两株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪霍乱沙门氏菌的分离及人工共感染猪的致病性试验

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与细菌混合感染的情况,本研究采用RT-PCR方法对不同猪场采集的样品进行PRRSV检测,并进一步对PRRSV阳性样品进行细菌培养分离,经BIOLOG细菌鉴定仪鉴定,分离培养的细菌为猪霍乱沙门氏菌(S.cholersuis).利用分离获得的2株PRRSV和一株S.cholersuis进行动物回归试验,结果表明所有人工感染猪在感染后的第5d出现病毒血症;2份PRRSV分离株单独人工感染的发病率均为100％,死亡率分别为55.6％和100％;PRRSV与S.cholersuis共感染的动物死亡率均为100％.与单独的PRRSV感染组相比,PRRSV与S.cholersuis共感染后实验动物的发病和死亡时间大大缩短,进一步表明其混合感染具有协同致病性,导致发病率和死亡率的上升.     

猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染对仔猪致病性的评估

本研究通过猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强毒共感染3周龄健康仔猪来评价其致病性。试验动物随机分为3组,空白对照组(n=3头),PRRSV单独感染组(n=3头),PCV2和PRRSV共感染组(n=6头),从而比较相互之间的差异。通过临床症状、病理学变化、病原学和血清学检查,对二者混合感染仔猪的致病性进行了研究。结果表明PCV2和PRRSV共同感染能引起仔猪断奶后多系统消耗性综合征,表现为淋巴组织肿大、出血,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎,仔猪消瘦、生长缓慢等特征性病变;混合感染能加重PRRSV对仔猪引起的间质性肺炎的严重程度。混合感染可以出现支气管肺炎和明显的肝病变,淋巴结多呈界限明显的块状出血等典型病变。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的检测

2005年3月,江苏某猪场仔猪发生体温升高,呼吸困难,四肢末端、耳尖发绀,站立不稳和淋巴结出血为主要症状的疾病。4头发病仔猪的淋巴结、脾、肺脏组织用RT-PCR方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒为阳性,用猪瘟ELISA试剂盒检测猪瘟病毒野毒为阳性。结合本病的临床症状和病理剖检,病例确诊为猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟野毒的混合感染。     

猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊治

2002年4月，湖南省某大型规模猪场发生以母猪流产、死胎、弱仔及断奶仔猪发病率、死亡率高为基本特征的疫病，经流行病学调查、临床及病理剖检、实验室检验，诊断为猪圆环病毒病(PMWS)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)混合发病，采取综合防治措施后，疫情得到一定控制。现报告如下：     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征与猪伪狂犬病混合感染的诊断

为了解信阳某猪场发病仔猪死亡原因,通过流行病学调查、病理解剖、伪狂犬病毒PCR检测、PRRSV的PCR检测、PRRSV分离株ORF5基因的PCR扩增及序列分析等方法,对该猪场发病猪进行了诊断。结果表明,该猪场猪只为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV)和伪狂犬病病毒（PRV）的混合感染。     

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株对仔猪致病性的比较

为了比较最新分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异分离株SY0608和传统毒株S1对仔猪的致病性,本研究选择9头30日龄商品仔猪,随机分为2组,分别接种2株病毒,即S1株感染组(n=5头),SY0608株感染组(n=4头),接种后隔离饲养观察2周。经临床症状观察、病理学、病原学和血常规学检查,结果:SY0608毒株感染组仔猪表现明显临床症状,接种3 d后体温急剧升高至41.8℃;白细胞数急剧减少(降低了45%);病理学变化严重,肺泡膈增宽,大部分肺组织肺泡不张;而S1株感染组仔猪仅出现轻微临床症状和病理变化。SY0608毒株感染组仔猪病毒血症持续时间较S1毒株感染组长,病毒在脏器中的分布更为广泛。SY0608株感染组血清ELISA抗体水平明显高于S1株感染组。结果表明,SY0608毒株对仔猪致病作用明显强于S1毒株。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失.为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份.在各省不同时期样品中均有阳性样品检出.通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染研究进展

1病原简介 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，以母猪的繁殖障碍、哺乳仔猪的高死亡率及呼吸症状为特征的一种传染病。PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属。该病1987年在美国首先发生，随后在世界各主要养猪国家流行。按其遗传差异和抗原性差异，可分为欧洲型（A群）与美洲型（B群）。该病毒的基因组全长约为15kb，含有8个开放阅读框架（ORFs），其中ORF1a和ORF1b编码病毒非结构蛋白，ORF2-ORF7编码病毒的结构蛋白。我国1996年由郭宝清等首次报道该病，研究证明其为美洲型。PRRS在我国大部分地区均有流行，造成巨大的经济损失。     

猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病混合感染的诊断

本试验采用诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的RT-PCR技术和诊断猪伪狂犬病毒(PRV)的PCR技术,在流行病学调查、临床症状、病理剖检的基础上,对2004年5月14日广西玉林市及6月7日南宁市两大规模猪场的疫情进行诊断,结果证实为猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病混合感染.     

猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊断与防制

猪瘟 (ＨＣ)、猪繁殖与呼吸综合征 (又称蓝耳病 ,ＰＲＲＳ)是目前严重危害我国养殖业发展的两大传染性疾病。多年来 ,由于各种原因猪瘟疫情在国内始终不断。猪繁殖与呼吸综合征自 1996年首次报道[1] 在我国存在以来 ,迅速传播和蔓延到国内大部分省、市和地区 ,给我国养猪业的持续发展带来严重威胁。 2 0 0 0年 7～ 9月 ,辽宁省某规模化养猪场发生了一起以急性、热性、出血性并伴有呼吸困难、腹泻、急性死亡和母猪繁殖障碍为特征的疾病 ,多种抗菌素治疗无效。经病理剖检、病理组织学及采用免疫荧光抗体等实验室技术检查 ,确诊是由ＨＣＶ和Ｐ…     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP1对猪体免疫抑制作用

为了研究高致病性PRRSVNSP1蛋白的免疫作用,本研究将高致病性PRRSVNSP1重组腺病毒（rAd—NSP1）接种体外培养的猪肺泡细胞（PAM）,用实时荧光定量PCR和ELISA方法分别检测IFN-γ和IL-10水平,结果为rAd—NSP1接种PAM细胞72h后可显著降低细胞上清中IFN-γ的水平,而IL-10的含量显著提高。将rAd—NSP1接种无PRRSV感染的30日龄商品仔猪,分别检测其外周血液淋巴细胞增殖作用和IFN-γ与IL-10的水平,结果显示,NSP1可显著减低淋巴细胞增殖和IFN-7的表达,同时诱导产生较强的IL-10反应。采用无PRRSV感染的30日龄商品仔猪免疫猪瘟疫苗后1周接种rAd—NSP1,结果猪瘟抗体的水平明显低于wtAd组（P〈0．05）,证明高致病性PRRSVNSP1蛋白具有免疫抑制作用。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质组双向电泳方法的建立及优化

为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)蛋白质组双向电泳方法,本研究通过对HP-PRRSV蛋白样品提取、裂解、一向等电聚程序、上样量、染色试剂、显色时间等条件优化,建立了有效的HP-PRRSV蛋白质组学双向电泳方法。优化结果表明采用冻融-超声-裂解提取样品,结合2-D clean-up试剂盒纯化蛋白,按上样量为200μg,采用硝酸银染色,显色6 min,选择适宜的一向等电聚焦参数,能获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。HP-PRRSV蛋白质组双向电泳方法的建立,为开展该病毒蛋白质组和免疫蛋白质组研究奠定了基础。     

湖南高致病性猪蓝耳病隐性感染情况调查

用ELISA和RT-PCR的方法对采集自湖南省内20个规模场1007份血清和3个市级定点屠宰场50份猪肺门淋巴结进行蓝耳病血清抗体检测和高致病性猪蓝耳病病毒的检测。结果1007份血清中,蓝耳病抗体阳性率为72.9%(734/1007),高致病性猪蓝耳病病毒携毒率为3.2%(32/1007),50份肺门淋巴结病毒阳性率为16%(8/50),其中,蓝耳病免疫与非免疫猪血清其抗体阳性率相差不显著,种猪的抗体阳性率明显高于商品猪,而其病毒携毒率为0%。部分规模猪场和眼观健康的育肥猪存在高致病性猪蓝耳病病毒的隐性感染。     

对PRRSV快速分型的多重RT-PCR方法的建立与应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病性Nsp2变异株及其他相关病毒株进行敏感度和特异性试验。结果显示,所建立的多重RT-PCR对欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的RNA最小检出量分别为0.050 2、0.055 4、0.056 4ng,与CSFV、TGEV、JEV、SIV的核酸均无交叉反应。用该方法检测病料76份,结果PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的阳性率分别为0、7.89%和53.9%,未发现3型病毒间有混合感染的情况。检测结果与单一RT-PCR及RT-PCR检测试剂盒检测结果一致,高于病毒分离。     

