转Bt基因欧洲黑杨转化TA29-Barnase基因的研究

为了获得雄性不育转Bt基因欧洲黑杨,在以叶片为外植体建立转Bt基因欧洲黑杨叶片组培再生体系的基础上,利用农杆菌介导叶盘法将TA29-Barnase基因转化到转Bt基因欧洲黑杨中。结果表明,转Bt基因欧洲黑杨叶片不定芽分化最适培养基为:MS+0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.05mg·L~(-1) NAA+0.01mg·L~(-1) TDZ+30g·L~(-1)蔗糖+6g·L~(-1)琼脂;不定芽生根最适培养基为:1/2MS+0.05mg·L~(-1) NAA+0.2mg·L~(-1) IBA+20g·L~(-1)蔗糖+6g·L~(-1)琼脂;经过在叶片不定芽诱导及生根诱导培养基添加除草剂PPT连续筛选,共获得9株抗性植株。对抗性植株进行基因特异性PCR检测,其中有5株呈阳性,转化阳性率达55.6%。初步表明获得了转Barnase基因的转Bt基因欧洲黑杨植株。     

南抗杨叶片快速繁殖体系的建立

以南抗杨叶片为材料,对其快繁体系进行研究。选用9种分化培养基、4种增殖培养基和6种生根培养基,研究不同激素组合对快速繁殖体系建立的影响。结果表明,适宜的诱导分化培养基为MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+KT 0.1 mg·L-1;丛生芽增殖培养基为MS+6-BA 1.2 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.1 mg·L-1;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L-1+NAA 0.01 mg·L-1。     

桔梗植株再生体系的建立及试管内开花现象

以桔梗种子无菌萌发的试管苗为材料,利用桔梗无菌苗叶片、茎段为外植体,建立了桔梗植株再生体系,并使桔梗组培苗在试管内开花。结果表明:叶片诱导最适培养基为1/2MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1,分化率为34.55%;茎段诱导最适培养基为1/2MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA0.2mg·L-1,分化率为23.21%;增殖最适培养基为1/2MS+6-BA0.3 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,增值系数为10.35;生根最适培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L-1,平均生根率达83.51%,平均根长3.12 cm。桔梗组培苗开花最适培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L-1。     

4种矮牵牛叶片直接诱导不定芽再生体系建立

选择4种不同花色的矮牵牛品种‘Pink’、‘Red’、‘Pink Vein’和‘Peppermint’,以MS培养基为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA激素,除草剂双丙氨膦和抗生素壮观霉素,研究其不定芽的诱导频率,为后续的叶绿体转化提供受体。结果表明:影响矮牵牛叶片诱导不定芽因素中,品种间的影响比激素更重要。当诱导培养基中的6-BA质量浓度为1.0 mg·L-1、NAA质量浓度为0.5 mg·L-1时,诱导效果最佳,是品种‘Pink’、‘Pink Vein’的最适培养基;同样地,品种‘Peppermint’最适培养基中,6-BA质量浓度不变、NAA的质量浓度降低至0.3 mg·L-1;品种‘Red’最适培养基中,6-BA质量浓度仍不变、NAA质量浓度降低至0.1 mg·L-1。4个矮牵牛品种的不定芽诱导率,由高到低的顺序为‘Pink’、‘Pink Vein’、‘Peppermint’、‘Red’,因此,优先选择品种‘Pink’作为转基因受体材料。分别利用不同质量浓度双丙氨膦和壮观霉素筛选,通过二者对品种‘Pink’叶片分化的影响,发现双丙氨膦和壮观霉素的最低抑制质量浓度分别为3、100 mg·L-1。该研究结果对今后利用叶绿体遗传转化技术改良矮牵牛品种提供了技术支持。     

