bFGF对3-硝基丙酸处理的小鼠受精卵体外发育能力的影响

【目的】 研究在体外培养液中添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对3-硝基丙酸(3-NPA)处理的小鼠受精卵体外发育能力的影响, 为提高氧化应激早期胚胎体外发育质量提供参考。【方法】 在小鼠受精卵体外培养液中添加0、20、50、100和150 ng/mL bFGF, 培养24、48和96 h, 统计2-细胞率、4-细胞率和囊胚率, 筛选最佳bFGF处理浓度。经腹腔注射12.5 mg/kg 3-NPA生产氧化应激体内受精卵, 正常组小鼠腹腔注射等体积生理盐水, 将获得的受精卵分为添加或不添加bFGF组, 即3-NPA和3-NPA+bFGF组及对照组(C)和bFGF组, 培养到囊胚后, 用DCFH-DA检测胚胎内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, CMF2HC检测谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平, JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。【结果】 0、20、50、100和150 ng/mL bFGF组2-细胞率均无显著差异(P>0.05), 100 ng/mL bFGF组囊胚率显著高于其他各组(P<0.05), 150 ng/mL bFGF组4-细胞率和囊胚率均显著低于其他各组(P<0.05), 因此后续试验选用100 ng/mL bFGF。3-NPA+bFGF组4-细胞率显著高于3-NPA组(P<0.05), bFGF组囊胚率显著高于其他组(P<0.05)。bFGF+3-NPA组囊胚率显著高于3-NPA组(P<0.05);与对照组相比, 3-NPA组ROS水平显著升高(P<0.05), bFGF组ROS水平显著降低(P<0.05);3-NPA组GSH和线粒体膜电位水平均显著降低(P<0.05), bFGF组GSH和线粒体膜电位水平均显著增加(P<0.05)。bFGF+3-NPA组ROS水平显著低于3-NPA组(P<0.05), GSH和线粒体膜电位水平均显著高于3-NPA组(P<0.05)。【结论】 在体外培养液中添加100 ng/mL bFGF可减少3-NPA诱导的胚胎氧化应激、改善胚胎线粒体功能, 从而提高小鼠受精卵体外发育的能力。     

亲代三硝基丙酸诱导的氧化应激对胎鼠的影响

试验旨在研究氧化应激对子代小鼠产生的影响。对亲代的公鼠和母鼠分别腹腔注射12.5 μg/g三硝基丙酸（3-NPA），分为正常公鼠与正常母鼠交配的对照组（C）、正常公鼠与3-NPA处理的母鼠交配组（FM）、正常母鼠与3-NPA处理的公鼠交配组（MM）、3-NPA处理的公鼠与3-NPA处理的母鼠交配组（DM）共4组，试验重复3次。通过剖出胎鼠的方法统计子代胎鼠的数量，采集子代胎鼠的心脏、肝脏、肺脏3个器官，测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活力及总抗氧化能力（T-AOC）。结果显示，与对照组相比，FM组胎鼠数量下降不明显（P>0.05），MM和DM组胎鼠数量均显著减少（P<0.05）；FM与DM组胎鼠肝脏、肺脏中CAT活力均显著增加（P<0.05）；MM组胎鼠肝脏、肺脏中CAT活力增加，但差异不显著（P>0.05）；各组心脏中CAT活力均增加，但差异均不显著（P>0.05）；除MM组肺脏中T-AOC活力增加差异不显著（P>0.05），其余各组肝脏、肺脏和心脏中T-AOC活力均显著增加（P<0.05）；DM组胎鼠肝脏中GSH-Px活力显著增加（P<0.05），FM和MM组胎鼠肝脏中GSH-Px活力增加，但差异不显著（P>0.05）；FM与DM组胎鼠肺脏中GSH-Px活力显著升高（P<0.05）；各组心脏中GSH-Px活力均差异不显著（P>0.05）；DM组胎鼠肝脏、肺脏、心脏中SOD活力均显著增加（P<0.05），FM和MM组胎鼠肝脏、肺脏、心脏中SOD活力增加，但差异均不显著（P>0.05）。因此，试验成功构建3-NPA氧化应激小鼠模型，且亲代雄性小鼠氧化应激对胎鼠影响较大。     

