用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备研究进展

自然界中真菌种类很多,一些对人类有益,然而有很多会对人及动植物致病.对真菌的检测鉴定在医学、植物检疫以及真菌分类学研究方面具有重要的意义.PCR检测是目前真菌鉴定的常规检测手段,用于PCR检测的真菌基因组DNA制备是相关领域研究热点,对用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备方法进行综述.     

草菇染色体核型的鉴定

利用等高锁状同源电场凝胶电泳（CHEF）,获得草菇的电泳核型.综合两组脉冲电泳的电泳条件、溴化乙锭染色以及DNA杂交分析结果,草菇染色体DNA至少可分为9个谱带.这一结果和以前用光学显微镜观察草菇的染色体数目的结果相一致.以混浊酿酒酵母和粟酒裂殖酵母等的相对迁移率为基准,草菇染色体长度估计在1.32～5.4Mb之间,染色体组总长约25Mb.     

从多糖丰富的样品中制备食用真菌DNA

本文报道了一种从多糖丰富的食用真菌样品中快速、简便制备高分子量总DNA的改进方法。通过CTAB在不同的氯化钠浓度下选择沉淀DNA,除去多糖污染,苯酚、氯仿抽提,异丙醇沉淀,就可获得适宜多种分子生物学研究的食用菌基因纽DNA。本方法也适合小规模同时制备多个样品。另外,采用本方法制备的真菌DNA,经限制酶HaeⅢ酶切后在琼脂糖凝胶上能显示出菌株特异性的DNA带谱,可用于食用菌的遗传育种、菌株鉴定等研究。     

洋葱染色体核型的FISH分析

 挑选洋葱(Allium cepa L．) (2n=2x=16，CC)有丝分裂中期细胞，以洋葱卫星DNA序列(AC—SAT-DNA)为探针，DIG-1 1-dUTP为标记物，用荧光原位杂交(FISH)方法观察其在染色体上的定位，并进行洋葱的核型分析。6号染色体为近端部着丝点染色体，在其长臂末端有一个卫星DNA序列的主要位点。其余每条染色体在其长、短臂的末端都各具有一个主要位点。差异表现在各染色体上卫星DNA序列的次要位点分布不同。根据洋葱8对染色体各自具有的独特的卫星DNA分布位点，可将洋葱8对染色体全部分开。以此为基础，构建了洋葱卫星DNA在染色体上分布的模式图。     

几种菊科蔬菜种子的核型研究

选取菊科蔬菜中5个不同类型的栽培品种为试材,利用解剖镜对其种子形态进行观察,同时采用常规压片法对其核型进行分析和比较。结果表明：纯香油麦菜的核型公式为2n=2x=18=10 m+8 sm,核型分类属于2A型|大速生的核型公式为2n=2x=18=8 m+10 sm,核型分类属于2A型|八甲唛和花芽甜唛菜的核型公式均为2n=2x=18=4 m+14 sm,核型分类均属于3A型|花叶苦苣的核型公式为2n= 2x=18=16 m+ 2 sm,核型分类属于1A型。在种子形态上,大速生和纯香油麦菜的种子形态相似,八甲唛和花芽甜唛菜的种子形态相似,花叶苦苣的种子形态特殊。根据核型分析和种子形态观察的结果,对上述几种菊科蔬菜作物的亲缘关系及遗传多样性进行了初步探讨。     

新疆2种石竹属植物的染色体核型分析

应用改进的染色体制片方法研究新疆2种石竹属植物的核型,探讨其核型差异。结果表明:多分枝石竹的细胞染色体数为2n=30,其中中部着丝点染色体(m)为11对,近中部着丝点染色体(sm)为4对,核型为2A型,核型公式为2n=2x=30=22m+8sm;准噶尔石竹的细胞染色体数为2n=30,其中中部着丝点染色体(m)为9对,近中部着丝点染色体(sm)为6对,核型为2A型,核型公式为2n=2x=28=18m+12sm。2种石竹属植物染色体相对长度、m、sm染色体的数量组成、核型不对称系数(AS.K%)及最长与最短染色体的比值均存在明显差异。     

葡萄属植物染色体DNA的提取,纯化及RFLP鉴定

利用Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ａ．Ｃｏｕｃｈ ａｎｄ Ｐａｕｌ Ｊ．Ｆｒｉｔｚ的改良方法提取葡萄嫩叶染色体ＤＮＡ，并进行ＲＦＬＰ分析。结果表明，该方法提取的ＤＮＡ均未降解；以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ层析柱纯后后可进行ＲＦＬＰ分析．核糖体ｒＤＮＡ的ＰＶｖｃ－Ａ片段制备的探针与ＨｉｎｄⅢ酶组合，使所有供试样品都显示多态性。     

15种榛子种质的染色体核型分析

 采用普通压片法,以榛子叶芽为试材对其15个种质资源的核型进行了研究,结果表明榛子各种质染色体均为二倍体;核型可分为三种类型：2n=2x=22=22m、2n=2x=22=20m+2sm和2n=2x=22=16m+6sm;没有发现随体;所有种质染色体绝对长度平均值为1.50 μm,属小染色体;除欧榛和7#为1A型, B-23为2B型外,其余种质皆为1B型。种质间核型具有很大的相似性。     

泰山几种大型野生真菌的分析与评价

对采自泰山的8种野生真菌进行分类、鉴定,分析评价,提高人们对野生菌的认识和了解,对泰山野生菌资源保护与开发提出了建议。     

几种三华李基因组DNA提取方法的比较研究

以CTAB法、改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良陈大明法、高盐低pH值法、SDSCTAB法和氯化苄法等8种目前常用植物基因组DNA提取方法为基础,通过采用异丙醇和无水乙醇进行2次常温短暂沉淀、提高离心力等多种去杂质措施进行适当改进,对它们用于三华李基因组DNA提取的效果进行比较。结果表明,8种方法中以CTAB法最优,改良CTAB法其次,高盐低pH值法稍逊,其他5种方法则不适合于三华李基因组DNA的提取;CTAB法不仅适合于早食李不同季节(4月、8月和12月)和不同成熟度叶(未展开嫩叶、展开嫩叶、成熟叶和老叶)基因组DNA的提取,也适合于华蜜大蜜李、白脆鸡麻李、大鸡麻李、中蜜李、小蜜李、串珠李、从化三华李、红线李、香蕉李、中熟李和软枝三华李等11个三华李品种嫩叶基因组DNA提取。     

扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较

为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288 bp的特异目的基因,检测其灵敏性.结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少.因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL.     

不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.