盒式超滤系统对四联苗中NDV及IBV的浓缩试验

采用Filtron中型盒式超滤系统，对新城疫病毒（NDV）抗原液和NDV与传染性支气管炎病毒（IBV）混合抗原液进行浓缩试验，结果显示，浓缩抗原液的HA效价按浓缩比率成倍上升，而超滤液的HA为阴性，以浓缩抗原液，未浓缩抗原液及超滤液为水相，分别制成NDV浓缩油苗，NDV未浓缩油苗，四联浓缩苗，四联未浓缩油革以及超滤液乳剂，分别对久．鸡免疫后，NDV浓缩苗与未膛缩苗免疫鸡均产生了对NDV强毒攻击的抵抗力，保护率达100％，而NDV浓缩苗诱导产生的HI抗体效价明显高于未浓缩苗；比较浓缩四联苗与未浓缩四联苗的免疫效力，当2种疫苗注射剂量不同而抗原量相同时，诱导产生的免疫效力相同；浓缩苗与未浓缩苗效价测定及超滤液乳剂免疫试验结果证实，浓缩过程中既无有效抗原丢失，也无抗原活性变化，试验结果显示，该设备浓缩工艺简单，抗原回收率达100％，是一种理想的病毒浓缩齐备。     

鸡４种病毒抗原液的浓缩其四联没油佐剂灭活苗的研制

本研究通过超滤浓缩技术对鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征症病毒和传染性法氏囊病毒的尿囊液进行了１０倍或１０倍以上的浓缩处理，并按一定的比例配比研制成四联油乳剂灭活疫苗，对鸡的最小免疫剂量是０．２５ml，免疫接种二周后，鸡新城疫和产蛋下降综合征病毒的ＨＩ抗体效价分别达到８log2和７log２以上，传染性支气管炎和传染性法氏囊病病毒抗体Ｓ／Ｐ值均在０．２以上，抗体效价呈现明显的递增，抗体水平至少可持续４个月以上，这一结果证明该试验采用的禽类病毒性抗原的浓缩方法，适用新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒和传染性法氏囊病病毒等不同抗原液和的浓缩，同时为其他病毒尿囊液工细胞培养的浓缩以及不同种多联疫苗的研制奠定了基础。     

鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原的制备及检验

用传染性支气管炎病毒(IBV)M41株毒种接种11日龄鸡胚,收获感染鸡胚病毒液,将新鲜的病毒液用小型盒式超滤浓缩系统浓缩,然后用高速离心机离心,去上清,沉淀用原病毒液体积1/100的HA缓冲液悬浮,制备出100倍浓缩的IBV病毒液;将100倍浓缩的IBV病毒液中加入15%^20%的A型魏氏梭菌滤液,充分混匀,放37℃恒温振荡器感作2h,取出置2-8℃条件下48 h.制备出了5批IBV M41株HI杭原.检验结果显示:5批HI抗原的性状均为白色混浊液体,底部有少量沉淀;无菌检验为阴性,HA效价为1:128～1:512,5批杭原与IB阳性血清呈阳性反应,HI效价为81og2,而与阴性血清、新城疫阳性血清、H9亚型禽流感阳性血清、H5亚型禽流感阳性血清及产蛋下降综合征阳性血清呈阴性反应,HI效价低于21og2.各项检验结果均符合要求.     

鸡新城疫诊断抗原制备方法的研究

将疑似新城疫病料无菌采集后进行RT-PCR鉴定,将阳性病料研磨后接种SPF鸡胚,收获的阳性尿囊液进行血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)检测病毒效价,病毒效价达到2~7~2~8,病毒凝集效价达到10log2。使用10%蔗糖溶液及18-25k Da透析袋对阳性尿囊液进行浓缩,浓缩至原体积的1/5;10%福尔马林灭活诊断抗原,经过6h后灭活达100%;诊断抗原效价测定:血凝效价为2~(10);血凝抑制效价为10log2。利用制备的鸡新城疫诊断抗原和鸡新城疫标准诊断抗原与鸡新城疫标准检测抗体进行血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI),对比结果:鸡新城疫诊断抗原病毒效价为2~(10),高于鸡新城疫标准诊断抗原的2~9,鸡新城疫诊断抗原凝集效价为10log2,等同于鸡新城疫标准诊断抗原,证明所制备鸡新城疫诊断抗原符合要求,可以应用到生产实践中。     

