酶免疫法测定水牛奶孕酮作早期妊娠诊断的研究

本试验采用酶免疫分析法（ＥＩＡ）测定８７头杂种水牛，７１头摩拉水牛的脱脂乳孕酮含量，初步掌握了水牛发情、配种、妊娠、空怀和流产等不同生殖状态的孕酮变化规律。摩拉和杂种水牛发情配种时脱脂乳孕酮含量均在０．５毫微克／毫升以下，妊娠２１天和２７天时孕酮含量两次都在１．７毫微克／毫升以上，妊娠３０天以后直至产前干奶期间，脱脂乳孕酮保持在４～５毫微克／毫升的水平。母水牛流产和胚胎死亡时孕酮浓度下降。为对水牛繁殖状态的监控提供了可靠的方法和依据。结合生产实践，用上述方法和标准对６４头配种后２１天的母水牛进行早期妊娠诊断，判断妊娠牛和非妊娠牛的准确率分别为８８．９０％和９７．３％，总准确率为９３．８％。     

用ELISA测乳汁孕酮进行奶牛的发情检查和早孕诊断的研究

本试验用ELISA测定了101头奶牛配种期0～2天和配种后18～24天的乳汁孕酮含量,提供了牧场分两阶段测试乳样进行奶牛的发情检查和早孕诊断的可行方案。测定的结果经临床检验核实:发情检查的确诊率为100％;配种后20～22天,妊娠牛和空怀牛的确诊率分别为92.1％和96.9％,可疑率为4.0％,总确诊率为89.9％。     

水牛早孕诊断方法比较研究

本试验的目的是通过比较几种不同的妊娠诊断方法,建立一套简便而准确的水牛早孕诊断方法。选择体况相似的8头中国沼泽型奶水牛为研究对象,通过视诊法连续观测8头母水牛配种后15个时间点眼睛形态学特征的变化;采用ELISA法检测8头母水牛人工授精后8个时间点晨血的血清中孕酮、雌二醇水平;采用牛早孕试纸检测卡检测尾根血清中的早期妊娠相关糖蛋白,以上早孕检测结果均与B超孕检结果进行对比分析。结果发现：配种后前28d观测水牛的眼部未见异常形态;怀孕母牛的孕酮水平均为5.76ng/mL,自16d开始保持在4.9～8.43ng/mL,至24d有小幅度升高,而未怀孕母牛的孕酮水平则表现下降趋势;配种后28d时采用牛早孕试纸检测卡检测发现有4头水牛怀孕,与B超孕检结果相一致。可以得出,配种后前28d形态学观察法不适用于水牛早期的妊娠诊断;孕牛与未孕母牛的孕酮激素水平变化规律存在差异,可为今后建立水牛早孕诊断方法提供技术支撑;牛早孕试纸检测卡在28d后获得较高的准确率,可应用于水牛早期妊娠诊断。该试验的开展可为今后水牛早期妊娠诊断研究提供参考,同时对促进水牛产业的健康发展具有重要的意义。     

牛人工授精后血清中孕酮浓度的变化与受胎效果

笔者通过对授精当天、７天后和２０～２２日后牛体血清中孕酮浓度的测定（酶免疫法）与分析，探讨了该法应用于牛的发情鉴定和早期妊娠诊断的可能性。在５２头供试牛中，有４７头（９０．４％）属正常发情（排卵性发情），有１头（１．９％）属假发情（不排卵性发情），另有４头（７．７％）未发情，６０天后妊检结果，有３６头（６９．２％）怀孕，这３６头牛均为正常发情者。输精后第７天血清中的孕酮浓度，妊娠牛（ｎ＝３６）与非妊娠牛群（ｎ＝１６）间无显著差异，但在第２０～２２天后的第二次发情预计日，妊娠牛的孕酮浓度［５．３±１．７（１．２－８．２）ｎｇ／ｍｌ］则显著高于非妊娠牛［１．３±１．２（０．４－５．５）ｎｇ／ｍｌ］。采用此时血清中孕酮浓度指标，判定有４０头牛妊娠，其早期妊娠诊断的准确率在妊娠牛为９０．０％（３６／４０），对非妊娠牛达１００％（１２／１２）。因而，本法在早期妊娠诊断上具有实用价值。     

抗精抗体可能是尼里水牛需反复配种的原因

抗精抗体可能是尼里水牛需反复配种的原因本研究检验这种假说，这就是血清和／或子宫颈粘液中高效价的抗精抗体可能是反复配种动物不受胎的一个原因。为此，将３２头正常和反复配种种用水牛平均分成４组（ｎ＝８／组），即Ａ组为处女牛，Ｂ组为妊娠牛，Ｃ组为情期牛（产后...     

