犬红细胞Cu.Zn—SOD的纯化及其部分特性

采用乙醇一氯仿处理，加热，丙酮沉淀和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－５０柱层析的方法，从犬血红细胞中提纯了铜锌超氧化物歧化酶（Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ），并对其部分性质进行了研究，比活力为４１５０Ｕ／ｍｇ，不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现１条区带，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的亚基分子量为１６３００，紫外最大吸收峰位于２５９ｎｍ氨基本组成中不含有色氨酸。     

家蚕铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化及其部分性质的研究

家蚕体液经热变性、DEAE 琼脂糖柱层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤和等电点聚焦电泳纯化 ,获得达到均一程度的高活性的铜锌超氧化物歧化酶 (Cu .Zn SOD)。活性回收率为 35 % ,纯化倍数为 1911倍。测得该酶的分子量约为 32 0 0 0D ,亚基分子量约为 16 0 0 0D。该酶在紫外光区与可见光区的吸收峰分别为 2 70nm和 6 76nm。测得该酶的等电点为pH 7.15。     

Cu/Zn SOD蛋白在布鲁菌S19疫苗株中的过表达及鉴定

以Cu/Zn SOD为目的基因,通过基因工程技术分别构建了组成型过表达系统pBBR-trc-sod和诱导型过表达系统pBBR-lacPtrc-sod,在布鲁菌S19疫苗株中进行了Cu/Zn SOD的过表达。同时,以大肠杆菌为宿主表达纯化的重组Cu/Zn SOD蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对2种过表达系统中Cu/Zn SOD蛋白的表达量进行分析。结果显示,诱导型Cu/Zn SOD过表达系统的表达量更高,且能与所制备的多抗发生特异性反应。结果表明,构建的过表达系统能够实现Cu/Zn SOD蛋白在布鲁菌S19疫苗株中过表达;同时,该试验也提示我们这种表达系统可应用于布鲁菌S19疫苗的抗原改造。     

绿豆芽中SOD的分离纯化研究

采用硫酸铵盐析,透析,抽真空,DEAE-纤维素A-52柱层析,从绿豆芽中提纯了超氧化物歧化酶,酶的纯 化程度达到每毫克蛋白2 855U,总酶活回收率为38.4％,纯化倍数为27.5。     

绿豆芽中SOD的分离纯化研究

采用硫酸铵盐析,透析,抽真空,DEAE-纤维素A-52柱层析,从绿豆芽中提纯了超氧化物歧化酶,酶的纯化程度达到每毫克蛋白2 855U,总酶活回收率为38.4%,纯化倍数为27.5.     

犬巨幼红细胞性贫血的诊治

犬巨幼红细胞性贫血病的发病原因主要是机体缺乏维生素Ｂ及叶酸造成的 ;临床上表现可视粘膜苍白外 ,血象检查为(红 )细胞偏大 ,畸型 ,嗜中性白细胞分叶核过多。现将我站近期诊治的三例病犬报告如下。1　发病情况 　 1999年 2月某养犬专业户饲养的 4个月龄圣伯纳犬 2只先后发病 ,出现腹泻、发热、呕吐、沉郁、拒食等症状 ,先后用青霉素、先锋霉素、抗病王等治疗 ,均无效果。2　临床检查　病犬精神沉郁 ,被毛逆立 ,行动迟缓 ,全身乏力 ,消瘦 ,皮肤、眼结膜、口腔粘膜、齿龈苍白 ,呈现明显的慢性病容。体温 37.9～ 38.5℃ ,脉搏 12 4～ 148次 /…     

隆朋对犬红细胞ATPase活性及其抗氧化功能的影响

将12只健康本地犬,肌肉注射隆朋3.0 mg/kg,在注药前(即对照组)及注药后2、8、24、72、120、168 h静脉采血,分别测定红细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果显示,注射隆朋后红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase三种酶活性均呈下降趋势,并在8 h均降到最低值,与对照值比较差异显著(P<0.05).注射隆朋后2 h T-AOC、SOD活性显著低于对照组(P<0.05);而MDA的含量在注药后2 h高于对照组且差异极显著(P<0.01),120 h基本恢复正常.本试验结果表明,隆朋对于犬红细胞膜Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase活性均有不同程度的抑制作用.隆朋对于犬的T-AOC及sOD的活性存在显著影响,并会引起红细胞分泌MDA含量升高,从而导致红细胞膜发生损伤.     

大肠杆菌铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列测定

试验以E.coliMG1655的基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增sodC基因,PCR产物经纯化回收后克隆至pMD18-T载体中,转化E.coliDH5α感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒进行SacI和KpnI酶切及PCR扩增鉴定,并对sodC基因片段进行序列测定。试验成功克隆了sodC基因,获得的基因与报道的sodC基因序列同源性达到99.6%,为进一步构建重组表达载体奠定了基础。     

绵羊血超氧化物歧化酶的提纯和性质

参照McCord＆Fridovich法,从绵羊血中提取纯化了超氧化物歧化酶,每2L血可获得纯化酶29.2mg,比活为12730U/mg,产率约63.4%.绵羊血超氧化物歧化酶呈淡蓝绿色,分子量33000,在276nm处有一个特殊的紫外吸收峰,在60℃以下稳定,pH6～11不影响其活性.酶液在聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳上呈现1条带.     

