鸡传染性支气管炎山东A株病毒的分离与鉴定

鸡传染性支气管炎(IB)是由IBV引起的一种急性高度接触性传染病,该病可发生于不同日龄的鸡群,以呼吸困难、产蛋下降以及肾病变等为主要危害特征.是继新城疫、马立克氏病、传染性法氏囊病后严重影响我国养禽业的又一重要疫病。其致病性.     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究

从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒，在9－11日龄SPF鸡胚上连续传代9次，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明，该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用，当继代到第5代后，胚体严重病变；电镜观察该病毒为典型的冠状病毒；病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长，其效价增高，96小时可达到48小时的1倍，该毒株可在CEF上生长，但不能形成明显的蚀斑；并且经1％胰酶处理后可疑集鸡红细胞；鸡胚的第4代尿囊液病毒回归动物体，可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显，呈典型的花斑肾，腺胃则未见肉眼可见的病变，接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异，但从发病症状来看，IBV对ND疫苗具有干扰作用。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离与鉴定

对陕北(榆林)、关中(宝鸡市、扶风县)、陕南(洋县)等地鸡场疑似肾型传染性支气管炎病鸡，进行了病毒分离和鉴定。结果分离到4株IBV(定名为YL-04、BJ-04、FF-04、YX-04)，并对分离病毒进行了血凝性、血凝抑制性、致病性、鸡胚矮小化等生物学特性鉴定。结果发现，分离的4株病毒经1％胰酶处理后的各代病毒尿囊收集液均可凝集鸡红细胞；IBV标准阳性血清可特异性的抑制其凝集性；回归试验可复制出与自然发病相同的病例；病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用。以上研究结果表明，我们分离到的是鸡传染性支气管炎病毒，临床表现为致肾脏病变的组织嗜性，证明以上地区鸡群发病与肾型传染性支气管炎病毒感染有关。     

一株鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离与鉴定

对辽宁省沈阳地区某鸡场发生的临床症状及病理剖人变化疑似鸡传染性支气管炎的病例,无菌采集肾脏、肺脏、气管等组织,接种ＳＰＦ鸡胚,经病毒形态观察、血凝特性试验、动物回归试验证实,我们分离到一株鸡传染性支气管炎病毒;经病毒中和试验及核甘酸序列分析表明。该病毒为一株变异株。     

用电镜技术检出鸡传染性支气管炎病毒

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）属于冠状病毒科冠状病毒属的代表成员[1]。该病毒能引起码急性高度接触性传染病。此病早在1930年发现在美国北部的达科他训（Dakota），1936年Beach和Schaik证实由病毒引起，1937年Bearudette和Hudson首次在鸡胚上复制成功，1941年分离到马萨诸塞（     

鸡传染性支气管炎病毒沈阳分离株组织嗜性的研究

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)不同毒株对两个主要的靶器官气管和肾脏的侵嗜倾向和损伤程度有很大差异,这种差异是决定病毒致病性的原因之一.目前,由于国内分离的IBV主要是以致病性、临床症状和病理变化作为IBV病型和鉴定指标,其准确性与可靠性存在很大的差异.因此,在实验室条件下将病毒分离株回归动物试验,通过不同的试验方法进行鉴定是非常必要的.本试验为探讨IBV SY分离株的组织嗜性,应用H.E.染色法和IFA技术对IBV感染后的SPF鸡不同脏器和病理变化及抗原定位进行了研究.     

