菠菜根尖细胞有丝分裂同步化诱导

本研究以菠菜（Spinacia oleracea L.）根尖分生组织为材料，采用羟基脲（HU）和甲基胺草磷（APM）结合的双阻断法对菠菜根尖细胞进行处理，结合显微镜观察和统计学分析结果，对有丝分裂中期同步化诱导作了探讨，并对中期染色体分离也作了初步研究。在试验中分别设置了羟基脲（HU）和甲基胺草磷（APM）的不同浓度梯度，并对甲基胺草磷（APM）设置了作用时间梯度，以研究其最佳同步化诱导效果。结果表明，经1.25 mmol/L HU、10μmol/L APM处理菠菜根尖细胞，能够使细胞有丝分裂中期指数(Met.I)达40%。     

除草剂APM对洋葱细胞分裂和微管功能的影响

从细胞毒理学和免疫化学角度对磷酰胺除草剂AMP对洋葱根尖细胞有丝分裂和微管功能的影响作了初步探讨，结果表明，经10μmol/L APM处理16h后，细胞出现多极分裂和不均等分裂现象，免疫化学检测表明，纺锤丝失去正常向两极辐射状排列的功能，而是凝聚成一团故引起细胞的不正常分裂。     

除草剂乙草胺对棉花根尖细胞有丝分裂的影响

以棉花根尖为材料,用不同浓度(0.1 mg/L,0.5 mg/L,1.0 mg/L,1.5 mg/L,2.0 mg/L)的乙草胺分别处理12 h、24 h、48 h和72 h,研究乙草胺对棉花根尖细胞有丝分裂指数和染色体形态的影响.结果显示,乙草胺处理浓度为0.1 mg/L,处理12 h条件下,棉花根尖细胞分裂指数达到...     

铝（Al^3＋）对洋葱根生长和细胞分裂的影响

以洋葱(Allium cepa L.2n=16)为材料,研究不同浓度氯化铝(AlCl_3·6H_2O)溶液对根生长、根尖细胞有丝分裂和染色体形态的影响.研究结果表明,随着Al~(3+)浓度的增加,根的生长量递减,呈明显的负相关;随着处理时间的延长,每单位时间的生长量亦递减,甚至停止生长;在50～200ppm Al~(3+)处理下,根尖细胞有丝分裂指数随着Al~(3+)浓度增高而递减,随着处理持续时间的延长而递减;不同浓度的Al~(3+)处理都能引起染色体畸变,如,c-有丝分裂、染色体桥、染色体粘连等;恢复培养后各处理的鳞茎均能恢复生长.染色体畸变率降低.     

硫酸铜对大麦根尖细胞有丝分裂的影响及其致畸效应

为了研究硫酸铜对大麦根尖细胞的畸变效应,采用不同浓度的硫酸铜(0.05g/L、0.10gL、0.25g/L、0.50g/L和1.00g/L)分别处理大麦根尖,统计分析了大麦根尖细胞的有丝分裂指数、微核千分率和染色体畸变率。结果表明,不同浓度的硫酸铜均能使大麦根尖细胞有丝分裂指数明显增加0.10g/L硫酸铜处理有丝分裂指数最大,为9.64%而前期、中期和末期分裂指数均高于对照,后期分裂指数与对照之间差异不显著。在浓度低于0.10g/L时,细胞微核千分率随硫酸铜处理浓度的升高而增加,但随着硫酸铜浓度的进一步升高反而呈下降趋势。硫酸铜还能诱导染色体产生多种类型的畸变在浓度低于0.25g/L时,染色体畸变率随硫酸铜处理浓度的升高而增加,然而随着硫酸铜浓度的进一步升高染色体畸变率呈下降趋势,但均明显高于对照。     

以流式核型分析小麦根尖细胞的有丝分裂同步化过程

构建染色体特异文库是简化小麦基因组测序的有效途径,而通过同步化处理提高根尖细胞有丝分裂指数,使根尖细胞中富集高比例的中期染色体是实现染色体分选成功的前提。采用双阻断法用50 µmol L^-1羟基脲和100 µmol L^-1氟乐灵对普通小麦根尖细胞进行同步化处理,然后用流式核型分析法观测各周期细胞在不同时间点上的比例变化。结果显示,最佳方案为羟基脲处理10 h,恢复7 h,氟乐灵处理4 h。以此方案处理中国春小麦根尖可获得最高的有丝分裂指数,达70.1%。附加冰水处理(0°C)有助于减少染色体碎片和增加流式核型的分辨率,但对富集更多的中期染色体没有效果。     

