鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)活疫苗蚀斑计数的影响因素

目前我国生产的鸡马立克氏病疫苗的效力检验是通过测定产品的病毒含量（蚀斑形成单位）来确定的。然而在测定疫苗病毒含量的过程中，有诸多因素影响测定结果。本文仅就影响疫苗蚀斑计数的因素，通过对不同培养时间的细胞、细胞密度、溶液的pH值、不同时间配置的营养液、培养温度、覆盖琼脂量、     

新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立

本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒（NDV）DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索,结果显示相较于DMEM培养基,DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长,DF-1细胞以3×10⁵/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果,吸附病毒后1.5 h覆盖第1层琼脂,48 h后覆盖第2层琼脂能获得最佳的蚀斑形成效果。通过对蚀斑纯化株F和HN基因测序分析,结果表明蚀斑纯化后无任何变异。通过此方法可在1个星期之内获得稳定的纯化毒株,方法简单、可重复性强、纯化效率高。     

新城疫蚀斑克隆毒间抗原关系的研究

用蚀斑克隆化技术对分离自黑龙江省不同地区免疫鸡群的新城疫病毒HN_7和HN_2株进行蚀斑纯化,获得了各自性状较为一致的三种蚀斑克隆毒。对La Sota疫苗毒采用促蚀斑形成方法获得了性状稳定、一致的混浊小蚀斑。对三种克隆毒之间以及和La Sota疫苗毒间做交叉蚀斑减数中和试验,探讨各病毒之间的抗原关系.结果表明.不同毒株的蚀斑类型及比例不同;来源于不同毒株的各蚀斑克隆毒间存在着抗原差异,来源于同一毒株的不同蚀斑克隆毒之间无明显抗原差异:三种克隆毒和La Sota疫苗毒之间存在着程度不同的抗原差异。     

狂犬病病毒不同毒株蚀斑特性的动态学研究

应用已建立了狂犬病病毒的蚀斑方法，对狂犬病病毒的强毒株鹿８２０２株，弱毒株Ｆｌｕｒｙ及无毒变异ＳＲＶ９的蚀斑特性做了比较研究，发现不同的狂病病毒株其蚀斑特性存在一定的差异。     

犬瘟热病毒的蚀斑克隆试验

对血清、胰酶以及染色时间等可能影响犬瘟热病毒蚀斑形成的条件进行了摸索。结果发现,对必须同步接毒的CDV小熊猫（LP）株来讲,其形成蚀斑的最佳条件是：同步接毒10h后,加入血清含量的2%的无酚红的DMEM营养琼脂,第5d时,加入1/5体积的胰酶含量为1/8000的含中性红的DMEM营养琼脂染色,于第6d时,便可形成蚀斑。挑选不同大小的蚀斑,克隆3次后,获得了蚀斑直径为0.4～0.6,0.6～0.8及0.7～0.9mm的克隆株各一个。     

影响鸡马立克氏病HVT活疫苗蚀斑测定因素

在鸡马立克氏病 HVT活疫苗蚀斑测定中 ,通过对不同的稀释液、吸附条件、维持液残留量、培养液存放时间及计数时机等进行蚀斑计数的比较试验 ,分析了影响蚀斑测定的因素 ,为准确的进行蚀斑测定提供了依据     

新城疫鹅胚化La Sota克隆毒株的生物学特性研究

用蚀斑克隆技术证明,新城疫鹅胚化 La Sota 疫苗株系由大、中、小三种蚀斑构成的异质性(?)毒群体.经鹅胚成纤维细胞(GFE)4～5次克隆后,获得了三个克隆株(LG LM 和 LS),在鹅胚及 GEF 上多次传代后,LM和 LS 克隆株的蚀斑形态保持稳定,而 LG 克隆株则出现大小不同的蚀斑.经最小致死量(MLD)、平均致死时间(MDT)等试验表明,此三株之间存在毒力差异.通过血凝素解脱速率等试验还表明,这三个克隆株在生物学特性上也有差异.     

不同稀释液对马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗效力的影响

通过不同稀释液对鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗进行稀释后,按照<中华人民共和国兽药典>第三部(以下简称<药典>)方法用营养琼脂覆盖,37℃培养5～7d,进行蚀斑计数,最后通过对各稀释液所稀释疫苗病毒含量检测的分析,得出不同稀释液对疫苗效力的影响.     

