不同酶促反应条件及热处理对木聚糖酶活的影响

本试验研究了还原糖法不同酶促反应时间、温度和ｐＨ值及干热、温热处理等因素对木聚糖酶活的影响。结果表明：大多数酶制产品获得最高木聚糖酶的促反应条件是１０ｍｉｎ、６０℃和ｐＨ６．３５。酶活测定时各酶制剂具有较宽的温度适应范围（３５￣７５℃）和较宽的ｐＨ值适应范围（ｐＨ４．５￣７．４）。各酶制剂在较高温度（６５￣９５℃）下干热处理１０ｍｉｎ，其酶活损失较少，而在８５℃温热处理时间愈长，其酶活损失愈多。     

饲用β-葡聚糖酶体外评判体系的研究

用蒸馏水于4℃对浙江酶,Avizyme-1500酶制剂抽提12h,在不同温度和不同pH条件下对两种酶制剂中的β－葡聚糖酶活力进行测定,结果表明：两种酶制剂中的β－葡聚糖酶在50－60℃,pH5.0-7.0时有较高的活力。同时对两种酶制剂进行高温处理,结果表明：85℃保温10、20、30min。浙江酶制剂中的β－葡聚糖酶分别失活97．72％、98．55％和完全失活,Avizyme-1500酶制中的β－葡聚糖酶失活97．58％和完全失活。     

纤维素酶CMC糖化力测定方法的改进

本文研究和分析了３,５—二硝基水杨酸（ＤＮＳ）法测定纤维素酶羧纤维素（ＣＭＣ）糖化力的实验条件,如：波长、温度、ｐＨ、酶促反应时间、ＤＮＳ显色时间等。实验表明：在５０℃、ｐＨ４６条件下酶促反应时间５ｍｉｎ,ＤＮＳ显色５ｍｉｎ,于４９０ｎｍ处测定ＯＤ值比较适宜,从而简化了实验操作,便于在生产中应用。     

体外酶解法评定酶制剂的应用研究

试验目的是利用体外酶解法快速评定不同酶制剂在小麦型日粮中的应用效果。针对小麦的营养特性,实验选用酶制剂1#(E1)、酶制剂2#(E2)、木聚糖酶、欧蒂酶等4种不同酶制剂(均以木聚糖酶和β-葡聚糖酶为主),测定其木聚糖酶和β-葡聚糖酶的酶活,然后在体外环境下模拟猪胃肠道消化环境,并使不同酶制剂与小麦-浓缩料型日粮在其中充分反应,然后利用DNS比色法测定反应物中还原糖总量(实验以葡萄糖计)来评定酶制剂的应用效果。实验结果表明,木聚糖酶和β-葡聚糖酶含量相对较高的E1反而酶解反应效果不明显,几乎检不出还原糖;相反,4种酶制剂中木聚糖酶和β-葡聚糖酶含量相对较低的欧蒂酶的应用效果则最好。结果表明,检测时酶活高的酶制剂其体外应用效果并不一定好,这可能与酶制剂的耐酸能力有关,在一定条件下能为使用者提供简便的检测依据。由于实际应用中酶制剂的影响因素很多,这次实验结果还需通过饲养试验进一步验证。     

成果展示

浙江湖州王景宝集团有限公司与浙江大学共同开发了王景宝牌饲用复合酶制剂 ,已被国家经贸委列为国家级重点新产品。该产品成功地开发了β-葡聚糖酶和木聚糖酶 ,在国内首次对β-葡聚糖酶和木聚糖酶的基因进行了克隆和测序 ,填补了国内产业化生产空白。产品系统地研究探明了β-葡聚糖酶和木聚糖酶的分离纯化技术和生化特性 ;通过稳定化技术处理 ,酶制剂ＣＸＣ在制粒温度下（８５℃）、胃酸（ｐＨ值为２．５）和胃蛋白酶（１ｍｇ／ｍｌ）作用下 ,酶活率达到９０ %以上 ,在抗热抗胃酸和抗胃消化酶上达到了国际先进水平。现已形成年产２０００ｔ…     

