新型鹅黄病毒JS804毒株的分离与鉴定

2010年4月至11月,江苏等地鸭、鹅发生了一种以产蛋率、采食量显著下降,出现脑炎样神经症状为特征的传染病.对发病鹅进行剖检观察,鸭胚尿囊腔途径接种发病鹅病料分离病原,电镜观察病毒粒子.对健康鹅接种分离病毒进行动物回归试验.在病毒核酸背景未知的情况下,应用非序列依赖性单引物扩增法结合DNA酶处理(DNase-sequence independent single primer amplificmion,DNase-SISPA)对病原基因进行扩增,并在此基础上设计了1对特异性引物对病毒基因进行PCR扩增.剖检结果发现病鹅的脑膜、肺脏、肝脏、心脏、卵巢等多器官出血,脾脏肿大坏死.含毒鸭胚尿囊膜超薄切片电镜观察显示:病毒粒子直径为50～60 nm.动物回归试验成功复制出该病并分离到病毒.应用DNase-SISPA方法发现了3个病毒相关基因片段,经序列比对分析,与黄病毒属(Flavivirus)坦布苏病毒(Tembusu virus)基因序列有很高的同源性,分别为96%、88%、93%.据此设计特异性引物扩增出一段985 bp基因片段,该片段与黄病毒属坦布苏病毒E基因的核苷酸同源性为91%,氨基酸同源性为97%.将分离的鹅黄病毒毒株命名为Goose/Jiangsu/804/2010(简称JS804).研究结果表明:此次鸭、鹅新发疫病的病原为一种新的黄病毒.     

鹅细小病毒LH株的纯化及其生物学特性

取鹅细小病毒(GPV) LH株毒液,通过氯仿去除杂蛋白,用氯化钠与聚乙二醇-6000相结合方法粗提后,经蔗糖密度梯度离心纯化.通过PCR方法对不同浓度蔗糖溶液进行检测,取纯化毒液进行蛋白电泳及电镜观察,并无菌接种12日龄鹅胚,对死亡胚尿囊液进行PCR鉴定.试验结果显示:浓缩纯化后的GPV主要分布在50％～65％蔗糖浓度区间,病毒的蛋白含量为216 μg/L;电镜观察结果表明,病毒粒子分为实心和空心2种,直径大小在20～22nm;经SDS-PAGE电泳可看到多个条带,主要蛋白大小与病毒蛋白VP1、VP2和VP3相对应.纯化后的病毒接种敏感鹅胚仍可致其100％死亡,死亡胚具有特征性的病变,尿囊液经PCR鉴定,呈GPV核酸阳性.本试验所用方法获得的纯化GPV病毒液的纯度高且保持了该病毒的毒力特性,是一种方便可行的纯化该病毒的方法.     

鹅副黏病毒分离株的生物学特性鉴定

从江苏某地患病鹅群的脑、脾病料组织中分离到1株病毒.经过试验鉴定,该毒株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,而不能被AI(H5亚型与H9亚型)和EDS-76标准阳性血清抑制.人工感染雏鹅,引起100%的发病和死亡,并与自然病例有相似的症状和病变.该野外分离病毒的鸡胚半数致死量为每0.1 mL含有10-9.16,最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为58.8 h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.41,电境观察病毒颗粒呈多形性,粒径100～200 nm,有囊膜和纤突.综合上述结果得出,该野外分离病毒为鹅副黏病毒(GPMV)强毒力毒株.人工感染发病的鹅和鸡其临床症状及病理变化均与自然发病鹅的相类似.     

鹅源禽副粘病毒NA-1株生物学特性的研究

对从吉林省分离的鹅副粘病毒NA-1株应用SPF鸡胚进行传代,通过电镜形态学观察、HA及HI试验、血清学鉴定、毒力鉴定、AGID试验、血凝谱的测定、动物感染试验等一系列研究,发现NA-1株属于禽副粘病毒Ⅰ型,具有新城疫病毒速发型相似的毒力,属于强毒力毒株,遗传进化树分析属于基因Ⅶ新城疫病毒。该病毒对鹅、鸡均具有高致病性。     

鹅的生物学特性及饲养

一、生物学特性 1．喜水性。善在水中觅食、嬉戏和求偶交配，除育肥期外，在河流、浅滩、小溪、池塘有水处放养为佳。 2．合群性和生活节律。鹅喜群居和成群飞行，反应敏捷，能较快接受训练和调教，生活有规律。放牧、……     

鸡新城疫病毒S_1山东分离株的生物学特性研究

通过SPF鸡致病性试验、MDT、ICPI、血凝解脱速率和血凝素热稳定性试验 ,结果表明 ,从山东分离的鸡新城疫病毒S1株与Lasota、F4 8E8间存在生物学差异。对S1株的鸡胚增毒量进行了研究 ,结果显示 ,10 3 5EID50 接毒量既不影响病毒的增殖量也不影响其感染性     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒分离株生物学特性研究