声明

在石阡县高魁、大岩两村用氯前列烯醇注射空怀健康的黄牛（86头）、水牛（46头）共132头母牛进行唰期发情和冻配试验。结果表明：0～8d友晴牛共122头，同期发情率为92．42％（122／132），在2～6d发晴的占总发晴数的92．62％，有卵泡发育的母牛占发情母牛数的55％（22／40）；冻配第一晴期受胎率为43．59％（51／117），第二情期受胎率为600／0（27／45）。     

产后20天应用氯前列烯醇对分娩期和产后期异常奶牛繁殖指标的影响

本试验选用276头高产中国荷斯坦牛为研究对象,其中120头初产奶牛和156头经产奶牛均表现为分娩期异常或产后期异常,如难产、胎衣不下、双胎难产、早产或子宫感染。试验牛被分为处理组与对照组。处理组在产后20d间隔811连续两次皮下注射氯前列烯醇（0.4mg/次）,对照组注射4．0mL灭菌生理盐水。然后观察其首次发情的时间、适合第一次人工授精的时间、首次授精妊娠率、150d妊娠率、产后的空怀天数、重复配种奶牛的比例和每头牛的授精次数。结果表明,产后应用前列腺素对产后首次发情的时间和产后首次人工授精的时间没有影响,但处理组奶牛首次人工授精的妊娠率明显升高,这在头胎牛更为明显;产后应用氯前列烯醇可明显减少平均授精次数、缩短产后空怀时间、增加产后150d泌乳奶牛的妊娠率、降低产犊后重复配种率。     

血小板计数法在奶牛超早期妊娠诊断上的应用

对２０头未孕母牛血小板正常值的测定结果为４９６．５×１０９／Ｌ±６６．５×１０９／Ｌ；对３０头受配母牛进行血小板值变化和最佳血检时间的试验，结果表明，２２头妊娠母牛于配种第７天血小板值明显减少（Ｐ＜０．０１）；而８头未妊娠母牛则无明显变化（Ｐ＞０．０５）。根据妊娠母牛配种前后血小板值差＞１９２．３×１０９／Ｌ为妊娠标准，对３０头受配母牛进行了超早期妊娠诊断试验，经直检妊娠母牛符合率为８６．３６％，空怀母牛符合率为８７．５％，总符合率为８６．６６％（Ｐ＞０．０５）。     

鹤庆县水牛同期发情效果初报

试验在水牛的繁殖季节，在农户散放的饲养条件下对摩本杂、尼本杂两种杂交水牛应用CIDR＋PG法进行同期发情试验。结果摩本杂水牛在撤栓后24—72h45头水牛发情43头，同期发情率达95．56％，尼本杂水牛在撤栓后24—72h40头水牛发情39头，同期发情率达97．50％，两者同期发情率差异不显著（P〉0．05）；对发情水牛在撒栓后36h和60h各输精1次，配种后60—90d妊娠检查，摩本杂水牛怀孕23头，情期受胎率51．11％；尼本杂水牛怀孕20头，情期受胎率50％，摩本杂情期受胎率略高于尼本杂，但两者差异不显著（P〉0．05）。     

PAGmRNA在奶牛血液中表达的研究

本试验采用半定量RT-PCR的方法,检测和分析了牛PAG基因mRNA在妊娠牛及空怀牛血液中的表达规律。结果发现,PAG基因mRNA在妊娠21d的母牛及空怀牛血液中都有表达,而妊娠牛表达量显著高于空怀牛（P〈005）。这说明配种后21d奶牛血液中PAG基因的表达量可以作为奶牛早期妊娠诊断的依据。     

奶牛早期妊娠诊断—应用放射免疫测定乳汁孕酮含量的研究

应用放射免疫测定91头黑白花母牛,(配种后21—28天和42天)的混合全乳的孕酮含量,进行早期妊娠诊断研究。结果显示怀孕与未孕牛之间孕酮值差异非常显著(P<0.01)。据此确定全乳孕酮值的判定标准:>11毫微克/毫升为怀孕,<8毫微克/毫升为未孕,8.1～10.9毫微克/毫升为疑似。经直肠妊检核实,用这标准衡量配后21,23,24天妊娠牛的确诊率分别为85.7％,90.2％,91.4％,未孕牛确诊率是100％,因此,最佳采样时间以配后23—24天为宜。     

