二氢杨梅素-镍配合物的合成及其细胞毒性初探北大核心CSCD

本试验在合成二氢杨梅素-镍配合物(DMY-Ni)的基础上探讨其作为饲料添加剂的饲用安全性。以二氢杨梅素(DMY)和乙酸镍为原料,采用加热回流法合成DMY-Ni,通过紫外光谱、红外光谱对其进行表征。采用噻唑蓝(MTT)法,研究不同浓度(10、20、40、80和160μg/m L)、不同作用时间(12、24、36和48 h)下,DM Y与DM Y-Ni对小鼠正常肝实质细胞AM L12增殖的影响。结果显示:DM Y与镍离子配合后可生成DM Y-Ni。10、20和40μg/m L DM Y或DM Y-Ni分别作用AM L12细胞48 h后,AM L12细胞的存活率与空白对照组差异不显著(P>0.05);80μg/m L及以上浓度的DMY-Ni作用AML12细胞48 h后,AML12细胞的存活率显著低于空白对照组(P<0.01或P<0.001),160μg/m L的DMY作用AML12细胞48 h后,AM L12细胞的存活率显著低于空白对照组(P<0.01)。随DM Y或DM Y-Ni浓度的增加和作用时间的延长,AML12细胞的存活率逐渐降低。DMY与DMY-Ni对AML12细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为285.10、222.84μg/m L。由此得出,DMY与DMY-Ni对AML12细胞都具有相对低毒性,且DMY-Ni对AML12细胞的毒性较DMY稍有增加。     

玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞炎症相关因子mRNA表达和活性的影响

本试验旨在探讨玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)对仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症相关因子m RNA表达和活性的影响。试验选取不同浓度(0~80μg/m L)ZEN处理IPEC-J2细胞12、24、48 h,CCK-8法检测细胞存活率并计算得出半数抑制浓度(IC50)。根据IC50选取用不同浓度ZEN(0、5、10、15μg/m L)处理细胞12、24、48 h,倒置显微镜下观察细胞形态,RT-PCR法测定炎症相关因子NF-κB、COX-2、PGES、IL-6、IL-8m RNA的表达量,ELISA方法检测炎症相关因子的活性。结果表明:ZEN以时间和剂量依赖性降低IPEC-J2细胞存活率,12、24、48 h ZEN的IC50分别为41.09、28.54、19.85μg/m L;随ZEN浓度升高和处理时间的延长,细胞形态被逐渐破坏;除COX-2的m RNA表达量和活性在12 h随ZEN浓度升高而升高外(P0.05),炎症相关因子m RNA表达量和活性均随ZEN浓度的升高呈先升高后降低(P0.05);ZEN浓度和处理时间对炎症相关因子m RNA表达量和活性的影响均有极显著的交互作用(P0.001)。以上结果表明,ZEN能降低细胞存活率,破坏细胞形态,ZEN对细胞炎症相关因子m RNA表达和活性具有双向调节作用。     

肉苁蓉正丁醇萃取物对阿霉素造HKC细胞损伤的影响研究

目的:研究不同浓度肉苁蓉正丁醇萃取物对阿霉素造人正常胚肾上皮细胞株(HKC)细胞损伤的影响。方法:用不同浓度肉苁蓉的正丁醇萃取物,分别在不同时间作用于阿霉素(Dox)造HKC细胞体外损伤模型,并设空白对照和阴性对照,采用MTT比色法测定细胞存活率;采用流式细胞仪碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期分布。结果:阴性对照组与空白对照组比较,各药物处理组与阴性对照组比较,各药物处理组组间比较,细胞存活率均差异显著(P0.05);各组内用药48 h、72 h分别与作用24 h比较,各组内作用72 h与作用48 h比较,细胞存活率差异显著(P0.05);细胞G_0/G_1期和G_2/M期分布,阴性对照组与空白对照组比较,差异显著(P0.05),不同浓度肉苁蓉正丁醇萃取物处理组(1 600μg/mL、800μg/mL、400μg/mL)分别与阴性对照组比较,差异均显著(P0.05)。结论:肉苁蓉正丁醇萃取物可在短时间内对Dox造HKC细胞凋亡的毒性有明显抑制作用,且具有浓度依赖性,其作用机制可能是通过抑制Dox阻断细胞进一步分裂进入下一个细胞周期,促进HKC细胞增殖。     

