籽用西瓜多糖的分离纯化、一级结构分析及体外生物活性研究

【目的】对籽用西瓜果实瓜瓤多糖进行单糖组成及其一级结构进行鉴定,分析其与生物活性的关系,以评价籽用西瓜多糖的利用价值。【方法】通过水提醇沉法提取籽用西瓜瓜瓤粗多糖,使用Sephadex-G75(葡聚糖凝胶柱层析-G75)和DEAE-Sepharose(DEAE-纤维素柱层析)色谱分离纯化粗多糖得到纯化多糖(SⅠ),利用高效液相色谱法(HPLC)测定其相对分子质量和单糖组成,再通过红外光谱和核磁共振进一步鉴定其一级结构,最后采用体外抗氧化试验和体外抑菌试验分析其生物活性。【结果】纯化多糖SⅠ的HPLC分析结果表明该多糖相对分子质量为1 747 Da,由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖7种单糖组成,摩尔比为2.4∶2.2∶6.6∶36.8∶32.1∶7.2∶12.7;红外光谱分析和核磁共振分析显示SⅠ含有糖类化合物、糖醛酸基团和吡喃糖环的特征吸收峰,多糖中葡萄糖和半乳糖为α-D构型,甘露糖为β-D构型,鼠李糖为β-L构型。SⅠ对羟自由基和DPPH自由基均有清除作用,对Fe~(3+)具有一定还原力。SⅠ对酵母菌有较好的体外抑制效果。【结论】籽用西瓜瓜瓤多糖由多种单糖组成,单糖构型多样,具有较好的抗氧化活性和抑菌活性,在食品和医疗保健等行业中具有很大的开发利用价值。     

代料和段木栽培瓦尼桑黄子实体分级醇沉粗多糖理化性质及活性

用20%、50%、70%乙醇分级醇沉栎树木屑代料栽培(DL)、桑树木屑代料栽培(DS)、柞树段木栽培二年生(D 2)和三年生(D 3)瓦尼桑黄(Sanghuangporus vaninii,以下简称桑黄)子实体粗多糖,并比较同一醇沉组分下,4种粗多糖的多糖含量、总酚含量、重均分子量分布、单糖组成、免疫活性和抗氧化活性。结果表明：就多糖含量而言,在3个醇沉组分中,50%醇沉组分的差异最显著,段木栽培D 2、D 3(54.56%、58.55%)高于代料栽培DL、DS(32.42%、33.56%)。就总酚含量而言,在20%醇沉组分中,DL、DS、D 2(10.65%、15.47%、15.70%)较高,而D 3在50%、70%醇沉组分中(9.98%、8.43%)均较高。就重均分子量而言,在3个醇沉组分中,与DL、D 2和D 3相比,DS的重均分子量均较小;在50%醇沉组分中,DL、D 2、D 3主要分布在1.359×10⁵、7.439×10⁴、6.823×10⁴;在70%醇沉组分中,DL、D2、D3主要分布在1.124×10     

尖顶羊肚菌多糖的超声波辅助提取工艺优化及其对肝损伤小鼠抗氧化活性的影响

采用正交试验优化超声波辅助提取尖顶羊肚菌(Morchella conica)多糖工艺,并分析多糖对肝损伤小鼠体内抗氧化活性.结果表明,在超声功率600 W、提取温度60℃、提取时间80 min、醇沉浓度70％、料液比1∶40(g∶mL)的条件下,多糖得率为(2.25±0.04)％.影响多糖得率的因素由大到小依次为超声功率、提取温度、料液比、乙醇浓度和提取时间.与CCl4诱导的小鼠急性肝损伤模型组相比,灌胃尖顶羊肚菌多糖处理组的肝组织中丙二醛含量显著降低、总抗氧化能力显著提高;血清中丙二醛含量显著降低、超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力显著增加.     