大力发展杂种牛

岑溪市从2001年开始进行牛品种改良，每年配种几千头，逐年有发展，2004年人工授精配种母牛13741头（其中黄牛5854头、水牛7887头），产下杂种牛5520头（其中黄牛3031头、水牛2489头）。2005年上半年人工授精配种母牛6718头（其中黄牛2905头，水牛3813头），产下杂种牛仔4521头（其中安格斯杂种牛仔l852头、尼里拉非杂种牛仔2669头）。     

地中海水牛人工授精效果研究

[目的]为了解意大利地中海水牛冻精的授精效果及其在我国生长适应情况。[方法]利用国内首次引进意大利地中海水牛冻精与我国现有的摩拉、尼里——拉菲和本地水牛进行人工授精,试验选取自然发情的摩拉水牛20头,尼里水牛16头,本地水牛32头,年龄在2.5~9岁之间,采用直肠把握子宫角深部输精法,配种后40 d应用B超进行早期妊娠诊断怀孕情况。[结果]：摩拉、尼里——拉菲和本地水牛受胎率分别为50.00%、75.00%、56.25%,平均人工授精配种受胎率为58.82%,品种间人工授精受胎率差异不显著（P〉0.1）。[结论]表明引进地中海水牛冻精开展杂交组合,改良我国现有的水牛品种,提高其生产性能是切实可行的。     

农畜妊娠诊断综述

农畜妊娠诊断综述西南农业大学（４００７１６）蒋光化早期确诊农畜是否妊娠有重大经济效益。（ｓｐｅｉｃｈｅｒ，ｅｔａｌ．１９６７）母畜配种后尽快决定其妊娠与否，是畜牧业多年来欲解决的难题。配种后，能在最短时间内得知未受胎（空怀），可以及时采用药物或激素处...     

奶牛小区实施同期发情后应用性控冻精人工授精的效果观察

为观察奶牛养殖小区应用同期发情后，实施性控冻精人工授精的效果进行试验。结果表明：发情率为87．5％，而且92．9％的发情牛集中在20h之内，并获得了58．％的情期受胎率；≥17月龄的参配育成牛的妊娠率（83．3％）明显高于〈17月龄的参配牛的妊娠率（33．3％），差异显著（P〈0．05）；输精到排卵侧子宫角的妊娠率（62．5％）高于输精到子宫体的妊娠率（50．0％），但差异不显著（P〉0．05）；发情后长时间（超20h）不排卵，可以肌肉注射促排卵素3号25μg／头，然后输精，可提高妊娠率。     

酶免疫测定法检测粪便孕酮进行母猪早期妊娠诊断的研究

粪便中孕酮含量是判断母猪卵巢机能状态的重要指标,应用粪样孕酮酶免疫法可以对母猪进行早孕诊断。由实验结果可知,配种后母猪粪便中孕酮的含量超过150 ng/g粪样时,就可确认其妊娠;小于150 ng/g时,可确认其空怀。对164头配种后21～25 d的母猪进行了检测,早孕诊断的准确率为95.9%(138/146),空怀诊断的准确率为72%(13/18)。母猪粪便孕酮酶免疫法进行早期妊娠诊断有较高的临床适用性,对提高母猪繁殖率和猪场经济效益具有重要意义。     

B超在水牛早期妊娠诊断中的应用研究

利用带有 5 .0MHZ直肠探头的兽用便携式B超 ,进行 2 4 2头次水牛的早期妊娠 (≤ 6 0d)诊断 ,确诊阳性准确率为 1 0 0 %,阴性准确率 91 %。最早探测到胚囊、胚斑和胎心博动的时间分别为配种后 1 7,1 9和 31d。     

奶牛发情期前后脱脂乳中孕酮水平与受胎率之间的关系

本试验用酶联免疫法(EIA)对34头具有发情表现的上海黑白花奶牛进行了脱脂乳孕酮含量的测定.结果表明,配种后妊娠的母牛和未妊娠的母牛在原人工授精当天的脱脂乳孕酮水平分别为0.23±0.17ng/ml 和0.65±0.72ng/ml,两者差异显著(P<0.05).母牛在开始发情后16～18小时,脱脂乳孕酮水平低于0.23ng/ml 时配种,其受胎率为100%.     