水牛发情周期生殖激素变化规律及唾液结晶的分析

试验对水牛发情周期血清和唾液中雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)的浓度变化规律、水牛唾液结晶与卵泡发育变化分别进行了分析研究,为进一步探讨水牛发情规律、指导生产提供依据。采用酶联免疫分析法(ELISA)测定发情母水牛血清和唾液中E_2和P_4的浓度变化,并对血清和唾液的激素变化规律进行相关性分析。结果表明,水牛血清和唾液中的E_2和P_4呈波动性变化。发情前期,唾液中P_4浓度一直维持在6.50～7.10 ng/mL,发情第13天达到11.09 ng/mL,随后快速下降。唾液中E_2浓度在发情第3～5天出现一个峰值178.53 pg/mL,在第14～17天唾液中E_2浓度显著升高,出现第二个峰值179.10 pg/mL。母水牛唾液中E_2和P_4浓度的变化趋势与其在血清中的变化趋势基本一致,均呈显著相关(P0.05);唾液中E_2与P_4浓度呈极显著相关(P0.01)。水牛发情当天唾液结晶呈现明显的蕨类作物形状且分维值显著低于其他时间点(P0.05)。水牛发情周期唾液结晶图形的变化与卵巢卵泡发育基本同步,可作为监测水牛发情及预测排卵的可靠指标之一。     

水牛发情周期生殖激素变化规律及唾液结晶的分析

试验对水牛发情周期血清和唾液中雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)的浓度变化规律、水牛唾液结晶与卵泡发育变化分别进行了分析研究,为进一步探讨水牛发情规律、指导生产提供依据。采用酶联免疫分析法(ELISA)测定发情母水牛血清和唾液中E_2和P_4的浓度变化,并对血清和唾液的激素变化规律进行相关性分析。结果表明,水牛血清和唾液中的E_2和P_4呈波动性变化。发情前期,唾液中P_4浓度一直维持在6.50～7.10 ng/mL,发情第13天达到11.09 ng/mL,随后快速下降。唾液中E_2浓度在发情第3～5天出现一个峰值178.53 pg/mL,在第14～17天唾液中E_2浓度显著升高,出现第二个峰值179.10 pg/mL。母水牛唾液中E_2和P_4浓度的变化趋势与其在血清中的变化趋势基本一致,均呈显著相关(P<0.05);唾液中E_2与P_4浓度呈极显著相关(P<0.01)。水牛发情当天唾液结晶呈现明显的蕨类作物形状且分维值显著低于其他时间点(P<0.05)。水牛发情周期唾液结晶图形的变化与卵巢卵泡发育基本同步,可作为监测水牛发情及预测排卵的可靠指标之一。     

桦木酸对Dex致小鼠氧化损伤的保护作用

为了研究桦木酸(betulinic acid,BA)对地塞米松(dexamethasone,Dex)致氧化损伤的保护作用。将35只健康雄性KM小鼠随机分为5组,即对照组、Dex组、BA低、中、高剂量(0.25、0.5、1 mg/kg)+Dex组。对照组和Dex组灌服1%的可溶性淀粉,其余各组灌服混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA,1次/d,连续14d后,除对照组注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射地塞米松(25 mg/kg)诱导氧化应激模型。15h后,处死小鼠,收集淋巴器官和肝脏。检测小鼠淋巴细胞的活性以及活性氧(ROS)水平,肝脏、脾脏和胸腺的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果显示,BA预处理后,能显著降低Dex诱导氧化损伤小鼠ROS水平和MDA含量,提高脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的活性,增强小鼠SOD和GSH-Px活性,且呈量效关系。表明BA能加速细胞清除活性氧自由基,增强小鼠抵抗氧化损伤的能力,对Dex诱导的氧化损伤有一定的保护作用。     

山奈酚对三硝基丙酸诱导氧化应激胎鼠的影响

试验旨在研究山奈酚对三硝基丙酸诱导亲代小鼠氧化应激从而对子代胎鼠氧化应激和抗氧化能力的作用。42只亲代小鼠分为3组:对照组、氧化应激模型组、抗氧化剂组,试验重复3次。测定妊娠20 d后的子代胎鼠肝脏、肺脏和心脏3个器官中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活力。结果显示,山奈酚显著代偿降低子代胎鼠心、肝、肺相关抗氧化酶的活力(P<0.05),显著降低氧化应激产物的含量(P<0.05)。研究表明,山奈酚对于由三硝基丙酸诱导的亲代小鼠氧化应激模型的子代胎鼠氧化应激情况具有一定的抗氧化作用。     