大蒜对纳米金引起蚕豆根尖细胞微核拮抗作用的研究

为了研究大蒜提取液拮抗纳米金对蚕豆根尖细胞的遗传毒性效应,以100μg/m L纳米金溶液对蚕豆根尖进行染毒处理,分别以浓度为0～1 g/m L的大蒜提取液作为拮抗效应物。利用蚕豆根尖细胞微核检测技术,研究不同浓度大蒜对纳米金处理下蚕豆根尖细胞有丝分裂行为的影响。试验结果表明,纳米金具有一定的遗传毒性,且随着大蒜提取液浓度的不断增加,蚕豆根尖细胞有丝分裂指数、微核率和染色体畸变率均呈现显著减少的趋势(P0.05),表明大蒜提取液对纳米金引起的蚕豆根尖细胞毒害作用具有一定的拮抗作用,且最适拮抗浓度为0.25 g/m L。同时,试验结果还表明,高浓度的大蒜提取液对蚕豆根尖细胞的有丝分裂具有一定的抑制作用。     

VHZ对玉米分生组织毒害的细胞及生化分析

研究了微管解聚型三唑类化合物VHZ对玉米分生组织的影响,从细胞学及生物化学水平分析了VHZ的毒害机理.结果表明,VHZ能够诱导玉米根尖分生组织细胞前期、中期的同步化以及染色体变异(染色体桥、染色体滞后、染色体凝集).临界浓度和时间分别为20 μmol/L和12 h.免疫荧光标记检测表明,同步化细胞的形成以及染色体结构变异与纺锤丝的功能受到抑制有关.2D/SDS-PAGE检测发现,经VHZ处理后玉米根尖蛋白有两种组分消失,四种蛋白质组分含量有不同程度的降低,这些蛋白质组分可能对VHZ的防御机制有重要作用.     

烟酰胺对小鼠肝细胞能量代谢的影响

利用原代培养的小鼠肝细胞,研究烟酰胺(Nicotinamide,NA)对细胞能量代谢的影响.以不同浓度的NA(0～500 μmol/L)干预24 h后,检测细胞和培养介质中一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合酶(NOS)活力及三种能量代谢指标乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)和三磷酸腺苷酶(ATPase).结果表明,随着NA浓度的增加,其对肝细胞能量代谢的促进作用逐渐上升,当浓度为200 μmoL/L时达到高峰,即200 μmol/L NA的促进效果最为显著,而当NA浓度达到500μmol/L时,肝细胞能量代谢水平反而低于对照组.表明一定浓度范围内烟酰胺具有促进肝细胞能量代谢的作用.     

高Fe2+胁迫下水稻幼苗根尖铁的分布及细胞超微结构变化

以耐性水稻(Oryza sativa L.)品种Azucena为实验材料,研究高Fe2+胁迫下,0～10mm段幼苗根尖铁的分布,以及根尖细胞亚显微结构变化情况.结果表明,400μmol/L Fe2+处理下,0～2mm段根尖铁含量最高;随着Fe2+浓度的升高,根尖边缘细胞(BC)铁含量呈递增趋势.电镜观察发现,400μmol/L Fe2+处理下,BC内出现大量碎片,受损明显,而根冠细胞主要表现为细胞壁增厚、细胞内出现许多小液泡.     

三氮苯类除草剂对水稻染色体结构、蛋白质含量及组分的影响

比较研究了不同浓度三氮苯类除草剂对水稻幼苗生长、叶绿素及可溶性蛋白质含量、根尖分生组织染色体结构、分生组织和叶绿体蛋白质组分的影响。结果表明,在0.1 mg /L Atrazine处理水稻后培养1周。幼苗高度由(10.8±1.7) cm（对照）降至 (8.2±0.7) cm,叶绿素含量由(1.07±0.013) mg/g FW（对照）降至(0.97±0.013) mg/g FW,     

