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采用受孕12.5 d、13.5 d、14.5 d的ICR品系小鼠的胚胎制备原代成纤维细胞,在相同条件下观察不同胚龄胚胎成纤维细胞的增殖情况。结果表明受孕13.5 d胚胎为分离小鼠胚胎原代成纤维细胞的最适胚龄。分离出的原代成纤维细胞在37 ℃时,用0.25%胰蛋白酶0.02%EDTA消化组织的时间为3 min,可在培养3 d后传代。F1代和F2代较F3代成纤维细胞分泌的抑制干细胞分化因子LIF的量要多。小鼠胚胎成纤维细胞冻存于-135 ℃~-150 ℃10 个月,复苏后能正常传代。丝裂霉素C抑制胚胎成纤维细胞增殖的最适浓度为10μg/105细胞,作用时间为2.5 h,丝裂霉素C处理过的胚胎成纤维细胞可以在12 d内即不增殖也不死亡,但在6 d内使用效果最佳。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2014,(11)
为了研究在冷冻液中添加硫代甘油(MTG)对小鼠冷冻精液解冻后受精能力的影响,试验采用在精液冷冻液中添加不同浓度MTG(160,320,480,640μmol/L)的方法冷冻C57BL/6小鼠和昆明白小鼠的精子,然后用解冻的精液进行体外受精,检测受精率和2-细胞发育率,还检测了添加480μmol/L组的C57BL/6小鼠体外受精胚胎移植后的出生率。结果表明:在冷冻液中添加MTG后C57BL/6小鼠和昆明白小鼠冷冻解冻精液的受精率和2-细胞发育率均显著升高(P0.05),说明在冷冻液中添加MTG能够支持体外受精后正常的胚胎发育。通过添加MTG能显著提高这2个品系小鼠冷冻解冻后精子的体外受精能力。 相似文献
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牛体外受精胚胎冷冻与解冻孵化试验报告 总被引:3,自引:0,他引:3
用添加 5 %犊牛血清 (FCS)的HEPES缓冲TCM 199,用共培养法获得牛体外受精胚胎。冷冻保护液组成为 :18%FCS、72 %PBS、10 %( 1.4mol)甘油、0 .1g/ml蔗糖。冷冻程序为 :①从 -7℃开始冷冻 10分钟 ,第二分钟植冰 ;② 0 .5℃ /分缓慢冷冻 3 2分钟至-2 3℃ ;③最后以 -2 3℃冷冻 10分钟后投入液氮。冷冻保存 6h~5d的胚胎解冻存活率为 90 .0 %;用 2 0 %FCS +80 %HamF1 0 孵化2 4、48h存活率分别为 77.8%、5 1.9% 相似文献
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奶牛体外受精胚胎的不同培养方法对比试验 总被引:1,自引:1,他引:0
以屠宰场奶牛卵巢为试验材料,研究体外、体内培养法对体外受精胚胎发育的影响。(1)体外受精胚胎在体外培养体系是否加输卵管上皮细胞单层(颗粒细胞单层)(2×106个/mL)的培养液中培养与临时受体绵羊体内培养对比试验。结果显示:在培养的第8天囊胚发育率无显著差异,体外培养体系囊胚形成主要集中在第8天(受精日为第0天)。体内培养体系囊胚的形成多数在第7天。加体细胞的体外培养体系与体内培养法囊胚生成率无显著差异,但却显著好于不加体细胞的简单体外培养法。(2)进行两种方法生产胚胎的程序冷冻、解冻敏感性试验。结果显示:体内培养法和普通体外法生产的胚胎解冻后存活率(90%、60%)和囊胚孵化率(85.7%、44.4%)存在极显著差异(P<0.01)。 相似文献
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奶牛体外受精胚胎的不同培养方法对比试验 总被引:3,自引:0,他引:3
以屠宰场奶牛卵巢为试验材料,研究体外、体内培养法对体外受精胚胎发育的影响。①体外受精胚胎分别在加输卵管上皮细胞单层和颗粒细胞单层(2×106个/ml)的体外培养体系的培养液中培养与临时受体绵羊体内培养对比试验。结果显示:在培养的第8 d囊胚发育率无显著差异,体外培养体系囊胚形成主要集中在第8 d(受精日为第0 d)。体内培养体系囊胚的形成多数在第7 d。加体细胞的体外培养体系与体内培养法囊胚生成率无显著差异,但却显著好于不加体细胞的简单体外培养法。②进行2种方法生产的胚胎的程序冷冻、解冻敏感性试验。结果显示:体内培养法和普通体外法生产的胚胎解冻后存活率(90%;60%)和囊胚孵化率(85.7%;44.4%)存在极显著差异(P<0.01)。 相似文献
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牛体外受精低品质胚胎冷冻保存效果 总被引:1,自引:0,他引:1