植酸酶对大豆分离蛋白中植酸的酶解研究

在不同的温度、ｐＨ 值、酶量的情况下，用目前常用的一种植酸酶在体外酶解大豆分离蛋白中的植酸， 采用间接测铁法测定酶解前后样本中植酸的含量， 从而得出该植酸酶在不同条件下酶解植酸的活性。在温度为５５℃、ｐＨ 值为２．５ 或５ ．５ 的条件下最强。在此条件下，当酶使用量为１ ５００Ｕ／ｋｇ ，酶解时间为４５ｍｉｎ 时，能将大豆分离蛋白中的植酸分解率达到８０．８４ ％ 。从中揭示了所使用的植酸酶在不同条件下的酶活规律，为有效使用该植酸酶于不同的动物饲料提供了依据。     

耐高温β-葡聚糖酶产生菌株的酶学性质的研究

从云南安宁温泉周围土壤中筛选到一株热稳定性能较好的β-葡聚糖酶产生菌W-9,并对其发酵条件及酶学特性进行初步研究。该菌株发酵72h在pH6.0,70℃条件下酶活性为82.64U/mL。对W-9所产β-葡聚糖酶的酶学性质进行研究,结果显示,β-葡聚糖酶的最适反应pH为6.0,最适反应温度为70℃,70℃条件下保温时,酶活基本稳定。     

温度对鲤鱼复合酶制剂中3种酶活性的影响

试验研究了温度对鲤鱼复合酶制剂中蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶3种酶活性的影响。结果表明,蛋白酶、淀粉酶和β-葡聚糖酶的最适pH分别为3.0、6.0和5.0;粗酶液在4℃时放置72h,3种酶出现活性峰值;在4、25和40℃时保存10、20和30d,复合酶制剂中蛋白酶和淀粉酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而降低,酶活损失率分别为1.91%~36.91%和5.17%~19.57%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。相反,β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和保存时间的延长而升高,酶活损失率为10.19%~48.46%,酶活受温度及时间的影响显著。在30d内,复合酶制剂中各种酶对低温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>蛋白酶>β-葡聚糖酶;在60、80、100和120℃时处理5、10和15min,蛋白酶和淀粉酶的最大活性分别出现在100和80℃,最大酶活分别为原酶活的78.95%~82.99%和85.72%~91.89%;β-葡聚糖酶的活性随温度的升高和处理时间的延长而降低,最大酶活分别为原酶活的82.45%~90.73%,酶活受温度的影响显著,受时间的影响不显著。在15min内,复合酶制剂中各种酶耐干热高温的稳定性由强至弱依次为淀粉酶>β-葡聚糖酶>蛋白酶。     

黑曲雪固傩发酵饲用复合酶酶系分新

本文分析了黑曲霉固态发酵获得的复合酶在不同pH值条件下各组分酶活的表现活力、耐酸、耐胃液稳定性以及对无淀粉麦麸的降解作用。结果发现,该复合酶中含有木聚糖酶、β-葡聚糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶和CMCase等多种酶活。在pH4．0～7．0,木聚糖酶、β－葡聚糖酶、甘露聚糖酶和CMCase均有很好的表现活力;在pH2．5－4．0,果胶酶有较好的表现活力。在生长猪的胃液（pH2．8）中40℃保温6h,β－葡聚糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶和CMCase的酶活损失均低于30％。在40℃和pH5．5条件下保温8h,可以降解麦麸（无淀粉）18％的干物质。与传统的动物饲养试验相比,这种分析评判饲料酶的方法具有简便、快速和客观等优点。     