栽培小麦Brock和京411感染白粉菌后蛋白质组的变化

用华北地区流行的白粉菌15号生理小种,感染强抗白粉病的栽培小麦Brock和对白粉病敏感的小麦京411,通过蛋白质组技术分析其差异蛋白。结果表明,Brock经白粉菌感染12 h后,至少有6个蛋白质斑点(43 kD/pI 6.7、43 kD/pI 6.9、43 kD/pI 7.2、28 kD/pI 5.8、26 kD/pI 5.5和26 kD/pI 6.5)表达量明显增加;感染3 d后,有5个蛋白质斑点(48 kD/pI 5.6、43 kD/pI 6.9、43 kD/pI7.2、28 kD/pI5.8和26 kD/pI5.5)表达量增加;感染5 d后,有12个新的蛋白质斑点(16 kD/pI 7.6、42 kD/pI 6.5、40 kD/pI 4.8、40 kD/pI 4.6、31 kD/pI 5.7、16 kD/pI 4.6、20 kD/pI 8.3、50 kD/pI 6.7、48 kD/pI 6.6、28 kD/pI 5.7、23 kD/pI 4.8和25 kD/pI 4.7 )被诱导合成,2种蛋白质斑点(26 kD/pI 4.6和17 kD/pI 7.9)消失。京411经白粉菌感染12 h后,3个蛋白质斑点(21 kD/pI 6.4、18 kD/pI 5.4和14 kD/pI 7.0)表达量增加;感染3 d后,有2个蛋白质斑点(80 kD/pI 5.4和14 kD/pI 7.0)表达量增加,1个蛋白质斑点(16 kD/pI 5.4)表达量下降;感染5 d后,有3个蛋白质斑点(50 kD/pI 7.3、40 kD/pI 7.3和24 kD/pI 7.2)表达量增加,2个斑点(40 kD/pI 4.8和14 kD/pI 7.2)表达量下降,但没有发现新的蛋白质合成。对Brock中诱导产生的12个新蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-MS方法,于NCBI进行数据查询,其中有6个分别属于F-box亮氨酸高度重复蛋白、重金属转运/解毒蛋白、β-1,3-葡聚糖酶(两个同工体)、β-1,3-葡聚糖酶前体、锌指蛋白。功能查询表明,上述6个蛋白参与细胞周期调控、发育、激素响应、基因转录和病害防御等。推测Brock和京411感染白粉菌后,出现的蛋白质组变化可能与各自的抗、感白粉病特性有关。     

海滨碱蓬（Suaeda maritima）低亲和性Na+吸收速率的研究

用采自英国苏克塞斯的海滨碱蓬为材料,将铺有滤纸的培养皿中发芽7天的海滨碱蓬幼苗,移栽到育苗盘中溶液培养,用调整过的Hoagland营养液培养海滨碱蓬21天,用150 mmol/L NaCl处理海滨碱蓬0 h、6 h、12 h、24 h、36 h及48 h,测定海滨碱蓬在不同处理时间下根、茎、叶的鲜重、干重及Na+含量。分析Na+吸收速率在48 h内的变化趋势。结果表明,不同处理之间海滨碱蓬Na+吸收速率差异不显著。因此,海滨碱蓬在48 h内的Na+吸收速率基本保持不变,在与Na+吸收途径有关的试验中处理时间设为48 h不仅可以节省人力物力财力,又可以取得事半功倍的良好研究目的。     

生长素和赤霉素对刺果瓜幼苗生长发育的影响

[目的]刺果瓜(Sicyo angulatus L.)是外来入侵植物,对当地生态破坏严重,幼苗期是刺果瓜生命周期相对薄弱环节,研究其幼苗的生长机理,对遏制刺果瓜的繁殖和扩展有很大的帮助。[方法]本试验以刺果瓜幼苗为研究对象,设置四个不同浓度(3 μmol/L、30 μmol/ L、300 μmol/ L、3000 μmol/ L)的生长素(IAA)、生长素抑制剂三碘苯甲酸(TIBA)、赤霉素(GA3)、赤霉素抑制剂矮壮素(CCC)、IAA+GA和TIBA+CCC对刺果瓜长出第一片真叶的幼苗进行处理,通过测量6个时间点( 1天,2天,3天,5天,7天,9天)刺果瓜幼苗的株高、根长、鲜重、干重等生理特性,探究IAA和GA对刺果瓜幼苗的影响。[结果]结果表明：300 μmol/L的IAA处理植株株高与根长长势超过其他试验组与对照组,而3000 μmol/L的TIBA植株株高与根长得到明显的抑制。3000 μmol/L的GA3处理组株高、干重值、鲜重增长速度最快,为刺果瓜的最适浓度范围;3 μmol/L GA3处理,植株增长速度最慢;300 μmol/L CCC对刺果瓜的矮化作用最好,但干重、鲜重值增加;接近3000 μmol/L的CCC矮化作用较好,对干重、鲜重几乎无促进作用,为控制刺果瓜生长的最适浓度范围。浓度为3000 μmol/ L的TIBA+CCC处理对刺果瓜幼苗的影响极为显著,在喷洒激素6 h后就可以看到刺果瓜幼苗受到抑制出现萎蔫,刺果瓜有极强的抗逆性,所以在12 h后萎蔫状态消失,虽然仍受到抑制,但仍然缓慢生长着。9 d后,浓度为3000 μmol/l的TIBA+CCC处理刺果瓜幼苗仅长高5.53 cm,而对照组长高18.70 cm。浓度为3000 μmol/l IAA+GA处理的刺果瓜幼苗长高34.47 cm。浓度为3000 μmol/l的TIBA+CCC对刺果瓜的抑制作用极其显著。[结论]通过研究刺果瓜的生长机理,使用外源激素对刺果瓜的生长有较好的抑制作用,为抵抗外源入侵植物提供了新方法。     

拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1的克隆、表达和酶学特性

本研究克隆拟南芥硫代葡糖苷酶基因TGG1,利用毕氏酵母表达。重组蛋白用镍亲和柱纯化,获得高纯度芥子酶。重组蛋白分子量78 kD,与天然TGG1分子量接近,为糖基化蛋白。TGG1信号肽在酵母中具有分泌功能,约25%芥子酶分泌到培养基中。TGG1重组蛋白具有广泛的pH适应性,最适反应温度40℃左右。其活性被低浓度维生素C激活,被高浓度维生素C抑制。用Hanes plot方法计算TGG1重组蛋白以Sinigrin为底物时,Km为65μmol/L,最大反应速率Vmax=3.28μmol.min-1.mg-1。     

离体与非离体条件对豌豆根尖有丝分裂的影响

以豌豆根尖为材料,在离体与非离体条件下分别采用低温、0.002mol/L 8-羟基喹啉、0.01g/L秋水仙素及0.01g/L秋水仙素与0.002mol/L 8-羟基喹啉混合液（V:V=1:1）进行预处理,对有丝分裂指数,中期分裂指数进行了分析。结果表明,离体条件下,0.002mol/L 8-羟基喹啉预处理的有丝分裂指数最高,比对照提高了2.15%,低温预处理的中期分裂指数最高,比对照提高了2.50%;非离体条件下,低温预处理的有丝分裂指数最高,比对照提高了2.51%,0.01g/L 秋水仙素预处理的中期分裂指数最高,比对照提高了1.59%。整体而言,豌豆有丝分裂指数和中期分裂指数是非离体条件下各种预处理均高于离体条件下各种预处理。     

胺磺灵诱导小麦根尖染色体结构的变异

用不同浓度的胺磺灵(Oryzalin)处理小麦种子,观察小麦根尖细胞染色体结构的变异情况。结果表明,胺磺灵的不同处理浓度及处理时间均能引起染色体的异常分裂,在光学显微镜下检测到桥、多极染色体、环状染色体、滞后染色体、染色体加倍、染色体凝集、微核等异常现象,以染色体加倍、微核的发生频率最高;处理时间对染色体结构变异的影响明显高于处理浓度。     

棉花GDP-甘露糖-3’,5’-异构酶基因的克隆及其表达分析

根据棉花盐胁迫相关的EST序列设计特异性引物,利用3’,5’-RACE技术,从棉花叶片中克隆出GDP-甘露糖-3’,5’-异构酶(GDP-mannose-3’,5’-epimerase,GME)基因,命名为GhGME。基因全长1 467 bp,开放阅读框1 131 bp,编码376个氨基酸,分子量为42.39 6 kDa,等电点pI=6.291。利用荧光定量Real-time RT-PCR方法对棉花根、茎、叶和3种处理下该基因的表达特性进行分析,结果表明,GhGME在根、茎中高水平表达,在叶中表达量较低。在4℃低温和200 mmol/L NaCl处理下该基因表达上调,然而用100μmol/L GA3处理则表现为下调表达。GhGME的不同表达情况暗示该基因可能在棉花抗逆反应中起着重要的作用,为该基因在棉花中抗逆功能和应用研究提供了基础。     

不同品种水稻种子萌发和幼苗生长的耐镉性评价

【研究目的】为了明确不同品种水稻种子萌发和苗期对镉胁迫反应的差异,为小麦品种耐镉性筛选和耐镉育种提供理论参考;【方法】采用室内生物测定方法,在不同浓度镉胁迫下,通过对贵州省常见的12个水稻品种的发芽率、发芽指数、活力指数、根长、芽长、根鲜重、芽鲜重、耐镉半致死浓度和耐镉致死浓度进行比较研究,并采用模糊数学隶属函数法对水稻的耐镉性进行综合评价。【结果】结果表明,随着镉胁迫浓度的增加,12个水稻品种种子萌发受到的抑制作用明显增强,发芽率、发芽指数、活力指数、根长、芽长、根鲜重、芽鲜重呈下降趋势,其中活力指数、根长、根鲜重对镉胁迫的反应更敏感;不同水稻品种间种子萌发受镉胁迫抑制的程度存在明显差异。耐镉半致死浓度为208~955 μmol/L、耐镉致死浓度940~3678 μmol/L。【结论】在供试的12个水稻品种中,II优808和川江优3号的耐镉性较强,而中优9801、宜香优101、冈优725和宜香1979的耐镉性较差,其他为耐镉性中等品种。