PCI—Ghrelin-28aa质粒对仔猪生长性能的影响

提取并纯化了大量的PCI-Ghrelin-28aa质粒,选取了同日龄的断奶仔猪8只(雌雄各4只),按体质量、性别等分到质粒及生理盐水2个处理组中,进行对比试验,试验期为63 d,分别在0、7、21、35、49、63 d采样并测定相应的指标.结果表明,PCI-Ghrelin-28aa质粒对猪具有明显的促生长作用,作用时间至少可达1个月;PCI-Ghrelin-28aa质粒可提高猪对粗蛋白质的消化率,降低料重比;PCI-Ghrelin-28aa质粒具有增强猪机体免疫力的趋势.     

PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响

将HBsAg与Somatostatin（SS）融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV，构建了pIRESlneo—HBsAg／SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg／SSM质粒，用Poly D，L—lactide co—glycolicacid（PLGA）微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15～30d，质粒注射组日增重较对照组高106．8％（P〈0．01）；30d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29．2％（P〈0．05）；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。     

融合基因Ghrelin/GHRH真核表达质粒的构建及其促生长效应

根据文献报道的猪Ghrelin与生长激素促释放激素(GHRH)基因序列,设计了含Ghrelin信号肽及Ghrelin与GHRH部分核苷酸序列及lin-ker序列等共233 bp的基因序列,通过基因合成的方法获得基因片段,并将其连入克隆载体pUC57中,经双酶切将其克隆至PCI真核表达载体中。经PCR、酶切和测序鉴定,证明融合猪Ghrelin和GHRH基因的真核表达载体pCI-Ghrelin/GHRH构建成功;提取PCI-Ghrelin/GHRH质粒并体内转染小鼠腿部肌肉组织,观察25 d内pCI-Ghrelin/GHRH质粒对小鼠体重的影响,结果表明:0~10 d试验组小鼠平均日增重高于pCI-Ghrelin-28aa组及生理盐水组,但试验组后期增重缓慢。     

猪Ghrelin真核表达质粒的制备及对小鼠生长的影响

通过RT-PCR获得猪 Ghrelin基因的cDNA片段,克隆入pcDNA3.1(+)质粒中构建真核表达质粒,将质粒注射到断奶的昆明小鼠的后腿肌肉中,研究Ghrelin真核表达质粒对小鼠生长的影响。结果表明,试验组小鼠在试验第10、20、35 d的增重高于对照组,而在试验结束的第46 d增重无显著差异。说明Ghrelin基因真核表达质粒有促进小鼠生长的作用。     

碱式氯化铜对断奶仔猪的促生长效应研究

本试验研究了碱式氯化铜(TBCC)对断奶仔猪的促生长效应。试验采用完全随机区组设计,将180头30d断奶的杜×长×大仔猪依体重、性别、窝别随机分为5个处理组,分别饲喂添加需要量水平铜的玉米-豆粕-干乳清粉型饲粮、在未添加外源铜的玉米-豆粕-干乳清粉型饲粮基础上分别添加150、200、250mg/kg铜(源于TBCC)和250mg/kg铜(源于硫酸铜)的饲粮。试验期35d。结果表明,各处理组间猪的日采食量、日增重和耗料/增重比无显著差异(P>0.10),但在表观数字上,以150mg/kg碱式氯化铜源组为最优,250mg/kg的硫酸铜源组次之,200、250mg/kg的碱式氯化铜源组及对照组较差。     

体内外环境对PLGA微球形态的影响

为了解聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)微球在体内外环境中形态的差异,进一步解析PLGA微球体内外环境对药物释放的影响,本试验采用乳化法制备PLGA微球,荧光标记后,采用光学显微镜、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜和苏木精-伊红染色法分别观察PLGA微球在不同介质、体外细胞环境和小鼠体内环境中形态的变化。结果显示,制备的PLGA微球为透明且表面光滑的球形,在水、PBS和血清中保持球形,膨胀率分别为23.7%、13.1%和0.5%;在0、24、48和72 h时,PLGA微球在血清中泄露分别是PBS中的6.54倍、8.66倍、4.67倍和3.61倍;PLGA微球在体外细胞环境中为半透明球形;PLGA微球在小鼠体内环境条件下前2天保持球形,第3天PLGA微球的形态发生变化。PLGA微球表面和内部结构在体外和体内环境中的差异表明PLGA微球中的药物在体外和体内环境中释放也存在差异。本试验发现体外和体内环境条件下PLGA微球形态会发生变化,可作为合理设计静脉注射用PLGA微球的参考,为进一步改善PLGA微球中药物释放提供数据支持。     

