃果实的产量和品质。     

苹果属种质资源亲缘关系的SSR分析

应用SSR技术对59份苹果属材料进行基因组的多态性分析,从20对引物中筛选出12对SSR引物扩增出176个等位基因,平均每个位点14.7个等位基因。位点杂合度为0.4039～0.7412,遗传多样性指数为0.6156。用3对引物(CH02a04、CH02g04和CH01f03b)即可区分全部供试材料。NTSYS软件进行相似系数计算,UPGMA法聚类分析将59份苹果属材料分为3大类群,即栽培品种、地方品种和新疆的野生苹果、野生种或其变种。栽培品种中具有相同亲本起源的品种被紧密地聚到了一起,相似系数较高;地方品种与新疆的野生苹果的聚类相互交错,呈现出新疆的野生苹果作为东亚基因中心的起源种与中国各地方品种在起源演化上的相关性;各野生种及其变种类型均聚到了一起,与传统的系谱基本一致。     

山葡萄种内遗传多样性的SSR分析

利用26对SSR引物对124份山葡萄种质资源的遗传多样性初步分析,等位基因(Na)数平均为3.6923,有效等位基因(Ne)数平均为2.5779,Shannon多样性指数(I)平均为1.0195,基因多样度(Nei)平均为0.5762。野生种质资源的遗传多样性高于选育品种;而野生种质资源中黑龙江省的遗传多样性高,其次是吉林省野生资源,辽宁省野生资源最低。山葡萄种质的遗传相似性系数J为0.224～0.972,平均遗传相似系数为0.588。根据遗传相似性系数进行UPGMA聚类,建立树状聚类图。利用26对SSR标记能将供试的124份山葡萄种质相互区分,在遗传相似性系数0.39处将供试山葡萄种质资源分为6大类群,多数种质的聚类和山葡萄长期生长发育的地理分析研究结果一致。     

20份葡萄种质亲缘关系的SSR分析

利用SSR标记对20份葡萄材料进行了基因组多态性分析,从245对引物中筛选出19对用于葡萄的SSR扩增。共扩增出144条带,均为多态性条带,多态性百分率为100%。根据SSR扩增结果,利用NTSYSpc2.10e软件进行Jaccard相似性系数分析,20份葡萄材料的遗传相似系数为0.630～0.900,平均遗传相似系数...