半蒴苣苔的叶片组织培养及植株再生

为了建立半蒴苣苔Hemiboea subcapitata的组培快繁技术体系,保护和开发利用半蒴苣苔这一民间植物药资源,以MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,研究植物生长调节物质6-苄基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)组合对叶片愈合组织诱导、不定芽分化,增殖和壮苗生根的影响,筛选出适合半蒴苣苔快繁的最适培养基。结果表明:叶片诱导愈合组织困难,但在叶片基部或切口处可直接诱导分化出不定芽,且随着6-BA 和NAA质量浓度的升高,芽的分化率先上升后降低,以MS+0.5 mg·L-1 6-BA+1.0 mg·L-1 NAA+1.5 g·L-1活性炭(AC)分化率最高,达到67.8%;但平均每外植体诱导芽数以MS+1.0 mg·L-1 6-BA +0.5 mg·L-1 NAA +1.5 g·L-1 AC最多,达到6.69个;不定芽增殖以MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA处理增殖倍数最高,达到23.43;在添加不同质量浓度吲哚丁酸(IBA)的培养基中生根率均超过90%。     

翠菊品种库蕾娜叶片和叶柄及茎段的再生研究

为加速翠菊新品种的培育和扩繁,研究利用种子消毒接种获得的无菌苗作为外植体,以MS、1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA、NAA依次进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽生根。结果表明:茎段为再生体系的最佳外植体,愈伤诱导培养基为MS+2.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,诱导愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA,不定芽最佳生根培养基为1/2MS。叶片、叶柄最佳愈伤诱导培养基MS+4.0mg·L-1 6-BA+0.2mg·L-1 NAA,愈伤分化培养基只分化不定根。     

725杨组培繁殖技术研究

以美洲黑杨725杨树(Populus deltoides cl.‘725’)叶片为材料,对其再生体系的建立及其分化和生根苗对潮霉素B的浓度筛选进行了研究。结果表明,叶片的最佳消毒体系为75%的酒精消毒时间8 s,0.1%的升汞消毒3 min,最佳诱导愈伤的培养基是MS+6-BA 0.2 mg·L-1+2,4-D 1.5 mg·L-1+蔗糖25 g·L-1+琼脂6 g·L-1;最佳诱导分化培养基为MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.3 mg·L-1+蔗糖25 g·L-1+琼脂6 g·L-1;适宜的继代增殖培养基为MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1+蔗糖25 g·L-1+琼脂6 g·L-1;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.01 mg·L-1+IBA 0.7 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+琼脂6 g·L-1;对725杨叶片分化和不定芽生根进行了潮霉素B的敏感性试验,确定叶片分化的临界浓度为2.5 mg·L-1,生根的临界浓度为1.5 mg·L-1。     

抗病基因转化新疆伽师瓜研究

成熟子叶切块作为外殖体,经过组织培养获得再生植株。以MS作为基本培养基,取3日龄子叶块外殖体,选用MS+6-BA1.5mg·L-1+IAA0.3mg·L-1诱导从生芽,最高诱导率可达78%。分化再生过程中,6-BA浓度逐渐降低。在生根培养时,用MS+0.3mg·L-1NAA诱导生根率较高,根系粗壮。在建立甜瓜高效再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜中,经卡钠霉素的抗性筛选,获得转化的再生植株。通过PCR反应及Southern Blot检测,进一步研究了再生植株的基因整合与表达情况,获得与阳性对照一致的特异带,可初步证明外源基因已整合到甜瓜基因组中。     

毛稔叶片离体培养及植株再生研究

以毛稔叶片作为外植体, MS为基本培养基,研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表明,黑暗条件与光照12 h·d-1有利于毛稔愈伤组织形成,毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+0.1 mg·L-1 NAA,光照12 h·d-1诱导40 d,愈伤诱导率为96%;叶片形成的愈伤组织分化率极低,分化率随6-BA浓度升高而升高,愈伤组织分化最适培养基为MS+0.1 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-16-BA,分化率为10%;最适生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L-1 NAA,生根率为88.89%。     