内质网途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

为了探究内质网途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中的作用。取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250μg/m L硫酸黏菌素的DMEM培养液作用24 h,透射电镜观察PC12细胞凋亡,Western blot法检测Gn RP78、caspase-12、Caspase-3蛋白表达量,Fluo-3/AM检测细胞内[Ca~(2+)]i浓度变化,钙测定试剂盒检测细胞外[Ca~(2+)]i浓度变化。与对照组相比,125、250μg/m L硫酸黏菌素剂量组PC12细胞出现典型凋亡现象,使PC12细胞内[Ca~(2+)]i浓度,Gn RP78、caspase-12、Caspase-3蛋白表达量显著升高(P0.01);细胞外[Ca~(2+)]i浓度显著降低(P0.01),具有剂量-效应关系。说明通过内质网途径介导的PC12细胞凋亡可引发硫酸黏菌素的神经毒性。     

蚓激酶对正常与软脂酸诱导的人肝细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度蚓激酶(EFE)在体外对LO2细胞株(人正常肝细胞)及软脂酸(PA)诱导的LO2细胞增殖的影响及EFE的最佳作用浓度。方法:用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)EFE作用于LO2细胞,分别在作用6 h、12 h、24 h,通过MTT法检测各组细胞的OD值;用20μg/m L的PA作用LO2细胞24 h,然后用不同浓度(100 u/m L、200 u/m L、400 u/m L、600 u/m L、800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE进行干预,并于6 h、12 h、24 h检测细胞增殖情况。结果:200 u/m L、400 u/m L的EFE可促进LO2细胞的增殖,但无统计学意义,高浓度(800 u/m L、1 000 u/m L)的EFE能明显抑制LO2细胞的增殖(P0.05),且其抑制作用随着时间的延长而增强;低浓度(100 u/m L)的EFE可促进经PA诱导的LO2细胞的增殖,其作用效果显著(P0.05);200 u/m L、400U/m L的EFE对经PA诱导的LO2细胞的促进作用极显著(P0.01)。结论:EFE能缓解PA诱导的细胞损伤,对PA诱导的LO2细胞具有保护作用,且其最佳作用浓度为400 u/m L。     

大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响

本文旨在研究大豆异黄酮对高温下体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖和抗氧化能力的影响,采用细胞培养方法,将奶牛乳腺上皮细胞分为4组,分别在细胞基础培养基中添加0、10、100μg/m L和1000μg/mL的大豆异黄酮,各组细胞正常(37℃、5%CO2)培养48 h后,在42℃下处理1.5 h,再正常培养12 h检测相关指标。结果发现:(1)与0μg/mL组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞活性显著升高(P 0.05)。(2)与0μg/m L组相比,10～1000μg/mL大豆异黄酮组细胞活性氧(ROS)的浓度显著降低(P 0.05)。(3)与0μg/mL组相比,100μg/m L和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著升高(P 0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量显著下降(P 0.05)。(4)与0μg/m L组相比,100μg/mL和1000μg/mL大豆异黄酮组细胞内Caspase3和Bax基因的相对表达显著降低(P 0.05),而Bcl-2基因的相对表达显著升高((P 0.05)。综上所述,大豆异黄酮能够通过增强奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力,抑制细胞凋亡,进而促进细胞增殖。     

蓝刺头多糖B对INS-1细胞氧化损伤的保护作用

旨在探究蓝刺头多糖B(ETPB)对H_2O_2造成的INS-1细胞氧化损伤的保护作用。体外培养INS-1细胞,通过采用MTT法检测细胞存活率,筛选出50μmol/L H_2O_2作用24 h可建立氧化损伤模型,并确定ETPB的最大安全浓度为250μg/mL;ETPB(15.6、31.2、62.5μg/mL)作用48 h后加入H_2O_2作用24 h,可显著提高细胞存活率、SOD活性,降低MDA含量(P0.05或P0.01)。结果显示,ETPB对由H_2O_2引起的INS-1细胞氧化损伤具有保护作用。     

桑园常用杀菌剂多菌灵诱导鼠源神经细胞PC12凋亡的研究

多菌灵是桑园病虫害防治的常用农药,并用于家蚕微粒子病的防治。研究多菌灵对哺乳动物神经系统的毒性损伤作用及可能的作用机制,为避免蚕区桑园用药污染环境的危害提供理论依据。采用MTT法、流式细胞计数法测定用质量浓度为50、100和200μg/m L的多菌灵药液分别与鼠源神经细胞PC12共同孵育48 h后,可极显著抑制PC12细胞的增殖(P0.01),诱导PC12细胞凋亡,特别是早期凋亡(P0.01)。实时荧光定量PCR检测经50μg/m L多菌灵药液处理后培养48 h的PC12细胞内,促凋亡蛋白基因Bax和凋亡相关基因Cyt-C、Fas、Caspase-8、Caspase-9的表达水平极显著上调(P0.01);同时检测50μg/m L多菌灵药液处理组PC12细胞中Caspase-3的酶活性也极显著提高(P0.01)。研究结果显示50~200μg/m L多菌灵药液对哺乳动物神经细胞具有一定的毒性作用,推测其可能通过启动死亡受体介导途径和线粒体介导途径诱导神经细胞凋亡,因此在桑园施用多菌灵时,应注意防护以及远离居住区。     