日粮中添加中链甘油三酯和半胱胺酸盐对断奶仔猪和生长育肥猪内源性生长轴的影响

该文通过3个试验来检验总体假设,即在仔猪和生长猪的日粮中添加中链甘油三酯(MCT)和半胱胺酸盐(CSH)将会刺激其内源性生长轴,从而改善其生长和性能。试验1结果显示:日粮中添加MCT增加了断奶仔猪血浆中生长激素(GH)(P0.05)和生长激素促分泌素(Ghrelin)的浓度(P0.05)。此外,与对照组相比,MCT处理组减少了仔猪腹泻(P0.05),维持了其小肠绒毛高度(P0.05)且仔猪日增重稳定(P0.05)。试验2结果显示,MCT的添加增加了生长激素促分泌素(Ghrelin)(P0.001)、GH(P0.01)和胰岛素(P0.05)的浓度,且呈现出剂量依赖性;而日粮中添加MCT对猪只的日增重、采食量和饲料转化率无影响。试验3结果显示,饲喂3周后,与对照组和CSH处理组相比,MCT处理组的猪只血浆Ghrelin浓度明显升高(P0.05),而血浆GH浓度和体重则不受任何处理的影响。结论:试验1的结果表明日粮中添加MCT,可能是通过刺激生长激素内分泌途径将断奶相关病症(例如生长迟缓和腹泻)降到最低。在试验2和试验3中,尽管MCT和CSH的添加对猪只的增重或饲料转化率没有影响,但是增加了其生长轴的内分泌组分。     

快大素对生长育肥猪促生长效果试验

二十一世纪是绿色饲料和添加剂得以大力推广和应用的世纪 ,浙江金华大得快动物保健品公司全体科研人员集数年心血 ,研制开发了一种纯天然饲料添加剂———快大素 ,它是利用高科技手段从天然花粉中提取出来的高能活性物。为进一步研究其对猪只的促长效果 ,分别进行了小猪、中猪、大猪的饲喂试验 ,现将试验情况综合报告如下。1　材料与方法1 1　试验材料快大素 :浙江金华大得快动物保健品有限公司研制生产。1 .2　试验动物及分组试验Ⅰ (小猪 ) :选用已断乳的 35日龄左右杜大长三元杂交小猪 ,共 4 0头 ,随机分为试验组和对照组 ,每组 2 0头。…     

生长肥育猪骨骼肌注射表达pGRF基因质粒的效应研究

将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6～10kg、10～20kg、20～50kg、50～100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段的饲粮低蛋白水平分别是20.70%,17.90%,15.03%,13.00%;高蛋白水平分别是23.70%,20.90%,18.02%,16.00%。pGRF基因质粒注射剂量设0mg、0.5mg、1.0mg3个水平,于试验开始与试验猪体重达60kg时共注射基因质粒2次。测定各阶段日增重,饲料消耗量,耗料增重比以及30、70、100kg时血液中GH、GRF、IGF-I的浓度。100kg时屠宰进行胴体品质测定。结果表明:饲粮蛋白水平对各阶段及全期试验猪日增重均有显著影响(P<0.05或P<0.01),对50～100kg阶段与全期日采食量和耗料增重比有显著影响(P<0.05或P<0.01)。注射pGRF基因质粒对各阶段及全期日增重均有显著影响(P<0.05),对6～10kg、10～20kg、50～100kg3阶段及全期日采食量有显著影响(P<0.05),对6～10kg阶段、50～100kg阶段及全期耗料增重比有显著影响(P<0.05)。注射pGRF基因质粒对30kg及70kg体重时猪血液中GRF、GH、IGF-I浓度均有显著影响(P<0.05)。提高饲粮蛋白水平与注射pGRF基因质粒均可明显降低超声波测膘厚及屠宰测膘厚、增大眼肌面积(P<0.05)。     

Ultrastructural and Immunohistochemical Studies on Uptake and Distribution of FITC-Conjugated PLGA Nanoparticles Administered Intratracheally in Rats

Polylactide-glycolide (PLGA) nanoparticles have been developed as pulmonary drug delivery carriers. To investigate their behavior, small- (d50 = 74 nm) and large-sized (d50 = 250 nm) FITC-conjugated PLGA nanoparticles were intratracheally administered to rats and were traced for 5, 30 and 60 minutes and 24 hours after administration (HAT). Immunohistochemically, a, FITC-positive reaction was observed in type-I alveolar epithelial cells (type-I AEC), endothelial cells and alveolar macrophages in the lungs from 5 minutes after treatment (MAT) to 24 HAT in both nanoparticle groups. In the kidneys, a positive reaction was observed in proximal tubular epithelial cells at 30 MAT; the reaction peaked at 60 MAT and was reduced at 24 HAT, while no positive reaction was seen in other sites. Ultrascructurally, the number of membrane-bound vesicles, which were approximately 70 nm in size and hard to distinguish from pinocytic vesicles, apparently increased in type-I AEC and endothelial cells at 5 MAT in the small-sized group, in comparison with the control group receiving physiological saline. The number of vesicles in the large-sized group was almost same as that in the control group. On the other hand, in both nanoparticle groups, lysosomes filled with nanoparticles appeared in alveolar macrophages from 30 MAT to 24 HAT. These results indicate that PLGA nanoparticles might be quickly transferred from the alveolar space to the blood vessel via type-I alveolar epithelial cells and excreted into urine, and that there is a threshold for particle size, less than approximately 70 nm in diameter, with regard to absorption through the alveolar wall.     