鸽Ⅰ型副黏病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了制备鸽Ⅰ型副黏病毒融合蛋白(F蛋白)的单克隆抗体,以鸽Ⅰ型副黏病毒F基因抗原重组蛋白免疫BALB/C小鼠,得到能稳定分泌抗F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞3株。对效价最高的一株进行特性测定,结果显示其腹水抗体效价达到6.4×104以上,细胞培养上清液的效价达1︰800,其抗体亚类为lg G 2b,轻链为κ链,染色体数目为98条;血凝抑制试验显示单抗没有血凝抑制效价;间接ELISA进行特异性试验表明单抗与鸡传染性支气管炎病毒、鸡减蛋综合征病毒、鸡马立克氏病病毒、猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、羊痘病毒、大肠杆菌、沙门氏菌没有交叉反应,而与鸡新城疫病毒具有较强的交叉反应。PPMV-1 F蛋白单克隆抗体的制备为鸽Ⅰ型副黏病毒病新诊断方法的建立奠定了基础。     

胶体金快速诊断方法对鸡减蛋综合征病毒的检测

选择15nm的胶体金颗粒作为标记物，制备了鸡减蛋综合征病毒（EDSV）胶体金试纸条。该试纸条能检出浓度约为1．35μg／mL的纯化EDSV，用该试纸条检测135份临床样本，并与HA方法相比较，结果显示，二者的阳性符合率为89．8％。特异性试验结果显示，与鸡新城疫病毒（NDV）、鸡传染性腔上囊病病毒（IBDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）无交叉反应。表明，该试纸条用于检测EDSV具有快速、操作简便、特异性强等优点，可用于大批量抗原样本的检测。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。     

鸡传染性支气管炎病毒对新城疫病毒的干扰作用观察

为观察鸡传染性支气管炎病毒（IBV）HN99株对新城疫病毒（NDV）增殖的干扰作用,该试验采用不同浓度的IBV标准株M41和地方株HN99与鸡新城疫病毒（NDV）分别按不同接种顺序同胚增殖,利用病毒血凝试验（HA）测定NDV的效价,观察IBV对NDV的干扰作用,从而为检测IBV地方株HN99提供方法,也为同胚增殖两种病毒提供一系列的数据参考。试验结果表明,鸡传染性支气管炎病毒地方株HN99对NDV的干扰作用与其浓度和接种顺序有关。     

鸡4种病毒抗原液的浓缩及其四联油佐剂灭活苗的研制

本研究通过超滤浓缩技术对鸡新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒和传染性法氏囊病病毒的尿囊液进行了10倍或10倍以上的浓缩处理，并按一定的比例配比研制成四联油乳剂灭活疫苗，对鸡的最小免疫剂量是0.25ml，免疫接种二周后，鸡新城疫和产蛋下降综合征病毒的HI抗体效价分别达到8log     

鸡减蛋综合征HI试验稳定抗原的研制

用不同方法处理减蛋综合征病毒鸭胚尿囊液以制备ＨＩ试验诊断抗原。结果表明，经聚乙二醇沉淀后低速和高速离心１２０分钟以及透析处理均未能使病毒血凝素浓缩，而与未经上述处理的病毒尿囊液的血凝价相同。     

禽流感病毒单克隆抗体的制备及其抗蛋白抗原的分析

以纯化的H9N2亚型禽流感病毒为抗原,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后,经间接ELISA和血凝抑制试验(HI)筛选,获得了8株能稳定分泌抗禽流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。特异性试验证明,8株杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水的特异ELISA抗体效价可达1∶3.2×103~1∶5.1×106,其中2株HI效价达212。8株单抗与H5亚型血凝素分型抗原不发生血凝,与减蛋综合征(EDS-76)病毒、传染性支气管炎病毒(IBV)、新城疫病毒(NDV)均不反应。亚类鉴定证实,除1C7单抗为IgG2b外,其他7株均为IgG1亚类。Westernblotting试验分析初步表明,8株单抗至少针对纯化病毒粒子3种不同的蛋白抗原,其中3株针对核蛋白(NP),2株针对基质蛋白M1,2株针对血凝素HA/HA1。对感染细胞的Western blotting分析结果与纯化病毒结果基本一致,其中1株未明显沉淀纯化病毒粒子蛋白的单抗可以与感染细胞的M2蛋白多肽反应。     