红景天提取物对肉鸡外周血白细胞免疫调节作用的研究

为了研究红景天提取物对肉鸡外周血白细胞免疫调节作用的影响,试验取3只健康雄性肉鸡分离外周血白细胞,以每孔1×106/m L接种于24孔细胞培养板,然后将红景天提取物(浓度分别调整至200,100,50,0μg/m L) 200μL加入24孔细胞培养板,37℃、5%CO2条件下培养24 h,离心后收集上清液,检测上清液中细胞因子和免疫球蛋白含量。结果表明:相比于不添加红景天提取物的对照,100μg/m L、200μg/m L红景天提取物显著提高了细胞上清液中IgG和IgM含量(P0. 05)。此外,100μg/m L红景天提取物相比于对照还显著提高了细胞上清液中IL-1β含量(P 0. 05),100μg/m L、200μg/m L红景天提取物显著提高了细胞上清液中IL-6和TNF-α含量(P0. 05)。说明红景天提取物能够促进肉鸡外周血白细胞免疫球蛋白和细胞因子的产生,改善肉鸡的免疫机能,但在100μg/m L内存在剂量依赖性。     

GM-CSF对猪卵丘细胞扩展相关基因表达的影响

试验旨在研究猪卵母细胞体外培养过程中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对卵丘细胞的影响。在成熟培养液不变的情况下添加10μg/L和100μg/L的GM-CSF,对卵丘卵母细胞复合体(COC)分别培养12、24、48 h,运用CCK8检测试剂盒检测卵丘细胞活性。收集培养48 h的COC,观察卵丘细胞扩展情况,统计卵母细胞极体排出率。结果显示,GM-CSF对卵母细胞极体排出率无显著影响,但有助于3～4级卵丘细胞的扩散。100μg/L的GM-CSF作用48 h,能够极显著提高卵丘细胞的细胞活性(P0.01)。研究表明,100μg/L的GM-CSF可促进COC中3～4级卵丘细胞的扩展。     

不同染色与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子的分离及应用效果研究

为探究不同Hoechst 33342的染色浓度与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果的影响，本实验采集6只关中奶山羊精液，使用浓度分别为10、11、12、13μL/m L的Hoechst 33342(5 mg/m L)染色液对精液样本进行染色，以流式细胞仪分离X精子和Y精子，应用3种不同冷冻程序冷冻精液，应用体外受精与胚胎发育技术评估关中奶山羊X、Y精液的分离准确性。结果表明：12μL/m L Hoechst 33342染色条件下，奶山羊X、Y精子分离效率达到91.02%，高于10μL/m L和13μL/m L(P<0.01)，最高分选速度为4 134个/s(P<0.05)；公羊个体的精液品质越好，其精子的分离速度越快，但对分离准确率的差异不显著；使用冷冻程序2进行关中奶山羊的X、Y精子冷冻的效果较好（P<0.05）；体外受精48 h后，使用Y精子进行受精的卵细胞的卵裂率高于使用X精子（P<0.05），在胚胎培养第9天，使用Y精子进行受精的卵细胞的囊胚发育率高于使用X精子（P<0.05）。总之，当Hoechst 33342浓度为12μL/m L...     

乐果引起大鼠肝细胞凋亡的机理

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(0、3、10、30、100、300μmol/L),染毒122、4 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(Δψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,探讨乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响。结果显示,肝细胞染毒12、24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3μmol/L组外,与对照组相比差异显著(P0.05或P0.01),且呈时间-剂量效应。3μmol/L组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+浓度逐渐下降;细胞内ROS水平在3~100μmol/L随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300μmol/L组略有下降,除3μmol/L组外,与对照组相比均差异极显著(P0.01);Δψm除24 h 300μmol/L组外均出现持续下降。结果表明,低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和Δψm可能参与了这一过程。     

