蛹虫草栽培过程中胞外蛋白酶活性变化研究

以蛹虫草为试材,研究蛹虫草生长过程中子实体鲜重、培养基pH值、胞外酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的活性变化。结果表明:蛹虫草酸性蛋白酶的活性大小受氮源的影响,由112U/g提高至213U/g,但形成规律基本一致。胞外中性和碱性蛋白酶的活性高低及形成规律均受到氮源的影响。中性蛋白酶活性在氮源培养基中第30天达到最高峰,为10.2U/g,而在空白培养基上却未检测得显著的峰值。碱性蛋白酶活性受氮源的影响在第10天开始上升,至第50天达到最大值(10U/g)。在空白培养基上,碱性蛋白酶活性在第50天开始上升,培养结束时达最大值(6.5U/g)。这3种蛋白酶中,酸性蛋白酶活性与子实体的生长趋势相关性最大。该研究将为蛹虫草子实体生产的营养生理研究提供参考依据。     

两个香菇品种在冷藏过程中营养成分及相关酶类变化研究

对两个香菇主栽品种浙香6号和939在冷藏过程中总糖含量、蛋白含量、多酚氧化酶和蛋白酶变化趋势和规律的测定结果:在整个冷藏过程中,参与鲜菇褐变的多酚氧化酶的活性浙香6号同比均明显高于939,且在0～25天始终保持较高活性;对营养和风味品质的维持有较大关系的蛋白酶的活性,浙香6号先升后降,在3天时达到峰值,显著高于939。通过早期干扰蛋白酶活性变化,可对浙香6号鲜菇在长远运输中营养和风味品质的维持起较大作用,使25天时商品性状良好,35天时仍符合销售标准。     

香灰菌与银耳混合培养过程中酶系的相互作用

该实验对纯香灰菌(Hypoxylon sp.)培养及其与银耳(Tremella fuciformis)混合培养过程中的纤维素酶、淀粉酶、漆酶等培养原料基质降解相关酶变化规律进行了比较与分析。结果表明,香灰菌长满菌袋后淀粉酶与漆酶活力随着培养时间的延长逐渐下降,木聚糖酶活力在培养至15 d达到最大值5 000 U·m L-1,纤维素酶活力培养至5 d后,稳定在40 U·m L-1左右,可以有效降解木料培养基。银耳与香灰菌混合培养后,在固体培养过程中,其中胞外可溶性蛋白浓度和木聚糖酶、纤维素酶活力变化规律与香灰菌纯培养相似,而淀粉酶在培养至第10天达到最大值2 253 U·m L-1,其胞外可溶性蛋白浓度与木聚糖酶、纤维素酶和淀粉酶活力显著提高,漆酶活力培养至第5天达到最大值71.33 U·m L-1,随后迅速下降,蛋白酶活力变化情况与淀粉酶相似,第15天酶活力达到最大值3.05 U·m L-1。说明混合培养中两者具有互作效应,可以有效促进胞外蛋白的分泌,提高基质降解相关酶活力,促进菌体对基质的降解,提高养分的供应。该结果可为银耳优良菌种的选育,两者的配比以及栽培料的选择与优化提供科学依据。     

香菇酸性蛋白酶在S-PI抑制条件下的紫外差光谱

通常的酸性蛋白酶可分为两类,一类为 S-PI 敏感型,另一类为 S-PI 不敏感型。有报道认为在香菇培养中其胞内酸性蛋白酶属于前者,而胞外则属后者。同一组织中的蛋白酶对 S-PI 有不同的表现,这种现象目前尚未有清楚的解释,但 S-PI 能促进多种菇类子实体的形成,说明对 S-PI 敏感的酸性蛋白酶在担子菌的发育中起着重要的作用,虽有许多文章报道 S-PI 能促进担子菌子实体的形成,但在 S-PI 抑制酸性蛋白酶的机理     