衰老对小鼠卵巢颗粒细胞DNA甲基化及氧化应激水平的影响

为了研究衰老对小鼠卵巢颗粒细胞基因组DNA甲基化及氧化应激水平的影响，试验选取6周龄(年轻组)、40周龄(衰老组)的健康雌性KM小鼠各50只，分别收集卵巢颗粒细胞进行体外培养，利用荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平，用总超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒检测细胞内SOD及GSH-Px活性，采用qPCR扩增方法检测了氧化应激相关基因的表达水平，并检测了细胞内DNA甲基化水平。结果表明：与年轻组相比，衰老组细胞的ROS水平显著升高(P<0.05),颗粒细胞中GSH-Px、SOD基因的表达量及SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.05);年轻组与衰老组基因组DNA甲基化水平差异不显著(P>0.05)。说明衰老小鼠颗粒细胞的抗氧化能力降低，氧化应激水平升高，但基因组DNA甲基化水平并未发生变化。     

低氧环境下菊苣酸对SD大鼠心肌组织低氧适应性的影响

旨在研究低氧环境下不同浓度菊苣酸(chicoric acid, CA)对SD大鼠心肌组织低氧适应性的影响。选取60只6～8周龄、体质量为(192.00±7.35) g的健康雄性SD大鼠(P<0.05),随机分为对照组、不同浓度CA组(10,20,40 mg/kg),每组15只，连续灌胃49 d。灌胃50 d时采集SD大鼠心脏，并测定各组大鼠心肌组织活性氧(ROS)含量，抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(CAT)活性，线粒体功能相关指标线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性，能量代谢相关指标Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性及低氧适应基因缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、促红细胞生成素(EPO)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA及蛋白表达情况。结果显示：与对照组相比，不同浓度CA组显著降低ROS活性(P<0.05);显著降低MDA含量(P<0.05),显著提高SOD、GSH-Px、CAT活性(P<0.05);显著提高线粒体呼...     

替唑尼特对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激及炎症因子的影响

本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)建立氧化应激模型,探讨替唑尼特(TIZ)的抗氧化和抗炎效果。培养RAW264.7细胞,给予LPS(1μg/m L)刺激并用TIZ(25、50、75、100μmol/L)作用。MTT法检测细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测TIZ对ROS生成的影响;同时,检测MDA的生成量以评估TIZ对脂质氧化的影响;检测GSH的含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性以评估TIZ对细胞抗氧化系统的影响;检测IL-6的分泌和COX-2的表达量以评估TIZ对炎症细胞因子的作用。结果显示LPS刺激后细胞表现出显著性的氧化应激效应,而给予TIZ处理后,ROS和MDA生成量呈剂量相关性的显著下降;细胞IL-6的分泌和COX-2的表达量也随TIZ处理而显著下降,而GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px活性在TIZ处理后却呈剂量相关性的显著性上升。因此,TIZ可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症反应,这为TIZ的作用机制研究以及应用奠定了基础。     

紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用

为探究紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用及相关蛋白表达的影响。选择60只SD大鼠按照随机分组方法分成对照组、不同质量浓度组(10、20、40 mg/kg),每组15只,进行饲养试验。饲养结束后,麻醉并取出心脏,检测心肌组织各生化指标及免疫组织化学染色对心肌组织做病理检测。SD大鼠随着添加紫锥菊提取物浓度增加,SD大鼠氧化应激指标ROS含量和MDA含量呈现逐渐降低的趋势,添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠ROS和MDA显著低于对照组(P<0.05);SD大鼠抗氧化指标SOD、GSH-Px和CAT活性呈现逐渐升高的趋势,添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠SOD、GSH-Px和CAT显著高于对照组(P<0.05);SD大鼠呼吸链复合体Ⅰ和呼吸链复合体Ⅲ活性呈现逐渐升高的趋势,显著上调线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05);SD大鼠Ca²⁺-ATP酶呈现逐渐升高的趋势,添加20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠Ca²⁺-ATP酶显著高于对照组(P<0.05)。不...     