不同提取方法对桑黄胞内多糖理化性质的影响

采用不同方法提取桑黄(Phellinus igniarius)菌丝体粗多糖,超声辅助法提取粗多糖的得率最低,但多糖含量最高。复合酶法的粗多糖得率最高,但多糖含量低。单糖组成分析表明:不同提取方法得到粗多糖的单糖组成不同;复合酶法得到的粗多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖以及葡萄糖组成;超声辅助法得到的样品由甘露糖和葡萄糖组成;热水法得到的样品由木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其中葡萄糖含量比其它两种粗多糖样品高。红外和电镜扫描分析表明:不同提取法得到的桑黄粗多糖结构和形态各有差异。     

黄秋葵多糖结构分析及细胞毒性研究

以黄秋葵种子为试材,用水煮醇沉法提取黄秋葵多糖并纯化,研究分析了黄秋葵多糖的组分与结构,并对黄秋葵多糖的细胞毒性进行了研究.结果表明:通过提取得到的天然黄秋葵多糖中糖含量为28.15％,其主要有鼠李糖、阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖及D-葡萄糖等几种单糖成分;细胞毒性试验表明,黄秋葵多糖与葡萄糖的细胞毒性相近,属于低毒材料.     

香菇多糖Le-Ⅱ-2的分离纯化及其性质研究

采用水提醇沉法从香菇子实体中提取香菇粗多糖,Sevage法脱蛋白后,经DEAE柱层析、Sephdex G-200柱层析后得香菇多糖Le-Ⅱ-2组分.该组分经紫外和红外扫描证明其不含蛋白成分,并具有多糖的性质.     

桑黄多糖的分离纯化及体外免疫活性的研究

利用层析技术对桑黄子实体水提醇沉粗多糖进行了分离纯化,获得不同的组份.采用体外刺激小鼠脾淋巴细胞增殖试验对各组份进行了体外免疫活性的检测,结果表明,水提醇沉的各级粗多糖均有不同程度的体外刺激淋巴细胞增殖的作用;经过离子柱层析分离后,P30得到的各组份均是有活性的,P60得到的各组份中,0W和P60S2活性较好,0S1无活性;分别将P60W和P60S1进行了凝胶柱层析得到均一多糖P60W1-1和P60S1-1,免疫活性比较结果表明P60W1-1有活性,0S1-1无活性,说明有活性的均一多糖必须要从有活性的粗多糖中去分离纯化获得.     

不同产地毛头鬼伞子实体多糖特征及其刺激巨噬细胞产生NO的活性

用水提醇沉法从6个不同产地毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体中获得6种粗多糖,6种粗多糖得率及多糖含量差异较大,以湖北(HB)的最高,其次为云南(YN)的;各粗多糖分子量分布相似,单糖组成均以葡萄糖为主,并含有少量半乳糖;除福建(FJ)外,其余5种粗多糖均能增强小鼠巨噬细胞RAW264.7释放NO的产量,以YN和HN的活性较好,总体来说,YN的多糖产量及活性较好.     

醇沉条件对猴头菌多糖得率和品质的影响

以粗多糖得率和含量为评价指标,对水提醇沉制备猴头菌多糖(Hericium erinaceuspolysaccharides,HEP)工艺中主要醇沉条件进行了筛选,得出猴头菌多糖醇沉的最佳工艺条件:提取液的浓缩比(粗提液体积∶子实体干重,mL∶g)为3∶1,醇沉浓度70%,加入乙醇时浓缩液温度为40℃,醇沉时间和静置温度分别为8 h和4℃。不同醇沉浓度得到的多糖分子量分布及体外免疫活性测定结果表明,醇沉浓度为40%时,得到的多糖大分子部分占的比例较高,活性较好。醇沉浓度越高,多糖含有的小分子物质越多。     

可溶性固形物含量对制备猴头菇子实体多糖的理化性质及免疫活性的影响

调节猴头菇(Hericium erinaceus)浓缩液中可溶性固形物含量分别至2.5、18.5和35°Brix,经20%、50%、70%乙醇分级醇沉,得到9个猴头粗多糖样品,依浓缩液中可溶性固形物含量由低到高依次命名为20-1、20-2、20-3,50-1、50-2、50-3,70-1、70-2、70-3,用HPSEC-MALLS-RI和离子色谱分析其分子量分布和单糖组成,并研究了其体外刺激巨噬细胞释放NO的活性。结果表明,相同醇沉浓度下,随浓缩液中可溶性固形物含量的升高,得到的粗提物得率升高、但其中多糖含量呈降低趋势。可溶性固形物含量显著影响醇沉多糖的分子量分布、单糖组成及其摩尔比。在相同醇沉浓度下,随着浓缩液中可溶性固形物含量的降低,大分子量多糖所占比例显著增大。20%醇沉多糖刺激巨噬细胞释放NO的活性较50%和70%醇沉的多糖高,且随着浓缩液中可溶性固形物含量的升高醇沉多糖的活性呈降低趋势。     