黄绿蜜环菌液体培养几种胞外酶的测定

在黄绿蜜环菌(Armillaria luteo-virens)液体发酵培养过程中,对羧甲基纤维素酶(CMCase),漆酶(Laccase),淀粉酶(Starchase),过氧化物酶(Peroxidase),锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,MnP),蛋白酶(Prolease)六种重要的胞外酶间隔24h测定酶活力。结果如下:淀粉酶、锰过氧化物酶、羧甲基纤维素酶、漆酶和过氧化物酶的酶活均有较大变化,产酶高峰期也不同;菌丝体重量在第6天达最大值,可作为菌丝体(液体菌种)收获期。     

冬虫夏草菌液体发酵过程中酶活性的测定与分析

采用不同培养基人工培养冬虫夏草，并对其在发酵不同阶段低温活性物质——淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶的活力进行测定和分析。结果表明：①淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶的活力均随反应时间的延长而逐渐增加；②发酵12～54h，培养基Ⅱ中的淀粉酶、糖化酶、中性及酸性蛋白酶活力显著高于培养基Ⅰ；③发酵54～72h，培养基Ⅱ中的淀粉酶、糖化酶的活力仍然高于培养基Ⅰ，但培养基Ⅱ中的中性、酸性蛋白酶活力显著低于培养基Ⅰ。     

平菇品种间酶活性测定与分析

不同品种的平菇菌丝体在液体摇床培养条件下对培养基质中的脱脂牛奶,羧甲基纤维素钠和可溶性淀粉的降解能力有差异,表明品种间可溶性淀粉酶,羧甲基纤维素酶,胞外蛋白酶的活性有差异,为平菇杂交育种,品种鉴定提供了新的途径。     

五种羊肚菌液体培养过程胞外酶活性变化研究

检测了编号为M1、M2、M7、M8、10#羊肚菌菌丝体在液体培养基中生长时胞外酶的活性及培养液中糖与蛋白质的含量,同时观察了菌丝体生长情况。结果表明:菌丝体生长情况各不相同,10#在菌丝片的产生及菌丝成团最早,依次为10#M8M7=M2M1;与碳水化合物降解相关的酶(纤维素酶、淀粉酶)活性变化趋势基本相同,在发酵的第2~3天出现第1个峰值,并于第6天出现第2个峰值,且第1个峰值大于第2个峰值;在整个培养期内漆酶、愈创木酚酶、蛋白酶均有活性,产酶高峰也不尽相同;蛋白质、糖含量随时间变化且与酶活力相关。     

藁本提取物对2种柑桔贮藏病害病原菌的抑制作用研究

采用菌丝生长速率法,测定了藁本提取物对柑桔炭疽菌和柑桔绿霉菌的离体抑菌活性。结果表明,在藁本初提物浓度为3.500 mg/mL时,对绿霉病原菌抑制率为93.8%(培养3天)和85.4%(培养5天),对炭疽病菌抑制率为98.2%(培养3天)和91.71%(培养5天)。藁本提取物对炭疽菌的有效中浓度(EC50)分别为0.146 mg/mL(培养3天)和0.2109 mg/mL(培养5天);对柑桔绿霉菌的EC50为0.1544 mg/mL(培养3天)和0.3222 mg/mL(培养5天)。显微观察发现,藁本提取物处理后,2种病原菌菌丝出现扭曲、膨大、液泡增多、间隔改变及分枝增加等情况。藁本提取物抑菌活性的发现为进一步研究开发新型植物源农药提供了重要信息。     

金针菇液体菌种活力检测的生物标记物研究

通过研究金针菇液体菌种培养过程中酶活力与菌丝活力之间的对应关系,寻找一种能快速确定菌种活力的生物标记物。试验检测了金针菇液体菌种在不同培养天数产生漆酶、淀粉酶、蛋白酶的酶活力与菌丝生长活力,结果表明漆酶可以作为金针菇液体菌种活力检测的生物标记物。     

