贺兰山东麓主栽葡萄品种病毒病鉴定及健康状况评价

对贺兰山东麓7个葡萄主产区的9个葡萄品种,共计52份样本进行葡萄病毒病的ELISA检测和健康状况分析。9个测试葡萄品种中,2个酿酒品种感染了葡萄卷叶病毒(GLRaV-3),病毒感染率为22.22%;1个酿酒葡萄品种感染了葡萄扇叶病毒(GFLV),病毒感染率为11.11%;1个鲜食葡萄品种感染了卷叶病毒(GLRaV-3),病毒感染率为11.11%。在2个受测目标病毒中,GLRaV-3的发生和危害最为严重,其单个采样点的样本感染率为14.29%~50.00%;其次为GFLV,单个采样点的样本感染率为100.00%。蛇龙珠是贺兰山东麓携带GLRaV-3的主要葡萄品种,西拉是携带GFLV的主要葡萄品种。     

贺兰山东麓葡萄品种卷叶病毒（GLRaV-3）携带状况研究

应用血清学的酶联免疫法(ELISA),对采自宁夏贺兰山东麓7个葡萄主产区内的8个主栽品种,共计50份样本进行了葡萄卷叶病毒病的检测和分析.在被检测的8个主栽品种中,3个品种的10份样本带有卷叶病毒(GLRaV-3),品种带毒率占所测品种的37.5%.     

医用抗病毒剂脱除葡萄病毒的初步研究

以携带葡萄(Vitis spp.)斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘伴随病毒(GRSPaV)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄卷叶伴随病毒-1(GLRaV-1)、葡萄卷叶伴随病毒-2(GLRaV-2)、葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)和葡萄卷叶伴随病毒-6(GLRaV-6)等病毒的8个葡萄品种试管苗样品为材料,采用不同质量浓度的医用抗病毒剂利巴韦林注射液进行脱毒处理。结果发现,葡萄植株的死亡率较高,设置的4个质量浓度处理中,只有加入25 mg/L利巴韦林注射液处理的试管苗样品获得了再生植株。对分离成活的茎尖进行RT-PCR检测,结果表明,获得的5个葡萄品种的9株再生植株中,只有维多利亚的2株检测带有GRSPaV,其余均不带有所检病毒。     

嘉兴市主栽葡萄品种中主要病毒病原的检测

为调查嘉兴市主栽葡萄品种上病毒发生状况,本研究采集了嘉兴市5个县区的6个主栽葡萄品种162份样品,采用RT-PCR技术结合PCR产物测序对葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄卷叶病毒1(GLRaV-1)、葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3)、葡萄病毒A(GVA)、葡萄病毒B(GVB)、沙地葡萄茎痘病毒(GRSPaV)和葡萄斑点病毒(GFkV)发生情况进行检测。结果表明,嘉兴市葡萄主栽品种带病毒率高达91.4%,且复合侵染率为60.5%。以上7种病毒,除GFLV以外,其他6种病毒均可检测到,且GFkV发生率高达84%。     

宁夏地区葡萄卷叶伴随病毒遗传变异的PCR-SSCP分析

宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄卷叶病病株率较高,严重影响了酿酒葡萄产业的健康发展,但有关其病原葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus, GLRaVs)的遗传变异情况则鲜有报道.利用RT-PCR技术对宁夏酿酒葡萄不同种植区的7个主栽品种的GLRaV-1和GLRaV-3进行分子检测,利用SSCP技术对扩增片段进行遗传变异分析.试验结果共获得8个GLRaV-1和13个GLRaV-3的阳性样本. 8个GLRaV-1分离物基于CP基因分析差异明显,可分为3类; 13个GLRaV-3分离物基于RdRp基因分析差异明显,可分为3类,而基于CP和HSP70基因分析可分为2类.说明宁夏酿酒葡萄不同种植区、不同品种的GLRaV-1和GLRaV-3种群分子特性存在差异且遗传变异明显.这有助于宁夏地区酿酒葡萄GLRaVs流行学调查和分子诊断分析,为该病害的防控提供理论依据.     