植酸酶的研制与开发—菌种筛选与酶活的提高

对植酸酶产生菌进行了分离纯化；采用固体培养法生产植酸酶及对酶的性质进行了研究。研究结果表明：以麸皮：米糠＝４：６为主要培养基成分，添加１％（ＮＨ４）２ＳＯ４，０．３％ＭｇＳＯ４。３０℃恒温培养４ｄ后，其酶活可达４５８．７Ｕ。用含ＣａＣｌ２。２％的ｐＨ５．０的醋酸缓冲液抽提效果好。酶的最适反应温度为３５℃。     

抽提条件对酶制剂中β-葡聚糖酶活力的影响

β-葡聚糖酶可以将大麦β-葡聚糖分解成较小聚合物，将β-葡聚糖酶添加到饲料中可以减少大麦β-葡聚糖的抗营养作用，增加单胃动物对养分的吸收率，提高以大麦为主的饲料的利用率。影响酶发挥作用的因素有很多，如温度、pH值、激活剂、抑制剂等。另外，酶制剂生产厂家为提高酶制剂的稳定性常使用载体将酶进行吸附固定，这个过程对稳定性也有影响。在酶制剂检测过程中，如何合理准确地将酶制剂中的酶释放出来是一个关键步骤，因此针对此问题进行了一些研究，现报道如下。     

5种复合酶对小麦麸酶解效果的比较

笔者以国家标准及农业行业标准方法对5种小麦型复合酶中主要酶系进行了活力测定,并采用实验室体外模拟消化法对其降解小麦麸的效果进行了评定,旨在说明酶活与实际应用效果的关系,为评价和选择酶制剂提供参考。经检测,C样品的木聚糖酶、纤维素酶和β-葡聚糖酶的酶活最高,而A样品的木聚糖酶、纤维素酶和β-葡聚糖酶的酶活最低,其他3个样品的纤维素酶活力基本一致,木聚糖酶和β-葡聚糖酶的酶活有一定的差别。将5种复合酶以相同的添加量作用于小麦麸进行体外模拟消化试验,检测反应后生成还原糖的量发现,其对麸皮的酶解能力:E>C>B>D>A。     

DNS法测定饲用β-葡聚糖酶活力

１材料与方法１．１酶制剂　由浙江农科院微生物研究所提供。１．２主要化学试剂β－葡聚糖（山毛榉）：ＢｉｏｃｏｎＢｉｏｃｈｅｍ．ＬＴＤ产品;葡萄糖（ＡＲ）;乙酸钠（ＡＲ）;３,５－二硝基水杨酸（ＡＲ）;酒石酸钾钠（ＡＲ）;氢氧化钠（ＡＲ）：冰乙酸（ＡＲ）;无水乙醇（ＡＲ）。１．３主要仪器７２１分光光度计、恒浴箱、控温磁力搅拌器、ＫＳ－２型多管快速混匀器、ｐＨｓ－２型数字ｐＨ计、秒表。１．４试剂配制１．４．１１．０％β－葡聚糖溶液;称１．０ｇβ－葡聚糖,用１０ｍＬ无水乙醇湿润,加８０ｍＬ蒸馏水,置于磁…     

饲用酶制剂中木聚糖酶酶学性质的研究

木聚糖是一种广泛存在于植物中的半纤维素,它是由β-1,4糖苷键连接而成的木糖聚合物。为了掌握常用饲用酶制剂中木聚糖酶的酶学性质,对某商品复合酶制剂中所含的木聚糖酶进行了热稳定性、最适pH值、最适反应温度、底物征对性、不同金属离子对其酶活的影响、反应进程曲线及其Km值等的测定,以其对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有一定的指导意义。1材料与方法1.1实验仪器精密pH计:±0.01pH;电子天平:d=1mg;紫外分光光度计UV-1601;恒温水浴锅;蠕动泵;紫外检测器;分布收集器;Φ2.6cm×100cm色谱柱。1.2实验材料某商品酶制剂。1.3酶活…     

纤维素酶活力测定条件研究

用DNS法测定纤维素酶活力,分析测定条件对测定结果的影响。在不同的条件下测定酶活力会得到不同的纤维素酶活力测定值。其中,酶液用量、酶解反应时间、温度对测定结果影响较大,酶液的稀释度、DNS显色时间对测定结果也有一定影响。测定纤维素酶活力的最适条件为:酶解反应时间为30min,最适温度40℃,DNS用量2.5ml,显色时间5min。     