棘托竹荪深层发酵胞外酶活性的研究

以棘托竹荪菌株为试材,采用液体培养的方法研究棘托竹荪深层发酵过程中6种胞外酶的酶活性变化,并对菌丝生物量进行了测定。结果表明:酶活性与菌丝生物量增长有密切关系。菌丝生物量增加呈"S"曲线,第4~6天增长最快。棘托竹荪菌丝生物量达到最大值之前,羧甲基纤维素酶和淀粉酶活性出现峰值。过氧化物酶、漆酶、多酚氧化酶和蛋白酶的活性与菌丝生物量同步增加。说明发酵过程中棘托竹荪菌丝首先分解利用淀粉和纤维素,然后利用木质素和蛋白质作为碳源和氮源。要提高棘托竹荪深层发酵效率,缩短培养周期,就必须在其菌丝达到最大生物量之前保证碳源和氮源的均衡供给。可根据不同酶的分泌高峰期,确定菌丝的营养利用情况和发酵周期,以收获最大菌丝生物量。     

酶抑制剂对担子菌子实体形成的影响

大部分食用菌形成子实体需要较长的时间,因而最近正在不断地进行着以缩短子实体形成时间和工厂化四季生产为目标的用深层培养生产菌丝的探讨。笔者在培养基中添加2.5～5.0微克/毫升由放线菌制得的胃蛋白酶抑制剂(S-PI),培养漏斗棱孔菌(Favolus arcnlaricns),取得了缩短子实体成熟的天数和增加子实体数量的结果。另外,还探讨了营养生理特性与漏斗棱孔菌不同的食用菌如金针菇(Plammulina velutipes)和糙皮侧耳(Pleurotusostreatus)等。添加S—PI是否也有同样的效果?研究结果表明,S-PI亦能缩短子实体形成的天数,并增加子实体的数量,添加S—PI的最有效期为温度由高变低(27→17℃)后3～6天。     

食用菌酶学的应用研究

二、蛋白酶及其抑制剂蛋白酶的主要作用是催化分解肽键,使蛋白质降解成为小分子的蛋白胨,小肽或氨基酸物质。B.S.Harfley(1960)根据蛋白酶流动残基部分成四大类,丝氨酸、SH基、CH_3基和金属蛋白酶等酶(酶命名法1978)。但关于食用菌的蛋白酶的催化作用位点未见报道,一般还是按其酶的作用最适pH值,分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。蛋白酶通常认为是在基质中氮原有限的情况下,为了获得蛋白质中的氮素而产生的(North1982)。Schwalh(1977,1978)报道了蛋白酶会调节裂褐菌的发育,它能在内部积累和稳定地存在,其它真菌似乎也有相似的情恨。Leatham(1984),在研究香菇时发现,菌丝生长过程中,氮原先于碳原用完,而蛋白酶是在这些用完氮素的香菇菌丝体中被大量诱导出来的。其结果使可溶性总蛋白质大量丧失。Leathum认为香菇蛋白酶是在胞内一个特殊位置上和特定的时期里产     

猴头菌液体发酵产α-半乳糖苷酶工艺优化及其酶学性质

为优化猴头菌(Hericium erinaceus)液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件,研究其酶学性质。采用单因素实验和Box-Behnken设计原理设计实验,建立以酶活性为响应值的回归方程模型,采用Design-Expert得到最优液体发酵产酶工艺,采用硫酸铵沉淀初步纯化该酶,研究该酶的温度、pH特性及其对蛋白酶的抗性。结果表明:猴头菌发酵产酶的最佳发酵工艺为3%豆粕粉、2.3%葡萄糖、1.9%蛋白胨、0.3%MgCl_2,在此条件下猴头菌发酵液中的α-半乳糖苷酶活性提高了48.9%;该酶最适反应温度为60℃,最适pH为6.0,对胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶均表现出较好的抗性。     

香菇液体发酵过程中生理指标的检测分析

以香菇66#菌株为试材,采用液体发酵方法,研究了菌丝球数量、pH值、还原糖含量、氨基氮含量、纤维素酶活性、漆酶活性、蛋白酶活性等对香菇菌丝生长主要生理指标的影响。结果表明:当香菇菌株在26℃、160r/min摇床振荡培养至第8天时,菌丝球数量最多。此时,发酵液pH 6.5,还原糖和氨基氮含量分别为47.12mg/100mL和11.87mg/100mL,纤维素酶活性、漆酶活性和蛋白酶活性分别为1.25、0.023、0.18U。     