ISG15和OAS1在奶牛早期妊娠阶段外周血中的表达规律

本研究旨在揭示干扰素刺激基因ISG15和OAS1在中国荷斯坦奶牛早期妊娠阶段外周血中的表达规律,为利用干扰素刺激基因进行早期妊娠诊断提供理论和方法上的指导。试验用青年母牛共27头,其中自然发情牛10头,同期发情牛17头;人工授精后0、14、18、21和28d采集外周血并分离总白细胞或白细胞亚类(淋巴细胞、单核细胞、NK细胞);采用荧光定量PCR检测ISG15和OAS1的相对表达量。结果表明:人工授精后18d妊娠牛外周血中ISG15和OAS1的相对表达量均显著高于空怀牛;ISG15在妊娠牛中一致上调(平均3.92倍),空怀牛中一致下调(平均1.46倍);OAS1在妊娠牛中平均上调3.49倍,空怀牛平均下调1.28倍。自然发情条件下,妊娠牛外周血中ISG15和OAS1的相对表达量均显著高于空怀牛,同期发情条件下两个基因在表达趋势上与之类似,但差异不显著;进一步分析显示:人工授精后18dOAS1在妊娠牛淋巴细胞中的表达显著高于空怀牛,其中妊娠牛中OAS1一致上调表达,平均上调2.14倍,空怀牛中OAS1一致下调,平均下调1.80倍。研究提示:人工授精后第18天妊娠牛与空怀牛之间ISG15的差异表达比OAS1更明显;自然发情状态下,妊娠牛与空怀牛之间两个基因差异表达情况比同期发情状态下更明显;相对于外周血总白细胞,妊娠牛与空怀牛外周血淋巴细胞中ISG15、OAS1的差异表达倍数更低。综上表明,利用外周血中ISG15的表达水平可望能够在人工授精后18d对自然发情奶牛较为准确地做出早期妊娠诊断;对于ISG15、OAS1在外周血免疫细胞亚类中的表达分析,为深入研究奶牛早期妊娠识别的分子机制奠定了基础。     

褪黑素对荷斯坦奶牛妊娠率及生殖激素的影响

试验旨在探明皮下注射褪黑素（MT）对荷斯坦奶牛配种妊娠率及血清生殖激素的影响。用计步器法确定自然发情的首次配种荷斯坦奶牛150头，对其中70头进行颈部皮下肌内注射褪黑素30 mg，12 h后进行人工输精；选择170头产后首次配种的荷斯坦奶牛进行同期排卵-定时输精处理，其中90头荷斯坦奶牛最后一次注射促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）的同时进行颈部皮下肌内注射褪黑素30 mg，16 h后进行人工输精。在进行二次配种的荷斯坦奶牛中选择153只进行皮下注射褪黑素。荷斯坦奶牛输精后20~35 d进行妊娠检查，详细记录首次配种妊娠母牛头数、二次配种妊娠母牛头数、产犊数。选取同期排卵-定时输精的荷斯坦奶牛25头，皮下注射褪黑素8 h后用放射免疫法检测其血清中褪黑素、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌二醇（E₂）的含量及35 d妊检时妊娠母牛血清中孕酮（P₄）含量。结果显示，与自然发情和同期排卵对照组相比，其对应的皮下注射褪黑素组荷斯坦奶牛的妊娠率及产犊率均显著提高（P<0.05）；皮下注射褪黑素组的双犊率显著提高（P<0.05），首次配种妊娠率和产犊率均显著提高（P<0.05），二次配种妊娠率和产犊率均差异不显著（P>0.05）。血清激素检测结果表明，与对照组相比，皮下注射褪黑素组血清中褪黑素、LH、E₂含量均显著增加（P<0.05）；35 d妊检时，皮下注射褪黑素的妊娠母牛P₄含量显著增加（P<0.05）。本试验结果表明，皮下注射褪黑素能够提高荷斯坦奶牛的妊娠率、产犊率及血清中LH、E₂和P₄含量，说明皮下注射褪黑素能够促进卵母细胞成熟和排卵，并提高配种妊娠率。