一种新的氧化应激特征性哮喘模型的建立

为了模拟外源氧化性物质对哮喘的影响,用卵清蛋白(OVA)致敏、H_2O_2及OVA联合激发的方式建立一种新的氧化应激特征性哮喘模型。试验于第0、7、14天用OVA腹腔注射小鼠致敏,第23~27天用OVA和H_2O_2联合滴鼻激发小鼠,末次激发24h后取BALF和肺组织,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IL-13浓度,荧光探针法检测肺组织中ROS水平,WST-8法检测肺组织中SOD水平,RT-PCR方法检测CAT和NOX-2mRNA相对表达水平,HE染色法观察肺组织基本病理变化。结果显示,H_2O_2能显著增加OVA诱导的IL-4、IL-5、IL-13浓度(P0.05),极显著促进OVA诱导的ROS和NOX-2的表达(P0.01),显著抑制OVA诱导的SOD和CAT的活性(P0.05),引起肺组织氧化/抗氧化平衡严重失调,明显加重OVA诱导的肺组织病理变化。说明H_2O_2和OVA联合激发可成功建立氧化应激哮喘模型。     

镉对大鼠大脑皮质神经细胞的氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸的保护效应

为研究镉对新生大鼠原代大脑皮质神经细胞的脂质过氧化损伤及N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)的保护效应,对神经细胞用不同浓度(0,5、10、20 μmol/L)醋酸镉染毒和NAC(100 μmol/L)进行保护,检测细胞内活性氧(ROS)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氩酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量.结果表明,与时照组比较,染毒组细胞内ROS水平、MDA含量和CAT活性极显著升高(P＜0.01),GSH-Px活性降低,20μmol/L组出现显著差异(P＜0.05);NAC保护组与相应染毒组比较,ROS水平、MDA含量和CAT活性呈不同程度降低,部分组间出现显著差异(P＜0.05);说明镉有促进神经细胞脂质过氧化的作用,NAC可提高神经细胞的抗氧化能力,对镉暴露所致的脂质过氧化损伤有一定的保护作用.     

桦木酸对环磷酰胺致小鼠免疫器官氧化损伤的保护作用

为了研究桦木酸(BA)对环磷酰胺(Cy)诱导小鼠免疫器官氧化损伤的影响。将50只健康雄性昆明小鼠随机分为5组,即对照组、Cy组及0.05、0.50、5.00 mg/kg BW BA组。对照组和Cy组灌服1%的可溶性淀粉溶液,其余各组按不同剂量的BA灌服,连续14 d后,除对照组注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射Cy(50 mg/kg BW)诱导氧化应激模型。收集血清、脾脏和胸腺,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)含量,检测脾脏和胸腺超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果显示:1)对于体重,对照组与Cy组无显著差异(P0.05),各剂量BA组与Cy组无显著差异(P0.05)。2)与对照组相比,Cy极显著提高了血清AST、ALT活性(P0.01),而5.00 mg/kg BW BA极显著缓解了这一现象(P0.01)。3)与对照组相比,Cy引起了脾脏指数和胸腺指数的显著降低(P0.05),而0.05 mg/kg BW BA显著缓解了胸腺指数的降低(P0.05)。4)与对照组相比,Cy组胸腺SOD活性、胸腺CAT活性、脾脏GSH含量显著或极显著下降(P0.05或P0.01),脾脏MDA含量极显著升高(P0.01);与Cy组相比,0.50 mg/kg BW BA组显著或极显著提高了脾脏和胸腺GSH-Px和CAT活性及脾脏GSH含量(P0.05或P0.01),极显著降低脾脏M DA含量(P0.01),但极显著降低了胸腺SOD活性(P0.01);与Cy组相比,5.00 mg/kg BW BA组显著或极显著提高了脾脏和胸腺GSH-Px和CAT活性(P0.05或P0.01),极显著降低脾脏MDA含量(P0.01)。由此可见,BA能够改善Cy引起的小鼠免疫器官的氧化应激,对Cy诱导的氧化损伤有预防性的保护作用。     