色氨酸对猪摄食和生长的调控作用及其机理

回顾1998牟第10版NRC猪营养需要发表以来,猪色氨酸需要量方面的研究进展,并结合本实验室在色氨酸方面的研究工作,讨论了色氨酸对仔猪生长轴IGF-1因子和胃肠调节肽Ghrelin分泌的调控,揭示了色氨酸在仔猪摄食和生长中可能的调控途径及其生物学意义。     

甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米微球作为口蹄疫病毒核酸疫苗递送载体的特性评价

旨在对制备的甘露糖修饰的壳聚糖聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly （D,L-lactide-co-glycolide）,PLGA]纳米微球作为口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）核酸疫苗递送载体进行评价。采用西佛碱反应和元素分析制备具有一定取代度的甘露糖修饰的壳聚糖衍生物（mannose modified chitosan,MCS）,然后,经双重乳化挥发法制备得到甘露糖修饰的壳聚糖PLGA纳米微球（MCS-PLGA-NPs）。采用纳米粒径仪检测MCS-PLGA-NPs粒径分布和表面电势（zeta）、扫描电镜考察其形态、琼脂糖凝胶电泳观察其对质粒的吸附和吸附质粒后抵抗核酸酶降解能力、CCK-8法检测MCS-PLGA-NPs的细胞毒性、激光共聚焦观察巨噬细胞对MCS-PLGA-NPs-质粒DNA复合物的摄取、荧光显微镜和Western blot验证MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA在细胞中的表达。元素分析结果表明,成功制备了取代度为5%~10%的MCS。纳米粒径测定和扫描电镜结果表明,MCS-PLGA-NPs的zeta为正值、粒径分布均匀且形态规则呈球形。琼脂糖凝胶电泳结果显示,MCS-PLGA-NPs吸附质粒的能力随着其质量的增加而增强并且可以在一定程度上抵抗核酸酶降解质粒DNA。在细胞毒性试验中,不同浓度的MCS-PLGA-NPs与RAW264.7细胞共孵育24 h后,细胞存活率仍在85%以上。在细胞摄取试验中,用激光共聚焦显微镜可以明显观察到质粒DNA结合到纳米微球表面被RAW264.7细胞摄取。荧光显微镜和Western blot试验证明MCS-PLGA-NPs加载质粒DNA可以在细胞中进行表达。综上表明,本研究成功制备了MCS以及具有递送核酸疫苗能力的MCS-PLGA-NPs,为FMDV核酸疫苗的递送研究提供了新的方向和见解,也为该递送载体携带特定抗原靶向抗原递呈细胞表面甘露糖受体以及应用于动物免疫的研究奠定基础。     

生长激素释放肽Ghrelin的研究进展

生长激素释放肽（Ghrelin）是生长激素促分泌素受体（GHS—R）的一种内源性配体，1999年由日本国立循环器病中心Kojima等人从小鼠和人的胃组织中成功分离并鉴定。Ghrelin系由28个氨基酸构成的多肽，能够和GHS—R结合而刺激生长激素GH的分泌。就目前的研究报道来看，Ghrelin除调节生长激素分泌外，还在能量平衡、胃功能、心血管系统以及肿瘤生长等诸多方面表现出重要的生物学效应。     

大鼠Ghrelin基因的克隆及其在发情周期不同阶段卵巢中的表达

该试验的目的是克隆大鼠Ghrelin基因eDNA片段进行序列分析,同时研究该基因在发情周期不同阶段卵巢中的表达。该试验是在成年大鼠胃组织提取总RNA,从Genbank里检索到大鼠Ghreline DNA序列后设计并合成引物,采用RT—PCR技术扩增出大鼠Ghreline DNA序列,获得了362bp的片段。将该片段回收并克隆到pMD18-T载体上,经PCR和限制性内切酶初步鉴定后测序,最终证明扩增出来的片段确实是GhrelineDNA序列。用相同的引物检测发情周期不同阶段大鼠卵巢中Ghrelin mRNA表达情况,发现发情前期、发情期、发情后期和休情期卵巢中都有Ghrelin mRNA的表达。     

不同抗球虫药物对鹌鹑人工感染球虫病的防治效果观察

选用15日龄的鹌鹑200只,随机分为10组,20只/组。经口感染孢子化鹌鹑球虫卵囊,5&#215;104个/只。药物预防组在感染的同时给以规定浓度的妥曲珠利、地克珠利、马杜拉霉素、盐霉素抗球虫药物;药物治疗组在出现球虫病症状时投服上述药物,同时设感染不用药发病对照组和不感染不用药健康对照组。观察4种抗球虫药物对人工感染鹌鹑球虫病预防和治疗效果。结果显示,各药物组的抗球虫指数均高于感染不用药发病对照组,均有预防和治疗鹌鹑球虫病的效果,其中妥曲珠利药效最佳。