矮牵牛‘梅林’遗传转化体系的建立

在矮牵牛‘梅林’再生体系基础上,建立根癌农杆菌介导的矮牵牛遗传转化体系,以获得转PSARK-IPT基因的矮牵牛植株。结果表明,转化效率最高的预培养时间为2d,农杆菌侵染浓度为OD600=0.5,侵染时间为3min;共培养时间为36h;适宜的抑菌抗生素头孢霉素浓度为500mg·L~(-1);潮霉素作为遗传转化中的筛选标记,选择2mg·L~(-1)为叶片分化筛选压,4mg·L~(-1)的Hey为最佳生根筛选压。对获得的15株潮霉素抗性植株进行PCR及RT-PCR检测,证明7株为阳性,证实目的基因已整合到这7株矮牵牛基因组中。     

采用均匀设计法优化西选二号培养基配比

以西选二号为试材,运用均匀试验设计方法调整植物生长调节剂的浓度和种类,通过建立回归模型筛选出适宜于西选二号植株愈伤组织形成、不定芽诱导和植株生根的最佳配方.结果表明:以MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA作为愈伤组织的诱导培养基,可以获得92%的愈伤组织诱导率.MS+3.0 mg·L-16-BA +0.1 mg·L-1NAA可作为芽诱导培养基,其芽分化率为90%.使用芽诱导培养基,附加0.6 mg·L-1GA3作为增殖继代培养基为宜.在1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA+0.2 mg·L-1NAA培养基中,芽苗诱导生根效果较佳.小植株炼苗移栽成活率达85%.     

欧洲黑杨‘N46’组培再生体系的建立

以欧洲黑杨N46无性系(Populus nigra‘N46’)的腋芽无菌萌发的幼嫩叶片为试验材料,对影响其不定芽分化和生根的关键因子进行了研究,建立了高效稳定的不定芽诱导和植株再生体系。结果表明:欧洲黑杨N46无性系幼嫩叶片进行不定芽分化诱导的最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA0.03 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉5 g·L-1,诱导最佳温度为27℃,每个叶片平均分化不定芽数量可达45.20个;不定芽生根的最佳培养基为1/2MS+IBA0.01 mg·L-1+NAA0.01 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂粉5 g·L-1,生根最佳温度为25℃,生根率可达93.33%,生根小植株移栽成活率达98%。     

结球甘蓝离体叶片不定芽的再生研究

以结球甘蓝强力50组培苗叶片为外植体,研究不同激素配比、苗龄对其不定芽再生的影响。结果表明,在不含任何激素以及单独添加不同浓度的6-BA或NAA的MS培养基上,均不能诱导外植体不定芽的分化;结球甘蓝离体叶片不定芽在MS+6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.80 mg·L-1分化培养基上再生频率最高,为79.86%,最适宜的苗龄为8 d;外植体在生根培养基1/2 MS+0.30 mg·L-1NAA中,不定芽的生根效果好,生根率达100.0%,且根系生长健壮。     

川芎幼嫩叶片植株再生的研究

为了建立一套川芎Lisgusticum chuanxiong Hort快速繁殖技术.以川芎幼嫩叶片为外植体,以MS和1/2MS为基本培养基,通过研究6-BA、2,4-D、 NAA、IAA、和IBA对愈伤组织诱导、不定芽分化和不定根产生的影响,找出相应的最佳激素组合.结果表明:川芎最佳愈伤组织培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 2 mg·L-1;最佳不定芽分化培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg·L-1+ NAA0.5 mg·L-1;最佳生根培养基是1/2MS+NAA0.5 mg·L-1+IBA0.5 mg·L-1.组培苗移栽后,生长健壮,成活率达100%.     