乳品中超氧化物歧化酶的生物学活性及其加工稳定性的研究进展

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)广泛存在于乳品中,是生物体内防御机体老化的一种非常重要的金属酶.SOD在乳品的保健作用中发挥了重要的作用,本文对其作简单介绍,并对乳品中SOD的生物活性及其加工稳定性进行了探讨.     

不同破壁方法对蜂花粉超氧化物歧化酶活性的影响

本试验采用超氧化物歧化酶（SOD）抑制氮蓝四唑（NBT）在荧光下的还原作用，测定了经过研磨、溶涨、发酵破壁处理后的蜂花粉中超氧化物歧化酶（SOD）的活性。试验结果表明：发酵破壁与溶涨破壁处理后SOD活性明显高于研磨破壁，差异极显著；发酵破壁后的SOD活性显著高于溶涨破壁。     

运动对雌性SD大鼠卵巢和血清中超氧化物歧化酶的影响

为研究运动对SD大鼠卵巢和血清中超氧化物歧化酶(SOD)的影响,随机选取SD大鼠分为5组,试验组大鼠每日分别进行不同时长(0、20、40、60、80min)游泳训练。训练20周后处死大鼠,免疫组织化学SP法检测大鼠卵巢组织中SOD的表达情况,并检测血清中SOD的浓度。结果表明,40min和60min运动组血清中SOD的浓度高于对照组,差异显著(P0.05),80min运动组血清中SOD浓度显著低于对照组(P0.05);免疫组化显示,SOD主要表达于卵巢黄体的颗粒性黄体细胞中,与对照组相比,20min运动组的表达差异不显著,40min和60min运动组的表达高于对照组,差异显著(P0.05),80min运动组的表达与对照组相比差异极显著降低(P0.01)。提示,适当运动可以增加大鼠卵巢和血清中SOD的水平,而过度运动则会造成大鼠卵巢和血清中SOD水平降低。     

超氧化物歧化酶模拟物对氧化应激IPEC-J2细胞抗氧化性能的影响

试验旨在探究在H₂O₂诱导的氧化应激状态下,超氧化物歧化酶模拟物（SODm）对仔猪空肠上皮细胞系（IPEC-J2）的保护作用。利用MTT法筛选出构建氧化应激模型H₂O₂的适宜浓度;将IPEC-J2细胞分别用0、0.05、0.5、5、50、500、2 000 U/mL SODm进行培养,利用MTT法分别在2、4、8、12 h时测定各组细胞存活率,筛选出SODm作用的适宜浓度和时间;根据构建的氧化应激模型和SODm适宜浓度和时间,将IPEC-J2细胞随机分为空白组、模型组、SODm处理组（SODm_0.5、SODm₅、SODm₅₀）和超氧化物歧化酶（SOD）处理组（SOD_0.5、SOD₅、SOD₅₀）,分别测定各组细胞存活率、活性氧（ROS）含量及细胞内SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量和总抗氧化能力（T-AOC）。结果表明：①H₂O₂构建细胞氧化应激模型的适宜浓度是1.0 mmol/mL。②当不同浓度SODm分别作用4、8、12 h时,0.5~50 U/mL SODm组细胞存活率显著高于空白组（P<0.05）;且8 h时存活率最高,在12 h时处于下降趋势。③除空白组外,SODm₅和SOD₅预处理的IPEC-J2存活率显著高于其他组（P<0.05）;且SODm和SOD组中细胞ROS含量显著低于模型组（P<0.05）;模型组与空白组相比,均显著降低了SOD、GSH-Px活性和T-AOC水平,提高了MDA含量（P<0.05）;与模型组相比,所有SODm和SOD处理组均显著提高了SOD、GSH-Px活性和T-AOC水平,降低了MDA含量（P<0.05）,同时SODm₅₀组T-AOC水平显著低于SOD₅₀组（P<0.05）。综上,SODm对H₂O₂诱导氧化损伤状态下IPEC-J2具有保护作用。     

牛血铜锌超氧化物岐化酶规模化生产工艺研究

本研究利用红细胞连续分离和热变性、超滤、丙酮沉淀、离子交换等技术,建立了一套牛血铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)规模化生产的简便易行新工艺。该工艺采用碟式分离机对红细胞进行连续分离,其分离速度可达1000kg牛血/h以上;采用添加Cu2 、Zn2 的一次热变性方法除去血红蛋白,可以代替传统方法中的氯仿和乙醇,并且在超滤技术浓缩提取液后,沉淀过程中丙酮的用量减少了90%;减轻了这些有机溶剂对环境造成的压力。在规模化生产条件下,利用新工艺,投料14批,共570.5kg红细胞,得到SOD冻干粉36069.35 mg,平均比活达到6164.19U/mg.pro,平均收率为34.41万U/kg红细胞,并且主要化学试剂成本降低93.0%。此外试验结果还表明,冷冻红细胞热变性后,酶的平均总活力一般稳定在72.86万U/kg红细胞;与新鲜红细胞制备的SOD在收率、纯度、比活等方面无明显差别,即可以以冷冻红细胞为原料制备SOD,从而解决了原料长期保存问题。     

超氧化物歧化酶（SOD）在蚕业上的研究进展

本文介绍了近年来桑和蚕ＳＯＤ研究的结果,阐明了它的生理作用。