鸡传染性支气管炎病毒中国地方流行株的分离与鉴定

对海南省和广西省的几个发生呼吸罗音、鸡群全群发病、死亡率不高的疑是鸡传染性支气管炎病（IB）的鸡群，进行了病毒分离和鉴定。结果分离到了4株IBV分离株（HaN-1/95、HaN-2/95、GX－1／98、GX-2/98），并对分离病毒进行了病毒的致病性、病理组织切片、鸡胚矮小化、对NDV的干扰、电镜特征等生物特性鉴定及IBV基因组特异性3′末端非编码区的一段保守序列的RT－PCR和巢氏PCR鉴定。结果表明4株IBV分离株，均能产生呼吸困难、罗音等临床症状；病理组织切片，气管、肾脏等组织表现为上皮细胞受损、固有层充血、出血和淋巴细胞的浸润及组织坏死；对NDV－B1株有明显的干扰作用；其各自的传代物都有明显的致鸡胚矮小化作用；在透射电镜下观察到典型的冠状病毒粒子，多数近似为圆形，直径75-200nm，有囊膜，表面有一圈杆状纤突排列成花冠状，符合IBV的典型特征；基因组3′末端UTR的RT－PCR和巢氏PCR鉴定，4个分离株分别都扩增到293bp和172bp的特异目的片段，通过测序比较毒株间的核苷酸序列同源性在99％以上，与GeneBank中IBV H52等标准株的3′末端UTR的核苷酸序列高度同源。以上结果表明4株分离病毒都是IBV，为下一步的IBV分子流行病学的研究打下了基础。     

传染性支气管炎病毒中国和东南亚分离株的分子流行病学

对24个鸡传染性支气管炎病毒中国和东南亚分离株的S1基因5′端(含HVRⅠ和HVRⅡ)和N基因3′端进行了扩增和序列分析，通过与公开的其他毒株序列问的比较和分析，对分离毒株的分子流行病学进行了研究。结果表明，24个分离毒株分属于美洲、亚洲和欧洲3个基因群。其中一些毒株形成一相对独立的亚洲基因群，提示IBV在亚洲已存在相当长时间；另一些毒株则可能来源于欧洲和美洲或来源于不同毒株(包括疫苗株)基因间的重组。     

Characterization of infectious bronchitis virus isolates by slot blot hybridization

We used slot blot hybridization of the hypervariable regions of the S1 subunit of spike peplomer gene to identify and characterize infectious bronchitis virus (IBV) strains. Template DNA was created from six reference strain IBVs of different serotypes and immobilized on a nitrocellulose membrane. We synthesized digoxigenin-labeled probes from reference and unknown field viruses and hybridized them to template DNA. All reference strains could be distinguished and isolates identified by serotype if they were at least 95% identical to a reference strain. This slot blot hybridization procedure was specific and reproducible, and strain typing was consistent with the S1 sequencing of the IBV genome. This study thus provides a simple and rapid method for typing of IBV.     

鸡传染性支气管炎病毒广西分离株血清型的分析

应用病毒感染的鸡胚材料免疫新西兰兔的方法制备抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)单因子血清,然后在鸡胚气管环培养(Tracheal organ cultures,TOC)上对广西分离的7个IBV代表性毒株和3个常用疫苗株进行交叉病毒中和试验。结果显示,10个毒株被分为6个血清型。根据试验所得的R值,应用聚类分析法分析了各血清型毒株之间的亲缘关系,显示目前在广西流行的IBV野毒株之间以及其与疫苗株间的抗原性存在很大程度的差异,分属不同的血清型。同时还对IBV基因分型和血清分型之间的关系进行了探讨。     

用气管环交叉中和试验鉴定IBV山东分离株的血清型

利用气管环组织培养 ,通过交叉中和试验 ,以IBVM41 及T株作为对照 ,对从山东省分离的 4株传染性支气管炎病毒进行了血清型的初步分型。结果表明 ,4株中有 1株与T株为同一血清型 ,其余 3株既不属于M41 株 ,也不属于T株     

Vaccine efficacy against Ontario isolates of infectious bronchitis virus

Infectious bronchitis (IB) is an economically important viral disease with worldwide distribution. Every country with an intensive poultry industry has infectious bronchitis virus (IBV). The virus rapidly spreads from bird to bird through horizontal transmission by aerosol or ingestion. Sentinel bird studies were carried out in southern Ontario and IBV has been isolated from layer flocks. Genetic analysis of the S1 region of the strains showed that they were not vaccine related. The pathogenicity of selected Ontario variants of IBV isolates was studied and the subsequent work was to determine the degree of protection against field isolates provided by a commonly used vaccine MILDVAC-Ma5 in Ontario. The protection was evaluated by challenging immunized chickens with the respiratory (IBV-ON1) and nephropathogenic (IBV-ON4) viruses. The mean vaccine efficacy for IBV-ON1 was 66.7% indicating that a Massachusetts serotype vaccine would provide some protection against IBV field isolates.     