体外受精胚的品质和耐冻性较体内受精胚差、妊娠率低 ,特别是低品质冻胚的妊娠率更低。为了改善低品质冻胚的妊娠率 ,我们设 10 %乙二醇 (EG)、 8%EG和 5%EG +5 % 1,2 丙二醇 (PD) 3种不同处理的防冻剂就牛体外受精低品质胚胎的冷冻效果进行了初步的探讨。结果用这 3种防冻剂冷冻保存的胚胎 ,解冻后用TCM - 199+10 %犊牛血清 (FCS) +10 0 μmol/Lβ 巯基乙醇 (β ME)培养 72h的孵化率分别为 11 1%、 2 1 4 %和 2 0 6 % ,后两者明显地高于前者 相似文献
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目的建立用于ALK3基因敲除小鼠品种保存的体外受精-胚胎移植(IVF-ET)模型.方法取杂合子雌性ALK3小鼠卵子与杂合子雄性ALK3小鼠精子进行体外受精,收集2-cell,进行胚胎冷冻,1周后进行胚胎复苏移植,通过PCR方法对仔代鉴定.结果冻存胚胎242枚,复苏获得存活胚胎196枚,移植78枚,产仔19只,获得杂合子... 相似文献
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对胚胎因素影响奶牛体外受精胚胎培养效果进行了研究。结果发现,在胚胎因素中,胚胎类型(冻胚和鲜胚)与胚胎发育阶段对胚胎培养效果没有显著影响(P>0.05);冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响极显著(P<0.01);冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著(P<0.05),解冻后A级胚胎存活率(80%,128/160)、囊胚孵化率(58.75%,94/160)显著高于B级胚胎存活率(59.38%,95/160)和囊胚孵化率(37.5%,60/160)(P<0.05);解冻水浴温度(20℃、30℃)对培养效果有极显著影响(P<0.01)。 相似文献
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研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明:(1)分别以10%甘油、10%乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10%葡聚糖+0.1mol/L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎,冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56.9%(259/455)、81.8%(604/738)、84.8%(540/637)和59.5%(308/518)。(2)取样后胚胎体外短暂培养(0-4h)并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。(3)切割取样小鼠胚胎在25%甘油+0.25mol/L蔗糖+20%的血清为冷冻液,在-100~-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73.3%(33/45),切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57.1%(4/7)。 相似文献
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为了研究不同玻璃化冷冻预处理对牛卵巢颗粒细胞培养的影响,试验采用4种不同的玻璃化冷冻预处理方法(①将冷冻保存管直接投入液氮罐中;②将冷冻保存管先置于4℃冰箱15 min,然后投入液氮罐中;③将冷冻保存管先置于-20℃冰箱10 min,然后投入液氮罐中;④将冷冻保存管先置于4℃冰箱15 min,再置于-20℃冰箱10 min,然后投入液氮罐中)处理牛卵巢颗粒细胞,解冻后检测细胞活力和传代时间。结果表明:解冻后4种方法的细胞活力分别为72%、74%、79%和86%;传代时间分别为76 h、73 h、67 h和62 h;方法④的细胞活力和传代时间与其他组比较差异显著(P<0.05)。说明玻璃化冷冻预处理方法有利于复苏后的牛卵巢颗粒细胞的进一步培养。 相似文献