对分离到的1株鸭源H9N2亚型禽流感病毒(NJ01株)的生物学特性进行了研究。研究结果显示:其静脉致病指数IVPI为0,脑内致病指数ICPI为0.26,血凝解脱时间NHAT为慢,血凝热稳定时间HOT为30 m in。以108.0ELD50/羽的剂量静脉感染26日龄非免疫鸭,可使40%鸭致死,且从攻毒后存活鸭1 d+2 d喉拭子中100%分离到该病毒;而以相同剂量静脉感染1月龄SPF鸡后不出现死亡,但攻毒后4~6 d的泄殖腔拭子中,均可100%再分离到该病毒。毒株血凝素基因的RT-PCR试验结果显示,与1997年香港3个分离株的同源性为94.8%~96.0%,其HA裂解位点处氨基酸序列为-RSSRG-。研究结果表明该NJ01株为低致病性禽流感病毒,属欧亚大陆分支,在SPF鸡及非免疫鸭体内均能很好地复制。     

猪瘟病毒生物学特性研究概述

阐述了猪瘟病毒与机体免疫系统的相互作用、在哺乳动物细胞中的增殖特点、与毒力相关基因的预测。概括了世界猪瘟病毒的基因分型、不同基因型毒株的分布情况和流行病学,分析了病毒的遗传变异特点与疫苗免疫前景,讨论了消灭猪瘟要面临的问题。     

小鹅瘟病毒YZ-0703株的分离鉴定及生物学特性研究

 从扬州郊区某鹅场死亡的、具有小鹅瘟典型病变的雏鹅肝、脾、肠病料组织中分离到一株病毒。经过试验鉴定,该毒株能与小鹅瘟阳性血清发生沉淀反应,通过电镜可以观察到典型的细小病毒样粒子;人工感染雏鹅,可引起发病和死亡,并与自然病例有相似的临床症状和病理变化。该毒株的鹅胚半数致死量（ELD50）为106.160.2 mL,最小致死量病毒致死鹅胚的平均时间(MDT)为93.6 h;结果表明,该野外分离病毒为小鹅瘟强毒株,命名为YZ-0703株。     

2株山西IBV分离株的生物学特性研究

[目的]控制地方鸡传染性支气管炎病的流行。[方法]通过IBV-21、IBV-22半数感染量(EID50)试验,鸡胚矮小化试验,干扰NDV LaSota复制试验,鸡胚气管环试验测定2毒株生物学特性。[结果]试验结果显示IBV-21的EID50为5×10-4.616·mL-1、IBV-22为5×10-6.5·mL-1;接毒胚明显病变,2株毒对鸡胚均有矮小化作用,对NDV LaSota有明显干扰,对鸡胚气管环试验病变明显,RT-PCR的方法扩增2分离株的S1基因的特异条带大小约为293bp。[结论]该生物学特性显示分离的2株病毒对鸡胚有明显致病作用且2毒株不是现存疫苗毒,为地方IBV疫苗研发奠定基础。     

新型黄病毒在种鹅中垂直传播的研究

[目的]证实新型黄病毒在种鹅中是否存在垂直传播,为控制该病提供可靠的流行病学依据.[方法]采用巢式RT-PCR和病毒分离技术,对患病种鹅病料、不同孵化阶段死胚、出雏蛋壳内部冲洗液、弱雏样品进行黄病毒分离及基因检测.[结果]在患病种鹅、孵化过程中死亡鹅胚尿囊液、出雏蛋壳内壁洗液和雏鹅中均能检测和分离到黄病毒,其中患病种鹅病料的黄病毒阳性率为100.0%,孵化死亡鹅胚黄病毒阳性率为39.6%,出雏蛋壳内部冲洗液黄病毒阳性率为45.0%;1日龄和15日龄弱雏黄病毒阳性率为80.0%.[结论]黄病毒可以通过鹅胚传到下一代,即新型黄病毒在种鹅中存在垂直传播的现象.     

线虫拮抗菌BC2000的分子鉴定及其GFP标记菌的生物学特性

用16S rRNA基因克隆及测序的方法对抗线虫生防菌BC2000进行分子鉴定,根据序列比对结果确定该菌株为粪产碱菌(Alcaligenes faecalis),并在GenBank中获得序列号AY662683.对gfp标记菌BC2001主要生物学特性进行分析,结果表明:与野生菌株BC2000相比,标记菌BC2001生长较慢;对温度的敏感性增强,但不影响菌株培养的最适宜生长温度和最适宜pH.而标记菌株BC2001在非选择性LB培养基中连续转接10次后外源基因gfp表达的荧光稳定性还保持在100%.     

猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–/EGFP~+,以此毒株与pMD-LA-RA进行第2次同源重组,筛选去除EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗传稳定性及免疫原性。【结果】通过2次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了PRV AH gE~–/gI~–,经PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株g E和g I基因被成功缺失,且不携带EGFP标记基因。生物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好。【结论】采用同源重组技术成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫苗奠定了一定的基础。     

NOD小鼠的遗传学特性和部分生物学特性观察

应用定期测定NOD小鼠的体重、血糖，统计繁殖特性，绘制生长曲线图，检测遗传位点，镜检病理学特征等方法，对NOD小鼠的遗传学特性和部分生物学特性进行了研究。结果显示：4－32周龄♀、♂小鼠有明显统计学差异（P＜0．01）。非糖尿病小鼠的受孕率为86．7％，而糖尿病小鼠的受孕率仅为53．3％，两组也差异显著（P＜0．05）。小鼠发病后体重随周龄的增长而急剧下降，至死亡时平均体重仅为发病前的60％。NOD（14♀）小鼠从发病到死亡的平均存活时间为22d。NOD小鼠只有在所有胰岛完全或近乎完全破坏时才发生糖尿病，若仍存有少量未萎缩的胰岛，其血糖水平维持于正常范围内。NOD小鼠在所检测的生化标志基因位点上，等位基因全部为纯合子，基因型一致，因某些位点不同程度地参与糖的代谢过程，可能导致糖尿病的发生。     

Screening and degradation characteristics of a tylosin-degrading strain

Antibiotics residues have been accumulating in the environment day by day due to overuse of antibiotics. Recalcitrant antibiotic residues, such as tylosin(TYL), can cause serious environmental problems, which makes it important to eliminate TYL from the environment. It is important to eliminate TYL from the environment. In this study, a strain was isolated and purified from fermentation by-product that came from a TYL production factory. The TYL degrading strain was identified by its morphology, physiological and biochemical reactions and sequencing the PCR-amplified fragments of its 16 S r DNAcoding genes. The temperature, shaking speed, initial TYL concentration, p H and inoculum sizes were investigated under simulated conditions by using single factor tests. The results showed that TYL2, a high efficient strain was isolated and was identified as Brevibacillus borstelensis. The degradation rate of TYL by this strain could reach to 75% with an initial concentration of 25 mg L~(–1) within 7 days under conditions of 7% B. borstelensis(v/v, 2×108 CFU m L~(–1)) at p H 7.0 and at 35°C. It is interesting that this strain has a very strong ability to degrade the TYL in natural sewage with the degradation rate of 65% within 7 days. This result could be helpful for the degradation of TYL and provide guidance for the degradation of other antibiotics.     

粉红聚端孢菌的生物学特性研究

在不同的温度、光照、酸碱度和营养等条件下对甜瓜主要采后致病菌———粉红聚端孢的菌丝生长和孢子萌发情况进行了研究.结果表明:病原菌菌丝生长温度范围为10~35℃,最适生长温度为25℃.病原菌菌丝在pH3~8的范围内均能生长,最适pH值为6.光照条件对菌丝的生长无显著影响.离体培养的营养试验中碳源以添加甜瓜汁液的培养基菌丝生长最好,其次为添加葡萄糖的培养基(PDA);氮源则以添加VB的培养基菌丝生长效果最好.孢子在无菌蒸馏水中的萌发温度范围为10~35℃,最适温度为25℃,此时孢子萌发率最高,为50%.孢子萌发的pH为3.0~8.0,但在pH值为4.0~7.0时萌发率较高.结果还表明,分生孢子在黑暗条件下萌发速度快且萌发率高.     

4个猕猴桃新品种生物学特性的观察比较

武汉植物园通过多年的实生、芽变以及杂交等多种育种手段,选育出多个优良性状的猕猴桃新品种,在我国猕猴桃产区进行区试、中试,并取得良好的经济效益和社会效应.2002～2004年,作者对武汉植物园培育的4个猕猴桃品种与传统"Hayward"在物候期、结果习性以及果实性状上进行了比较,结果显示,武汉植物园选育的4个猕猴桃新品种果肉颜色均为黄色,其中"金早"为极早熟品种,在武汉地区8月中旬成熟;"金霞"、"金桃"、"金艳"猕猴桃座果率高,Vc含量高,其中"金桃"、"金艳"猕猴桃综合性状优于传统猕猴桃品种"Hayward".     

加拿大一枝黄花白绢病(Sclerotium rolfsii)菌株SC64的生物学特性研究

在实验室条件下初步研究了加拿大一枝黄花白绢病菌株SC64的形态特征、致病性和生物学特性.结果表明:引起加拿大一枝黄花白绢病的病原物是罗氏白绢小菌核菌(Sclerotium rolfsii Sacc.);病菌最适生长培养基为Richard固体培养基和PDA.菌丝生长温度为15～40℃,最适30℃;在偏酸性条件下生长较好,生长适宜pH值为4.0-6.0,最适为5.0;在所测试的碳源中,对蔗糖的利用最好,对乳糖和半乳糖利用最差;氮源测试结果显示对蛋白胨和硝酸钾利用最好,对尿素的利用最差.菌核萌发温度为15-40℃,最适为30℃;菌核在含水量≥50%的麸皮基质上萌发较好;适宜萌发的pH值范围为3.0-9.0.菌丝的致死温度为45℃10 min,菌核的抑制萌发温度为50℃10 min.