PAS-ELISA检测GFLV和GLRaV-3技术的研究

以中国农业科学院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材,对葡萄扇叶病毒(GFLV)和葡萄卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)进行了A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)的检测技术的研究。从阴、阳性对照及抗血清或抗体浓度的选择,到不同时期、检测部位对结果的影响,建立了一套完整的ELISA检测GFLV和GLRaV-3程序;通过试验分析,该方法快速,简便,经济且灵敏度高,不失为葡萄病毒检测的一种新方法。通过检测,还了解到GFLV的发病高峰在春季,主要发病部位在上部叶片,而GLRaV-3的发病高峰在秋季,重要发病部位在下部叶片。     

山东省葡萄主要病毒病的分布及病原鉴定

葡萄病毒病严重影响葡萄的产量和品质,是制约葡萄产业发展的重要因素。为明确该病害在山东省的最新分布状况及病原种类,2016—2018年采用田间调查结合RT-PCR检测等方法对山东省葡萄主要病毒病进行了研究。结果表明,186份样品中共检出GLRaV-1、GLRaV-3、GRSPaV、GFLV、GFkV 5种病毒,检出率分别为18.82%、9.68%、16.67%、1.61%、33.87%,且复合侵染发生普遍,检出率为16.67%;树龄较大的葡萄园以GLRaV-1、GLRaV-3病毒侵染为主,新建葡萄园以GRSPaV、GFkV病毒侵染为主。研究结果可为山东省葡萄病毒病的早期预防提供理论指导。     

上海地区葡萄病毒种类及传毒介体检测鉴定

2017—2018年对上海市嘉定区、宝山区、奉贤区、浦东新区葡萄种植园进行病毒病调查及传毒介体检测,将采集的叶片混合后通过小RNA测序方法确定侵染病毒种类。结果表明:混合样品带有葡萄双生病毒A(Grapevine geminivirusA,GGVA)、葡萄卷叶伴随病毒2(Grapevine leafroll-associated virus2,GLRaV-2)、岩生葡萄茎痘伴随病毒(Grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFkV)和葡萄蚕豆萎蔫病毒(Grapevine fabavirus,GFabV)等5种植物病毒;RT-PCR或PCR复验结果与小RNA测序结果一致。同时,对浦东新区葡萄园种植点周边的昆虫带毒情况检测发现,葡萄双生病毒A普遍存在于烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)、茶黄蓟马Scirtothrips dorsalisHood、狭领纹唇盲蝽Charagochilus angusticollis、菊方翅网蝽Corythucha marmorata(Uhler)、桃蚜Myzus persicae和寡脉蝇Asteia amoenaMeigen体内,此外在狭领纹唇盲蝽体内还检出GFk V,其他病毒未检出。该结果可为进一步研究上海地区葡萄上发生的病毒病种类及传毒介体提供参考。     

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的葡萄卷叶伴随病毒3号检测方法

[目的]建立一种快速、灵敏的重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leaf-roll-associated virus3,GLRaV-3)方法.[方法]根据GLRaV-3已测序和已报道的HSP7O基因(Heat shock protein 70)保守序列,设计用于RPA检测的特异性引物,建立GLRaV-3的RPA检测方法,并对其特异性和灵敏度进行验证.[结果]建立RPA检测方法能够从GLRaV-3带毒株中检测到约380 bp的特异性条带,仅需在37℃下恒温反应40 min,无需特殊的仪器设备,经特异性评价特异性好,且该方法与普通PCR检测灵敏度基本一致.[结论]建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高,无需特殊的仪器设备,适合GLRaV-3的快速检测方法.     

甘肃葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的检测

采用 DAS-ELISA 检测方法对甘肃地区的葡萄主要品种进行扇叶病毒和卷叶病毒的调查和测定。结果表明,这两种病毒病在甘肃地区的主要葡萄产区均有发生。兰州地区和一些老的葡萄产区葡萄带病毒病较严重。通过对比植株下部枝条的幼叶、幼茎、老叶和老茎病原的检测结果,说明植株下部幼嫩组织是卷叶病毒最适的检测部位。