紫芝子实体多糖的特征分析及其体外免疫活性

通过乙醇分步沉淀法从紫芝(Ganoderma sinensis)子实体水提取物中分离多糖,得到分步醇沉的粗多糖样品30E、50E和70E,比较了3个粗多糖样品的得率、多糖含量、单糖组成、重均分子量分布特征、刺激RAW 264.7细胞释放NO和促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性.结果表明:30E、50E和70E的多糖得率均较低,分别为0.04％、0.17％和0.49％;水解后的单糖种类基本相同,均有岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,但是单糖比例差异较大,70E中还含有3.4％的木糖;紫芝多糖的重均分子量分布范围较广,从1.450×104到1.276×107,30E中有2个大分子量组分(重均分子量分别为8.867×106和1.276×107),50E和70E的重均分子量较小(＜2×104);分步醇沉的各粗多糖样品均具有体外刺激巨噬细胞释放NO和促进小鼠脾淋巴细胞增殖的活性,其中30E的活性最好.     

短裙竹荪菌丝体多糖 DdM-S 提取及其性质

短裙竹荪菌丝体经热水提取，乙醇沉淀，去蛋白后得到粗多糖，经DEAE-Sephadex A-25柱层析进一步纯化，得到多糖纯品DdM-S。DdM-S.经聚丙烯酰胺凝胶电泳和Sephadex G-200柱层析，表明该多糖为单一物质。纸层析和气相层析分析表明，DdM-S.的单糖组成为D-葡萄糖，D-甘露糖和L-岩藻糖，其摩尔比为1．28：1．00：0．36。多糖的分子量约为199KD，红外光谱呈现出典型多糖的吸收峰。     

黄鳞多孔菌多糖提取和抗氧化活性的研究

采用水提醇沉法,通过单因素和正交试验,对提取黄鳞多孔菌粗多糖的最佳方法进行了筛选,并采用DPPH法对其抗氧化能力进行了测定。结果表明,提取黄鳞多孔菌粗多糖最佳工艺条件为微波时间4 min,料液比1∶45,提取次数2次,粗多糖的得率达到39.42 mg·g-1。当黄鳞多孔菌粗多糖溶液浓度为0.8 mg·m L-1时,抗氧化活性为42.86%,且提取液中粗多糖的含量与抗氧化活性成正比。     

醇沉法和膜分离法制备灵芝孢子多糖免疫调节活性比较

采用醇沉法和膜分离法制备灵芝（Ganoderma lucidum）孢子多糖，测定其得率、多糖含量、单糖组成，并通过迟发型变态反应、脾细胞抗体生成、碳廓清、NK细胞活性实验，考察灵芝孢子多糖的免疫调节活性。结果表明：膜分离法制备的灵芝孢子多糖得率高于醇沉法，为（4.61±0.28）%；两者多糖含量无显著差异。醇沉法、膜分离法制备的灵芝孢子多糖单糖组成均为鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和山梨糖，其摩尔比分别为0.34∶0.31∶1.44∶4.48∶3.35∶0.31和0.27∶0.10∶1.70∶6.08∶1.84∶0.31，均以葡萄糖为主要组成单糖。两种灵芝孢子多糖均能增强小鼠免疫调节活性。研究结果可为灵芝孢子多糖产业化提供参考。     