H5N1亚型禽流感病毒鸡胚分离株蚀斑克隆及生物学特性比较

建立了H5N1亚型禽流感病毒（AIV）蚀斑克隆方法，用不加中性红的营养琼脂为覆盖层，在倒置显微镜下挑斑，对3株H5N1亚型AIV鸡胚分离毒株进行了蚀斑克隆纯化，从同一鸡胚分离毒株中纯化得到了蚀斑大小和形态均存在显著差异的毒株，共获得13株蚀斑克隆纯化株。研究结果表明，当小牛血清浓度为2%时，加入终浓度50 μg/ml的胰酶可明显促进和刺激蚀斑的形成，蚀斑的直径和PFU/ml均有显著的增加。通过TCID₅₀、EID₅₀和LD₅₀测定发现，来自同一鸡胚分离株的不同蚀斑克隆纯化株中，蚀斑大、毒力强的克隆毒株占优势，而且蚀斑较大的，其毒力也较强。对得到的13株蚀斑克隆毒株的全基因组各片段序列分析表明，蚀斑克隆纯化株在HA蛋白裂解位点附近的氨基酸序列均符合高致病性通报性禽流感病毒的分子特征。     

狂犬病病毒不同毒株蚀斑特性的动态学研究

应用已建立的狂犬病病毒的蚀斑方法,对狂犬病病毒的强毒株鹿8202株、弱每株Flury及无毒变异株SRV_9的蚀斑特性做了比较研究,发现不同的狂犬病病毒株其蚀斑特性存在一定的差异。     

犬腺病毒SY-45株不同大小蚀斑特性研究

应用蚀斑方法将SY－45毒株经过3次蚀斑纯化直到蚀斑大小相对稳定。从不同大小的蚀斑中挑选出三种蚀斑，大斑直径约3mm(简称LP）、中斑约2mm(简称MP）、小斑约1mm(简称SP）。分别在MDCK细胞上增殖并进行了三种不同大小斑毒对犬的毒力、免疫原性和在MDCK细胞上产毒量比较，以筛选最佳的疫苗株，试验结果表明用不同大小蚀斑病毒大剂量人工感染易感犬后，所有的试验犬临床症状和病理解剖学和病理组织学表现均正常；对挑选的4窝CAV HI抗体效价小于等于1：2的健康幼犬进行免疫试验，测定血清的中和抗体效价和血凝抑制抗体效价，结果表明：大斑毒的免疫原性要稍高于中斑毒，而明显高于小斑毒；不同大小蚀斑毒在MDKC细胞上产毒量差异很大，大斑毒可达10^7TCID50／mL、小斑毒达10^6TCID50／ml、小斑毒达10^4.5TCID^50/mL。综合所有试验结果表明：大斑毒株具有产毒量高、安全性好、免疫原性强的优点，是较为理想的疫苗株。     

影响鸡马立克氏病HTV活疫苗蚀斑测定因素

在鸡马立克氏病ＨＶＴ活疫苗蚀斑测定中,通过对不同的稀释液、吸附条件、维持液残留量、培养液存放时间及计数时机等进行蚀斑计数的比较试验,分析了影响斑测定的因素,为准确的进行蚀斑测定提供了依据。     

新城疫病毒分离株的蚀斑纯化及影响蚀斑形成的主要因素

从西北地区1979～1999年发生新城疫的鸡群中分离和收集的15株新城疫病毒(NDV)，经蚀斑纯化，共得到11个克隆毒株；对其进行了蚀斑形成能力的测定，证明蚀斑形成能力与毒力成正比；探讨了温度对蚀斑形成能力的影响，证明NDV蚀斑形成能力在41C比37C强，表现为蚀斑出现早、蚀斑大、蚀斑形成单位(PFU)高，同时在41C时细胞生长状况良好，不易污染，故认为在41C进行NDV的蚀斑纯化值得推荐。     