一株产酶真菌扁座壳孢菌形态学鉴定及培养条件优化

座壳孢(Aschersonia Montagne)是一类重要的虫生真菌,在其侵染害虫过程中产生的蛋白酶是重要毒力因子。本文通过分析子座形态及分生孢子、侧丝等数据,确定菌株WYSD-16为扁座壳孢(Aschersonia placenta Berk.et Br.)。为进一步开发研究该菌株,对其产蛋白酶最佳培养基和培养条件进行了研究。结果表明:该菌最佳产酶培养基:40g/L的麦芽糖,20g/L的蛋白胨,4×10-4mol/L Mg2+,400mg/L的VB6,p H值6.0;最佳产酶条件为:接菌量8ml,装液量150ml/250ml,菌龄5d,培养时间10d。     

桂花开放与衰老过程中花瓣蛋白酶活性与种类的变化

 以自然栽培条件下的桂花（Osmanthus fragrans）品种‘柳叶金桂’花瓣为试材,对其铃梗期、初花期、盛花期、盛花末期和萎蔫期的可溶性蛋白质和游离氨基酸含量及蛋白酶的活性和种类变化进行了检测。结果表明,伴随开花进程,花瓣可溶性蛋白质含量先增后减,游离氨基酸含量则持续上升37 ℃,最适pH为8.0;分光光度计法及底物胶电泳法检测时均发现,桂花开花与衰老过程中,花瓣总蛋白酶活性持续上升,在盛花末期达到峰值,至萎蔫期迅速下降;利用专一性酶抑制剂检测到花瓣衰老过程中的丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶3种蛋白酶,其中丝氨酸蛋白酶活性最强,约占总活性的65% ~ 75%;花瓣蛋白酶检测的最适温度为,是影响桂花花瓣衰老最主要的蛋白酶。     

蛋白酶抑制剂基因的杀虫机理及其应用

蛋白酶抑制剂（PI）是自然界含量最为丰富的蛋白种类之一，存在干所有生命体中（Laskowski，1980）。研究表明，这些蛋白酶抑制剂在植物对危害昆虫以及病原体侵染的天然防御系统中担当着重要角色（Ryan，1989）。昆虫饲喂实验发现，某些纯化的蛋白酶抑制剂具有明显的抗虫作用（Gatechouse等，1988；Chen等，1992）。利用蛋白酶抑制剂基因来提高植物的抗虫能力，已成为植物基因工程研究的一个热门领域。目前为止，在植物中发现有三类蛋白酶抑制剂：丝氨酸蛋白酶抑制剂，巯基蛋白酶抑制剂和金属蛋白酶抑制剂。其中对丝氨酸类蛋白酶抑制剂的…     

蘑菇发育贮存过程中蛋白酶的变化

蛋白酶在担子菌的生长发育过程中起着很重要的作用。Takao等认为,营养菌丝中蛋白酶在担子菌的子实体形成中起着很重要的作用。并且有报道说,在大多数担子菌的营养菌丝中都有蛋白酶,当香菇和金针菇的子实体形成能力变弱时,其蛋白酶活性达到最低水平。很显然,蛋白酶决定着担子菌机体中蛋白质的水平,同时也影响着机体中某些具有活性的酶类。另     

草菇蛋白酶的鉴定

草菇是我国食用菌主要栽培品种之一,属于典型高温真菌。低温将诱导草菇细胞内的蛋白质降解;造成草菇菌丝自溶、死亡。蛋白酶在草菇低温自溶过程中起了重要作用。在分离、纯化草菇蛋白酶的基础上,采用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白酶的分子量为23KD,并测定了蛋白酶不同温度下的活性变化曲线,为草菇低温自溶与蛋白酶之间关系 的研究奠定了基础。