硫色曲霉固态发酵饲用复合酶酶系分析

该文分析了硫色曲霉固态发酵获得的复合酶在不同pH值条件下,各组分酶活的表现活力、耐生长猪胃酸稳定性以及对麦麸和豆皮的降解作用。结果显示,该复合酶中含有木聚糖酶、β-葡聚糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶和纤维素酶(CMCase)等多种酶。在pH值4.0～7.0之间,木聚糖酶、β-葡聚糖酶、甘露聚糖酶和CMCase均有很好的表现活力;在pH值2.5～4.0之间,果胶酶有较好的表现活力。在生长猪的胃液(pH2.8)中40℃保温6h,β-葡聚糖酶、果胶酶、甘露聚糖酶和CMCase的酶活损失都不超过30%。在40℃和pH5.5条件下保温8h,可以降解麦麸(无淀粉)和豆皮18%的干物质。与传统的动物饲养试验相比,这种分析评判饲料酶的方法具有简便、快速和客观等优点。     

抽提条件对饲料酶制剂中纤维素Cx酶活力的影响

<正>纤维素是高等植物细胞壁的主要成分,它广泛存在于自然界中,是地球上最大量的可再生性碳源物质。纤维素酶是一种多组分复合酶,一般认为它包括3种成分:内切β-1,4-葡聚糖酶,即内切酶,也称Cx酶;外切β-1,4-葡聚糖酶,也称C1酶、外切酶;β-1,4-葡萄糖酶即纤维二糖酶。纤维素的降解必须依靠3种组分的协同作用才能完成。酶发挥作用主要取决于其活力的大小,而多种因素可影响酶的活力,如温度、pH值、激活剂、抑制剂等。另外,酶制剂生产厂家为提高酶制剂的稳定性,常使用     

pH值对植酸酶酶活的影响及其在猪、鸡消化道中的分析

通过测定在不同ｐＨ值条件下两种植酸酶的活性,发现ｐＨ值对植酸酶活力有较大影响。在鸡嗉囊的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活都是１００％,而在动物真胃的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活分别是７７．８２％和４９．６１％。     

β-甘露聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对黑曲霉产的β-甘露聚糖酶的酶学性质进行了研究。研究结果表明：该酶的最适反应温度为65℃;具有较强的耐热性,在温度为80℃和90℃处理10min仍有超过90％的活性;最适pH值为4．0,在pH值2．0—7．0的范围内,相对酶活保持在80％以上。该酶在最适反应温度、稳定性能等方面表现优良,适于作饲用添加剂。     

西藏牦牛瘤胃源产纤维素酶菌株筛选鉴定及产酶条件探究

为提高纤维素的利用率,寻找到安全性能好、产酶效率高的菌株添加剂添加到饲料中,以提升动物对饲料的利用率,从牦牛瘤胃中分离高产纤维素酶菌株,进行16S rDNA的鉴定,并探究其在不同温度、pH、接种量和发酵阶段产内切型-β-葡聚糖酶、外切型-β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶的特性。结果表明：通过形态学鉴定以及16S rDNA基因序列测定,最终确定高产菌株M1为克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）。M1产内切型-β-葡聚糖酶活性大于外切型-β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶;M1在35℃、pH为7、接种量为2%的条件下产内切型-β-葡聚糖酶的效率最高,在30℃、pH为6、接种量为2%的条件下产外切型-β-葡聚糖酶的效率最高,在30℃、pH为6、接种量为1%条件下产β-葡萄糖苷酶的效率最高;在M1生长过程中,先产生了β-葡萄糖苷酶,其次是外切型-β-葡聚糖酶、内切型-β-葡聚糖酶,并且外切酶活性远远大于内切酶和β-葡萄糖苷酶活性。