广叶绣球菌子实体细胞壁多糖特征及其体外激活Dectin-1受体活性

广叶绣球菌(Sparassis latifolia)子实体水提残渣经超微粉碎、热水提取、20%～90%乙醇逐级沉淀获得8个细胞壁多糖组分(20E、30E、40E、50E、60E、70E、80E和90E),对其得率、多糖含量、β-葡聚糖含量、分子量分布特征、单糖组成、体外免疫活性进行测定。结果表明:广叶绣球菌水提残渣超微粉水提物得率为20.80%,其多糖含量为78.16%;水提物经乙醇逐级沉淀所得组分中,20E的得率最高,占提取物总量的27.16%,其多糖和β-葡聚糖含量分别为82.58%和35.54%;其余各组分得率和β-葡聚糖含量均较低,其中30E、40E、50E、60E这4个组分的多糖含量较高,均达到80%以上,而70E、80E、90E的多糖含量为26.36%～52.55%。利用高效凝胶尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差折光检测仪联用法(HPSEC-MALLS-RI)对20E、30E、40E、50E、60E的分析结果显示,20E主要含有2个峰,其重均分子量分别为1.47×10~7和5.06×10~6;30E、40E、50E和60E组分均主要含有1个均一对称峰,且随着醇沉浓度的增加,其重均分子量逐级减小。单糖组成分析结果显示:20E、30E、40E、50E、60E中的多糖均主要由葡萄糖组成,另外还含有少量半乳糖、岩藻糖和甘露糖,葡萄糖的摩尔百分比均超过80%。20E、30E、40E、50E、60E都具有体外激活Dectin-1受体的活性,其中20E的活性最高。     

红菇子实体多糖的提取及其抗氧化活性研究

通过正交实验法优化了红菇子实体多糖热水浸提法的条件为水料比30,浸提温度60℃,浸提时间3h.在此提取条件下,提取率为4.33％.粗多糖经过DEAE-纤维素阴离子交换柱层析得到D1、D2、D3和D4四个组分.研究了红菇粗多糖及其各组分的还原能力、对·OH的清除作用以及清除NO2-的作用,以此来评价该多糖的抗氧化活性.结果表明,红菇多糖具有一定的还原力,对·OH具有明显的清除作用,在体外模拟胃液条件下对NO2-有一定的清除作用.     

野生松乳菇和野生红汁乳菇蛋白多糖的研究

 选用合适的溶剂、方法、条件从野生松乳菇和野生红汁乳菇中提取蛋白多糖。粗多糖经Sevage法脱游离蛋白、DEAE - 纤维素柱、SephadexG-100柱层析分离、纯化, 纯化的蛋白多糖进行紫外及红外光谱分析并测定蛋白质、多糖的含量及抗氧化能力。结果表明, 松乳菇蛋白多糖中蛋白质和多糖含量分别为24.53%和68.83%; 红汁乳菇中分别为15.53%和66.52% , 两蛋白多糖均具有体外抗氧化的能力。经鉴定松乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和甘露糖, 红汁乳菇蛋白多糖中单糖组成主要是葡萄糖、果糖和半乳糖。     

西藏地区几种野生食用菌粗多糖的提取与测定

采用水提醇沉法提取12种野生食用菌粗多糖，粗多糖得率为2．01％～7．12％，粗多糖纯度为11．80％～82．99％。     

灰树花多糖GFP75-2-2B的分离及其对刺激巨噬细胞释放NO的影响

利用DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析和Sephacryl凝胶柱层析对灰树花(Grifola frondosa)子实体水提醇沉粗多糖进行分离纯化,对分离纯化到的一种多糖GFP75-2-2B进行了分析.紫外光谱鉴定结果表明,GFP75-2-2B不含蛋白质、核酸和酚类成分;离子色谱分析表明其单糖组成为岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖,摩尔比为1.0∶1.3∶3.6∶4.0∶4.5.GFP75-2-2B对巨噬细胞株RAW264.7进行体外免疫活性的研究结果表明,GFP75-2-2B有明显刺激巨噬细胞分泌NO的活性.     

灰树花液体发酵及多糖提取优化研究

对灰树花液体发酵及多糖提取相关工艺进行优化研究。试验优选后的发酵培养基配方为豆饼粉0.75%,玉米粉2.5%,葡萄糖2.5%,蛋白胨1%,KH_2PO_40.1%,MgSO_4 0.05%,VB_1 0.001%,水1000 m L,p H自然。接种量10%,140 r/min,26℃培养,100 L罐发酵120 h,灰树花菌丝体生物量为21.97 g/L,灰树花粗多糖的总产率达到3.29 g/L。灰树花多糖提取方法的比较,结果表明采取超声辅助结合水提法提取灰树花粗多糖,效果较好:在料液比1∶10,25℃超声提取30 min后,进行水提;温度100℃,提取1.5 h,浓缩后醇沉制备粗多糖提取物。试验中粗多糖的提取率达到85%,提取物中粗多糖纯度达到65%。