广西猪繁殖与呼吸综合征病毒感染状况调查

采用RT-PCR技术,对2004年1月至2005年4月期间,广西13个市104个疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪场,无菌采取231头病、死猪的组织病料(肺脏、淋巴结、脾脏)进行了病毒检测。同时,对鉴定为PRRSV阳性的组织病料和猪场进行了猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,以确定猪群中PRRSV与PCV2、CSFV和PRV混合感染情况。结果从12个市的115份组织病料中检出PRRSV,病料的平均阳性率为49.78%(115/231),猪场的平均阳性率为61.54%(64/104),不同地市有一定的差异。PRRSV与PCV2、CSFV和/或PRV二重或多重混和感染的组织病料总数为53份,猪场总数为39个,混合感染的组织病料和猪场的总阳性率分别为22.94%(53/231)和37.50%(39/104)。混合感染的组织病料占PRRSV阳性组织病料的46.09%(53/115),混合感染的猪场占PRRSV阳性猪场的60.94%(39/64)。其中以PCV2和PRRSV混合感染的组织病料和猪场数最多。由此可见,PRRSV感染在广西猪场已普遍存在,与其他病毒混合感染现象逐渐趋向复杂化。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒接触感染仔猪模型的建立

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)接触感染模型,将易感仔猪与PRRSV人工感染仔猪在隔离器中同居饲养,每日观察记录体温变化和临床症状,定期采集血清和粪便样品,用荧光定量RT-PCR检测病毒血症和粪便排毒水平;对病死猪和试验结束迫杀猪进行剖检和肺脏组织病理学检查,并检测各器官病毒载量和组织分布。结果显示:接触感染仔猪出现高热和PRRS症状时间分别较人工接种猪推迟2~3d;第3天起血清检测PRRSV阳性,第10天病毒血症上升至较高水平(108.6拷贝/mL);第5天起粪便检测PRRSV阳性,第7天粪便排毒量上升至较高水平(103.9拷贝/0.1g);3头接触感染仔猪分别于同居后第12天和第13天死亡,较人工接种猪推迟1~2d,病死猪的主要器官病毒载量以及剖检和肺脏显微病理变化与人工接种病死猪相似。这些结果表明,本研究建立的接触感染仔猪模型可用于PRRS疫苗免疫效果评价。     

Concurrent highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection accelerates Haemophilus parasuis infection in conventional pigs

This study was aimed at determining the effect of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV) on Haemophilus parasuis (HPS) in co-infection. A quantitative real-time PCR targeting infB gene, which is conserved among different HPS serotypes, was developed to improve the accuracy and speed of the detection of HPS. A total of 32 four-week-old conventional pigs were distributed randomly into four groups: pigs in group I were intranasally infected with HP-PRRSV first, and were then intraperitoneally inoculated with HPS on 5 days after HP-PRRSV infection; pigs in group II were intranasally inoculated with HP-PRRSV alone; pigs in group III were intraperitoneally inoculated with HPS alone; pigs in group IV were intraperitoneally inoculated with physiological saline. The amount of HPS in serum on 0, 3, 6, 9 and 12 days post-inoculation (dpi) with HPS were detected using the established quantitative real-time PCR. Clinical signs, pathological changes and histopathological lesions were observed. The amount of HPS in serum reached 10(6)copies/μl at 3 dpi with HPS in pigs of group I, while it arrived 10(5.7)copies/μl at 9 dpi with HPS in pigs of group III. The HPS loads in hearts and lungs were much higher than in other tissues. The study showed that HP-PRRSV was able to accelerate HPS infection and loads.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征的病原体,本文对PRRSV的分子生物学研究进展进行了综述,主要包括PRRSV的基因组结构、病毒蛋白及其功能、抗原变异等,旨在为诊断技术、免疫机理研究、疫苗设计与疫病防制提供借鉴.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的诊断及其分子特点

采用流行病学调查、临床症状观察、病理学检查、病毒分离、分离毒株测序以及遗传演化分析的方法,对北京及其周边地区4个猪场剖检的4头猪进行分析。结果:流行病学和临床症状表现为急性高热性传染病;病理学观察为非化脓性脑炎和间质性肺炎等多器官严重的病理变化;RT-PCR和病毒分离确定该疫情的主要病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。与典型PRRSV感染不同的是:成年猪感染率达50%以上,病死率达80%以上;PRRSV分离株全基因序列分析表明属于PRRSV北美洲型,特别是PRRSV NSP2不连续缺失30个氨基酸,说明此次流行的PRRSV毒株可能为高致病性毒株。