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本研究采用不同来源的体外生产胚胎(屠宰场卵巢IVF胚胎,OPU-IVF胚胎,SCNT胚胎),系统研究了不同冷冻方法对水牛体外生产胚胎冷冻效果的影响,以完善水牛体外生产胚胎冷冻方法,进一步提高胚胎冷冻效果。试验选用6~7日龄囊胚分别用不同的冷冻液和不同冷冻方法进行胚胎冷冻。玻璃化冷冻液分别为40%EG、25%EG+25%DMSO和20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖;程序化冷冻液分别为10%甘油和0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA。结果表明:(1)在玻璃化冷冻中,无论何种胚胎不同冷冻液的冷冻效果有明显的差异,但均以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液的冷冻效果最好,并且高于程序化冷冻的存活率;而对于程序化冷冻,用10%甘油作为冷冻液,屠宰场卵巢IVF胚胎的冷冻后存活率略高于用0.05 mol/L海藻糖+1.8 mol/L EG+0.4%BSA的冷冻后存活率,但差异不显著(P>0.05)。(2)VF胚胎利用程序化冷冻胚胎解冻后,在0~24 h内有76.5%胚胎复活,高于玻璃化冷冻的复苏率(48.9%)(P<0.05);而与此相反,在24~48 h内,玻璃化冷冻胚胎的复苏率(42.6%)则高于程序化冷冻(23.5%)(P<0.05)。综上所述,各种来源的水牛体外生产胚胎均可进行冷冻保存,应用玻璃化冷冻的效果好于程序化冷冻,且以20%EG+20%DMSO+0.5 mol/L蔗糖作为冷冻液进行玻璃化冷冻效果最好,但程序化冷冻后的胚胎复苏速度明显快于玻璃化冷冻的速度。 相似文献
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绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用EFS40玻璃化液对6.5~7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接移植试验.结果:桑椹胚、囊胚冷冻解冻后移植的妊娠率分别为37.50%(3/8)和54.55%(6/11),胚胎存活率分别为33.33%(3/9)和50.00%(6/12),差异均不显著(P>0.05);胚胎解冻后用0.5 mol/L蔗糖脱防冻剂与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的妊娠率分别为44.44%(4/9)和50.00%(5/10),胚胎存活率分别为40.00%(4/10)、45.45%(5/11)差异不显著(P>0.05);10枚解冻后的胚胎细管内脱防冻剂后,直接装管移植给8只受体,妊娠率为50.00%(4/8),胚胎成活率为40.00%(4/10),与同期常规冷冻解冻组相比无显著差异(P>0.05). 相似文献
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将384个 8~16细胞期的兔胚胎分成四个不同的试验组。用PBS+50%兔血清作为保存液,1.5M的DMSO或甘油作冷冻保护剂,以1℃/分的速度从13~17℃降到-40或-78℃投入液氮。用DMSO和甘油作冷冻保护剂,-40℃投入液氮的两组胚胎解冻后,经体外培养发育成胚泡的比率(分别为35.7%和32.8%)较-78℃投入液氮的两组(分别为22.9%和7.0%)为高。将-40℃投入液氮的两组胚胎解冻后,分别移植给5只受体母兔,受体妊娠率在DMSO组为80.0%,甘油组为60.0%;妊娠20天胎儿存活率分别为>44.9%和>34.0%;仔兔出生率分别为2.04%和22.6%。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2016,(9)
为探究不同冷冻速率对鸡囊胚细胞冷冻效果的影响,使用胚胎冷冻仪分步冷冻,比较不同步骤中不同冷冻速率冷冻后,细胞二乙酸荧光素(FDA)染色活率(简称活率)和培养24 h后细胞贴壁率(简称贴壁率)。结果表明:第1步冷冻,-0.7℃/min组活率最高(0.846),但与-0.5℃和~1℃/min组差异不显著(P0.05)。-1℃/min组贴壁率最高(59.1%),且与各组间差异均极显著(P0.01)。第2步冷冻,投入液氮前不同温度,-75℃组活率最高(0.530),但与-35℃、-55℃组差异不显著(P0.05);-35℃组贴壁率最高(36.6%),且与各组间差异极显著(P0.01)。因此,鸡BCs使用胚胎冷冻仪进行分步冷冻,以-1℃/min的速率降温至-7℃保持10 min,继续以同样速率降温至-35℃投入液氮保存,解冻后不仅可以获得较好的活率,而且培养后可以获得较高的贴壁率。 相似文献