ACC合酶反义基因转化洋桔梗Double Mariachi Pink的研究

以洋桔梗(Eustoma graniflorum)品种Double Mariachi Pink为试验材料,在已建立的洋桔梗高频再生体系和高效稳定遗传转化体系的基础上,将PBI121 - ACC合酶反义基因片段(1008 bp)通过农杆菌介导法转化洋桔梗,通过高频再生获得116株抗性苗.再生抗性苗在生根培养基1/2MS+NAA0.1 mg/L+ Km 15 mg/L上生根筛选获得了55株正常生根的植株;对其中随机挑选的8个株系进行PCR鉴定和GUS表达检测,在增殖筛选培养基MS+6 -BA 0.1 mg/L+ NAA 0.05 mg/L +Km 30 mg/L+ Cb 100 mg/L上初步筛得到5个PCR阳性株系,其中4株GUS检测呈阳性;5个PCR阳性株系经PCR - Southern杂交鉴定得到1株阳性植株.将阳性株系出瓶移栽,其平均花期为24d.     

特色马铃薯品种红宝石再生系统的筛选

采用3因素3水平L9(34)正交试验设计,以特色马铃薯品种红宝石试管苗茎段为试材,分别选用3种植物激素(诱导愈伤用NAA,2,4-D,6-BA;诱导分化用NAA,GA3,6-BA)的3个水平对其茎段的离体再生进行研究,筛选适合红宝石的愈伤和芽分化诱导培养基。结果表明,不同培养基表现出不同的诱导效果,愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+NAA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1,愈伤率达100%;植株再生最佳培养基是MS+NAA 0.5 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1,再生率为80.3%,分化后再生苗健壮。     

园林植物报春花的组织培养

本试验以报春花叶片、茎段作为外植体,进行了初代组织培养,并进行增殖、生根培养。结果表明:75%的酒精(0.5 min)+0.1%升汞(8 min)具有很好的消毒作用;MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1是不定芽分化的最佳培养基配比;MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1是不定芽增殖的最佳培养基配比;1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1是生根的最佳培养基配比。     

光叶楮侧芽组培快速繁殖技术研究

通过对光叶楮侧芽的离体培养和快速繁殖试验,探讨了光叶楮侧芽诱导、分化、不定芽生长分化、快速繁殖及生根的最佳培养条件。同时,还对光叶楮枝条灭菌条件、培养过程中防止玻璃化等问题进行了比较试验。结果表明:适宜光叶楮侧芽诱导的培养基为MS 6-BA2.0mg·L-1 NAA0.5mg·L-1,诱导分化率为80％;适宜不定芽诱导及继代培养的培养基为MS 6-BA1.0mg·L-1 NAA0.5mg·L-1,不定芽分化率为70％,继代倍数达6-7倍;适宜壮苗的培养基为MS 6-BA0.5mg·L-1 NAA0.5mg·L-1;适宜生根的培养基为1/2 MS IBA 1.0 mg·L-1,生根率达100％;适宜壮苗生根同时进行的培养基为MS 6-BA0.05mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1,生根率达100％。     

生长调节物质对菊花'小金黄'叶片再生不定芽的影响

MS培养基中添加1.0 mg·L-1 6-BA的菊花品种'小金黄'叶片再生频率为27.1,显著高于添加TDZ或KT.在6-BA 1.0 mg·L-1与不同浓度生长素的配比中, MS + 6-BA 1.0 mg·L-1 + NAA 0.6 mg·L-1的再生频率达96.9, 高于2,4-D和IBA.'小金黄'最适宜的生根培养基为MS + NAA 0.4 mg·L-1.     

绿玉菊离体培养与快速繁殖

用绿玉菊叶片、不带腋芽茎段、带腋芽茎段和茎尖为外植体进行离体培养研究,分析了影响愈伤组织形成的因素及分化困难的原因.研究结果表明:在愈伤组织诱导时,不带腋芽茎段较嫩叶易产生愈伤组织,是首选外植体;6-BA1. 0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的激素配比对茎段愈伤组织诱导有利,诱导率高达100%;在MS基本培养基中,pH值为5.4较适宜愈伤组织的分化,且6-BA3.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1对愈伤组织分化不定芽的效果较好,分化不定芽均数达11.10个.茎尖及带腋芽茎段在MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.01mg·L-1的培养基上,能直接诱导出大量生长健壮的丛生芽,生根在MS+NAA0.05mg·L-1的培养基上进行,生根率高达100%,根多而壮,植株长势好.