Pathogenicity of infectious bronchitis virus isolates from Ontario chickens

Infectious bronchitis (IB) is one of the important viral diseases of chickens, and in spite of regular vaccination, IB is a continuous problem in Canadian poultry operations. In an earlier study using sentinel chickens we determined the incidence of infectious bronchitis virus (IBV) in Ontario commercial layer flocks. The objective of this study was to determine the pathogenicity of 5 nonvaccine-related IBV isolates recovered from the sentinel birds. The clinical signs, gross, and histological lesions in specific pathogen-free chickens indicated that all 5 isolates caused mild lesions in the respiratory tract. An important finding of this study was the significantly lower average daily weight gain among virus-inoculated groups of chickens during the acute phase of infection. Based on sequences of part of the S1 gene IBV-ON2, IBV-ON3, and IBV-ON5 formed a cluster and they were closely related to strain CU-82792. IBV-ON4 had 98.7% identity with the strain PA/1220/9, a nephropathogenic variant.     

Preparing hemagglutinating antigen from isolates of infectious bronchitis virus

The hemagglutinating (HA) activity of 14 strains of infectious bronchitis virus (IBV) was investigated. The optimal conditions for IBV antigen preparation include inoculation of 10- or 11-day-old specific pathogen-free embryonated eggs and incubation for 30 hours at 37 C. Embryos were inoculated via the allantoic cavity with 0.1 ml of a low embryonic passage of the virus (10(7) to 10(8) EID50/ml). Allantoic fluid was harvested and pooled, and a 100-fold concentration of virus particles was achieved by centrifugation for 3 hours at 30,000 x g. Virus pellets were resuspended in Tris-hydrochloride buffer containing 3 units of phospholipase-C (type-1) enzyme/ml and incubated for 2 hours at 37 C. All IBV strains tested demonstrated positive HA activity with chicken red blood cells. The antigen was stored in liquid state or lyophilized at 4 C.     

鸡传染性支气管炎病毒分离株核衣壳基因克隆、序列分析和真核表达

根据GenBank公开序列自行设计一对引物，采用RT—PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）W和C9001分离株完整的核衣壳（N）基因，并将其克隆至pMD18-T载体进行核苷酸序列测定和分析。结果表明，扩增的2个IBV分离株核衣壳基因片段长度均为1230bp，编码409个氨基酸，彼此间核苷酸和氨基酸同源性分别为88．0％和89．5％，与GenBank中有代表性的参考毒株相应基因核苷酸和氨基酸序列比较显示，w株核苷酸序列与GenBank中的广东分离株（AY646283）同源性最高，为94．1％，氨基酸序列同源性为94．6％；与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86．1％～88．0％之间，氨基酸序列同源性在88．0％～90．7％之间；C9001株与国内部分毒株核苷酸序列同源性在86．4％～99．8％之间，氨基酸序列同源性在88．0％～99．8％之间。从核衣壳基因编码的氨基酸序列的系统进化树可见，W株与C9001株处于不同的进化分枝，亲缘关系较远。同时将核衣壳基因构建于真核表达质粒pVAX1中，用脂质体法将重组质粒转染入COS-7细胞中，间接免疫荧光检测出核衣壳蛋白的体外表达。研究结果为进一步研究IBV核衣壳蛋白的结构与功能以及基因工程疫苗的研制奠定了基础。