微囊藻毒素-LR对猪体外成熟卵母细胞氧化损伤与凋亡的影响

旨在探讨微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对体外成熟猪卵母细胞的毒性损伤及其潜在损伤机制。本研究从屠宰场所获得的猪卵巢中收集GV期卵母细胞,将其随机分为4组,在卵母细胞体外成熟培养液中分别添加0、20、40和60μg·mL~(-1) MC-LR,研究MC-LR对卵母细胞第一极体(PbI)排出、纺锤体结构以及细胞内活性氧(ROS)、早期凋亡蛋白(Annexin V)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响,并采用RT-qPCR分析氧化应激和凋亡相关基因SOD1、SOD2、CAT、GSH-Px、Bax和Bcl2 mRNA的表达变化情况,试验重复3次。结果发现,MC-LR处理导致猪卵母细胞PbI排出率呈浓度依赖性下降,当MC-LR添加浓度达40μg·mL~(-1)以上时,卵母细胞成熟率极显著下降(P0.01),且纺锤体结构异常率极显著升高(P0.001);进一步研究发现,MC-LR处理后卵母细胞ROS水平极显著升高(P0.01),而GSH-Px活性极显著降低(P0.01),并伴随着抗氧化相关基因SOD1、CAT及GSH-Px mRNA表达极显著下调(P0.01);细胞凋亡检测表明,MC-LR处理可导致卵母细胞早期凋亡率极显著增加(P0.01),凋亡相关基因Bax/Bcl2比值极显著升高(P0.001)。研究结果表明,MC-LR可诱导猪卵母细胞纺锤体结构异常,并引发氧化损伤与细胞凋亡,最终导致卵母细胞成熟能力下降。     

E_2和P_4浓度在奶牛发情周期中与卵泡发育对比分析

选择从澳大利亚购进的2岁左右发情周期为21天的育成母牛10头,用放射免疫测定法(RIA)测定发情周期血清中孕酮(P_4)和17β-雌二醇(E_2)的浓度,用B-型超声波诊断仪检测发情周期卵巢卵泡发育变化,结果显示:E_2浓度在奶牛发情周期中主要表现出两个波峰,只是其中一个波峰较小,这与卵泡两个发育波态势相似,而P_4在发情周期中却只表现出一个波峰,与卵泡两个发育波部分相似。     

灵芝多糖对运动诱导氧化应激作用的研究

为了研究灵芝多糖对运动诱导氧化应激的作用,试验采用小鼠力竭运动模型,将小鼠随机分为1个对照组与3个灵芝多糖治疗组,治疗组分别灌胃75,150,300 mg/kg灵芝多糖,对照组给予纯化水,连续灌胃28 d,末次灌胃30 min后进行力竭游泳试验,测定力竭游泳时间及乳酸、糖原、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)等生化指标。结果表明:灵芝多糖能延长小鼠力竭游泳时间,降低血乳酸与肝脏、肌肉器官/组织中MDA含量,增加肝脏、肌肉器官/组织中糖原含量、SOD、GSH-Px、CAT活性。说明灵芝多糖能提高机体运动耐力,具有抗疲劳作用;能上调机体抗氧化酶活性,降低脂质过氧化反应,对力竭运动诱导的氧化应激及氧化损伤具有保护作用。     

没食子酸对D-半乳糖致雄性小鼠肝脏损伤的保护作用

为研究没食子酸对D-半乳糖致小鼠肝脏损伤的保护作用,60只ICR雄性小鼠随机分为6组。保留10只为正常对照组,剩余小鼠以D-半乳糖诱导氧化应激模型,建模成功后将小鼠随机分为模型组、阳性对照组、没食子酸低、中和高剂量组。30 d连续灌胃后测定小鼠抗氧化性能指标。结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)含量显著降低,丙二醛(MDA)和过氧化氢(H_2O_2)含量显著升高(P<0.05);没食子酸能提高SOD、GSH-Px、T-AOC和CAT活性,降低MDA和H_2O_2含量(P<0.05),改善了D-半乳糖引起的Nrf2和HO-1 mRNA水平降低。表明没食子酸对D-半乳糖所致的肝组织损伤有一定的改善作用,机制可能与抗氧化作用同时激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达