鸡减蛋综合征灭活抗原不同保存方式的分析比较

为比较不同保存方式对鸡减蛋综合征灭活抗原的影响,采用禽腺病毒京911株(CVCC AV70)经尿囊腔接种易感鸭胚,收获感染鸭胚液,经β-丙内酯灭活后,对该抗原的保存条件及其稳定性等方面进行优化。冻干抗原与未冻干抗原在相同温度下,冻干抗原HA效价下降较慢。冻干抗原在2~8℃和-15℃以下保存,HA效价没有明显差异。因此,生产的鸡减蛋综合征灭活抗原要在冻干后保存在2~8℃最佳。保存条件的优化不仅可以减少经济损失,而且还有助于更好的控制禽腺病毒疫情的暴发。     

禽流感疫苗抗原浓缩工艺的研究

为了提升禽流感疫苗中的抗原效价,本研究采用密理博公司的切向流超滤系统,选用不同孔径的超滤膜和浓缩倍数对禽流感病毒(H9N2亚型,HP株)进行浓缩,观察HA和EID50的变化.结果显示:膜包孔径越大,病毒透过越多,但膜包孔径过小,浓缩时间长;随着浓缩倍数增加,HA和EID50均呈正相关增长,但高浓缩倍数耗时较长.说明禽流感疫苗生产中应根据抗原相对分子质量、HA、EID50和生产效率选择合适的超滤膜孔径和浓缩倍数.     

番鸭细小病毒琼扩抗原研制及初步应用

应用番鸭细小病毒鹅胚适应毒Ｍ９１毒株接种易感鹅胚,收获鹅胚尿囊液毒经浓缩后制成琼扩抗原。此抗原与抗番鸭细小病毒免疫血清和鹅细小病毒免疫血清有共同交叉反应并成功应用于番鸭细小病毒疫苗的免疫检测。     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合 …

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用,分别将按２００倍,５００倍,１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株,肾型Ｊ株,Ｈ１２０,２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株的１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作     

鸡体内鹅源新城疫病毒抗原的免疫组织化学检测

为研究鹅新城疫（ND）的发病机理,用3株鹅新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡,以单克隆抗体介导的免疫组化（IHC）法检测攻毒鸡体内NDV抗原的分布及定位,研究了鹅新城疫病毒（NDV）对鸡的组织嗜性。结果显示。在试验鸡多种组织器官中均能检测到NDV抗原,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内。结果表明,鹅NDV强毒株对鸡是一种泛嗜性病毒。     

影响鸡传染性法氏囊病毒抗原(HQ株)效价因素的探讨

抗原效价高低是评价疫苗质量的一项重要指标,目前各厂家的法氏囊疫苗免疫效果不佳,其中一个重要原因就是法氏囊抗原效价不高。试验旨在探讨影响鸡传染性法氏囊病毒抗原(HQ株)效价的因素,从而优化生产工艺参数提升抗原效价,从而提升法氏囊疫苗产品的免疫效果。本试验通过对比不同细胞传代比例,维持液pH,接毒量,接毒时间,收毒时间,接毒后培养温度,维持液血清含量生产抗原的病毒效价,从而选择最佳的工艺参数生产法氏囊抗原。结果表明:传代分种比例小细胞密度大的细胞接毒后病毒效价高,接毒后维持液pH7.8比pH 7.4的病毒抗原效价高;1%种毒接毒量效价最高,细胞培养至24~48h接毒,抗原效价差别小;接毒后36h收毒为最佳收毒时间,接毒后细胞培养温度为37℃最佳;接毒后维持液中血清含量为2%时抗原效价最高。综上,本试验获得了鸡传染性法氏囊病毒(HQ株)疫苗的最佳生产工艺参数,为生产出高效价的传染性法氏囊病毒抗原(HQ株)提供基础数据。     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组新城疫病毒的拯救

对现地分离的4株H9亚型禽流感病毒HA基因进行序列测定,选取其中1株在新城疫病毒 La Sota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达H9亚型禽流感病毒野生型HA基因的重组新城疫病毒基因组cDNA克隆,经间接免疫荧光和RT-PCR鉴定,结果表明:拯救重组病毒为rL-H9HA;重组病毒MDT≥168 h,ICPI和IVPI均为0,与亲本疫苗株La Sota具有相似的生长特性;重组病毒保持了La Sota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性,具有作为同时预防H9亚型禽流感和新城疫的双价苗的应用前景.