猪瘟病毒的直接蚀斑检定技术

用几株猪肾传代细胞,在覆盖琼脂下获得几株有代表性的猪瘟病毒形成直接蚀斑(direet plaque formation)。用间接光观察,病毒感染细胞出现模糊的蚀斑,用中性红染色后,则现白色蚀斑,使用直接蚀斑技术检定猪瘟病毒,迅速而简便,所得病毒滴度和使用免疫萤光灶分析术所测结果是—致的。     

高病毒含量PEDV的纯化及培养条件的优化研究

为了提高猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的病毒含量并优化PEDV培养条件,试验采用病毒蚀斑纯化的方法,连续进行3代蚀斑纯化和增殖培养PEDV,并对纯化增殖的病毒进行PCR鉴定。以第3代增殖的PEDV为种毒,探讨PEDV在Vero细胞上增殖的最佳接毒剂量、吸附时间和弃液比例等。结果表明：经3代蚀斑纯化后,PEDV S基因序列未发生突变,并且PEDV含量比纯化前提高约35倍。PEDV在Vero细胞上的最佳接毒比例为0.01%,最佳吸附时间为2 h,最佳弃液比例为1/2,应用最佳培养条件培养的PEDV含量最高可达1×10^7.50 TCID₅₀/mL。说明通过病毒蚀斑纯化的方法可以培养高病毒含量的PEDV,为高抗原含量猪流行性腹泻疫苗的生产提供良好的种毒资源。     

兔轮状病毒蚀斑特性研究

从哈尔宾自然腹泻幼兔的粪样中，成功地分离出一株兔轮状病毒（ＬａＲＶ，Ｎ５），经（ＭＡ１０４）细胞适应继代２４代，２４代细胞培养养蚀病斑滴度为１０＾９ＰＦｕ／ｍｌ蚀斑试验培养瓶在３７℃培养５天，形成直径为１～５ｍｍ的圆形蚀斑。     

马立克疫苗添加“澳赛康”及稀释液后对蚀斑生长的影响试验

为评价澳赛康(注射用头孢噻呋钠)及其稀释液对马立克疫苗效力的影响,以马立克疫苗蚀斑生成单位为指标,在体外通过马立克氏活疫苗与澳赛康及其稀释液分别作用0、30、60、90min等4个时间点后接种到鸡胚成纤维细胞中孵育,测定疫苗蚀斑形成单位的变化。结果表明,添加药物后的马立克疫苗在各个时间点蚀斑数与空白组之间没有显著性差异(P>0.05),澳赛康及其稀释液对疫苗效力无影响。本试验为澳赛康及其稀释液和马立克疫苗在临床上的联用提供了实际依据。     

几株新城疫分离毒蚀斑形成及其克隆毒某些特性的研究

对分离白黑龙江省内不同地区的7株新城疫强毒进行了蚀斑亚群测定,并对运用蚀斑克隆化技术制成的蚀斑克隆毒的特性进行了比较。结果表明,5株形成中小清亮蚀斑;1株只形成小的清亮蚀斑;另一株除形成中小清亮蚀斑外,还形成小的红蚀斑。对蚀斑克隆毒毒力测定结果表明,各中清蚀斑克隆毒的毒力均大于同源的小清蚀斑克隆毒,而小红蚀斑克隆毒的毒力明显高于同源的其它蚀斑克隆毒和母毒株。这几林蚀斑克隆毒在血凝特性上也有所区别。     

不同稀释液对鸡马立克氏病活疫苗蚀斑数的影响试验

选用几种不同稀释液稀释疫苗后放置不同时间进行蚀斑计数,统计病毒存活率,确定一种有效的马立克疫苗稀释液。     

MDV Z_4和HVT Fc_(126)在不同遗传抵抗力的CEF上的生长特性及研究

马立克氏病(MD)疫苗 Z_4和 HVT Fe-126病毒在对MD 病毒(MDV)有高度易感性的 P 系鸡、有高度抵抗力的 O 系鸡和普通非免疫鸡的鸡胚成纤维细胞(CEF)上形成的病毒蚀斑大小和数量均无显著差异.说明,CEF 对MDV 的易感性不受遗传因素的影响.MDV 血清2型 Z_4毒株和血清3型 HVT Fc_(126)株在 CEF 上的生长特性比较表明,Z_4毒株生长速度慢,蚀斑小,培养10天蚀斑大小为0.23mm~2,相当于 Fc_(126)毒株培养第4天时的水平.