为探讨卵泡期卵泡颗粒细胞促卵泡素特异性受体(FSHR)差异剪接体表达的变化,选择30只道寒杂交一代育成母羊肌注PG+埋植CIDR+肌注PG进行同期发情处理,选取9只发情母羊屠宰,取两侧卵巢组织,按小卵泡(≤3.0 mm),中等卵泡(3.0～5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)级别分别收集卵泡液和颗粒细胞,采用放射性免疫法测定类固醇激素(E_2和P_4)和FSH浓度,实时定量PCR检测不同直径卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体表达水平。结果表明,小卵泡和中等卵泡中FSHR1和FSHR3 mRNA的表达量极显著高于FSHR2和FSHR4(P0.01),在中等卵泡中FSHR3 mRNA的表达量显著高于FSHR1(P0.01);大卵泡中FSHR2 mRNA的表达量显著高于FSHR1、FSHR3和FSHR4(P0.01),FSHR1、FSHR3和FSHR4 mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。大卵泡中雌激素浓度极显著高于小卵泡和中等卵泡(P0.01),孕酮浓度无显著性差异(P0.05),E_2/P_4比值与大卵泡中FSHR3 mRNA的表达量呈极显著负相关(P0.01)。由结果可知,卵泡发育过程中FSHR1和FSHR3可能是小卵泡和中等卵泡颗粒细胞增殖的2种主要剪接形式。     

小鼠卵巢EGFR表达检测及EGF提高小鼠超数排卵效果研究

在检测发情周期不同阶段小鼠卵巢表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的基础上,利用小鼠卵巢组织学、胚胎回收与胚胎体外培养方法,研究超数排卵前腹腔注射表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠超数排卵效果的影响。结果显示:(1)EGFR在卵巢内主要定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期。(2)对发情前期和间情期小鼠按照每克体质量5、10、20、40ng的EGF进行腹腔注射,24h后注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)进行超数排卵处理。发情前期小鼠在EGF注射后24h,卵巢切面已有较多的有腔卵泡分布,而间情期小鼠直到PMSG注射后24h,卵巢切面上才可观察到较多的腔前卵泡和有腔卵泡,且发情前期和间情期小鼠卵巢切面上有腔卵泡数量呈EGF剂量依赖性增多。(3)小鼠注射20ng/g EGF预处理24h,超排配种后见栓鼠的2-细胞胚胎回收数最高(P0.05);当EGF剂量超过40ng/g时,胚胎回收数降低;发情前期各组小鼠2-细胞胚胎回收数均低于对应EGF注射剂量间情期小鼠组的。(4)各组2-细胞胚胎体外囊胚发育率无显著性差异(P0.05)。研究结果表明,小鼠卵巢组织中EGFR定位于腔前卵泡、有腔卵泡的颗粒细胞和卵丘细胞,间情期、发情前期和发情期小鼠卵巢EGFR阳性反应均强于发情后期的;超排前24h腹腔注射20ng/g EGF,可获显著提高间情期和发情前期小鼠的超数排卵效果,并且不影响胚胎的发育潜能。     

黄芩苷对热应激小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

研究旨在探讨黄芩苷对热应激小鼠卵巢抗氧化和细胞凋亡的作用机制。将小鼠分为常温对照组(生理盐水)(C组)、黄芩苷(50 mg/kg体重)组(C+B组)、41℃热应激组(H组)和热应激加黄芩苷(50 mg/kg体重)组(H+B组),连续注射7 d,第8天41℃热应激2 h,立即处死,取卵巢组织进行切片观察并检测丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活力。Western Blot检测Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达。免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase 3蛋白表达。结果显示,热应激引起小鼠卵巢组织氧化损伤。黄芩苷能显著降低组MDA和NO含量,显著或极显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。此外,热应激可显著增加Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达,黄芩苷干预后Nrf2等蛋白的表达降低。黄芩苷干预后Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2、Caspase 3蛋白表达显著升高。上述表明,黄芩苷能缓解热应激下小鼠卵巢组织的氧化损伤及细胞凋亡,其机制可能与提高抗氧化能力及Nrf2蛋白的表达有关。