槲皮素对奶牛乳腺上皮细胞抗氧化性能和乳脂合成的影响

为研究槲皮素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗氧化性能和乳脂合成的影响,试验将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0、10、20、40和60μg/m L槲皮素,然后在37℃,5%CO2的培养箱中培养。结果显示:(1)细胞培养24 h和72 h时,与0μg/m L槲皮素组相比,20μg/m L和40μg/m L槲皮素组细胞的活性分别显著提高了13.12%、7.48%和7.83%、29.85%(P0.05)。(2)与0μg/m L槲皮素组相比,20μg/m L和60μg/m L槲皮素组的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)活性以及一氧化氮(NO)浓度分别升高了15.52%、19.99%,53.49%、28.23%,36.29%、13.19%和30.42%、39.78%(P0.05),MDA含量分别降低了19.29%和32.74%(P0.05)。(3)与0μg/m L槲皮素组相比,添加10μg/m L槲皮素组细胞的SREBP1、CD36、FAS、PPAR-γ和SCD1基因表达分别显著降低了45.00%、46.53%、26.73%、43.00%和29.00%(P0.05)。结果表明,槲皮素能够提高奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化性能,促进细胞的增殖;并且能够通过抑制脂肪酸合成和转运相关基因的表达来降低乳脂的合成。     

采用泊洛沙姆为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对大鼠脾细胞的增值作用

为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/m L)及FMDV O型油乳佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)对伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)处理淋巴细胞的增殖率。结果表明,与空白对照组相比较,泊洛沙姆各浓度对脾细胞均有增殖作用,多肽疫苗在高浓度的时候对细胞有抑制作用,随着作用浓度的降低,又进而转为细胞增殖作用。     

乳酸乳球菌对Caco-2细胞抗氧化功能的影响

本文旨在研究乳酸乳球菌对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。将培养好的Caco-2细胞分为3组:空白对照组和氧化应激组分别加入终浓度为0和100μmol/L H_2O_2,处理组在H_2O_2氧化应激条件下同时添加乳酸乳球菌(1×108CFU/m L)。培养至12 h和48 h时分别测定培养上清和细胞裂解液中的抗氧化指标。结果表明:与空白对照组相比,氧化应激12 h并没有对细胞造成明显的损伤;48 h时细胞发生了严重的氧化应激,培养上清中T-AOC(P0.05)、抗O_2-(P0.01)、GSH-Px(P0.01)和CAT(P0.05)活力均显著降低,MDA含量极显著增加(P0.01)。与氧化应激组相比,乳酸乳球菌处理12 h时显著提高了细胞培养上清中T-AOC、SOD、CAT活力(P0.01)和GSH含量(P0.01)以及细胞裂解液中SOD活力(P0.01)和GSH含量(P0.05);处理48 h时显著提高了上清中抗O_2~-、SOD、GSH-Px、CAT活力(P0.01),显著抑制了H_2O_2诱导的胞内SOD活性、GSH含量的升高和POD活性的降低(P0.01),虽然T-AOC无显著变化(P0.05),但培养上清中MDA含量显著减少(P0.01)。以上结果表明,在体外条件下,乳酸乳球菌可通过提高不同抗氧化酶活力,改善胞内抗氧化防御系统,增强Caco-2细胞抗氧化功能,减轻细胞的氧化应激损伤。     

松针多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫调节作用的研究

本试验旨在研究松针多糖对正常状态及脂多糖(LPS)刺激状态下小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。试验采用不同浓度的松针多糖作用于正常的和经LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞,设空白对照组(加入100μL RPMI-1640培养基)、阳性对照组(加入100μL终浓度为5μg/m L的LPS)、松针多糖组(分别加入100μL 25、50、100、200μg/m L的松针多糖)和LPS+松针多糖组(加入与松针多糖组相同浓度的松针多糖和终浓度为5μg/m L的LPS,液体终体积为200μL)。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,中性红吞噬试验检测巨噬细胞吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测巨噬细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的分泌量。结果表明:1)对空白对照组相比,各松针多糖组巨噬细胞相对增殖率均显著或极显著提高(P0.05或P0.01),50、100和200μg/m L松针多糖组巨噬细胞中性红吞噬率显著或极显著提高(P0.05或P0.01),各LPS+松针多糖组巨噬细胞中性红吞噬率均极显著提高(P0.01),200μg/m L松针多糖组巨噬细胞NO分泌量极显著提高(P0.01),50、100和200μg/m L松针多糖组巨噬细胞TNF-α和IL-1β分泌量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),50、100和200μg/m L松针多糖组巨噬细胞IL-10分泌量极显著降低(P0.01)。2)与阳性对照组相比,各松针多糖组巨噬细胞相对增殖率均极显著降低(P0.01),100和200μg/m L LPS+松针多糖组巨噬细胞中性红吞噬率极显著升高(P0.01),50、100和200μg/m L LPS+松针多糖组巨噬细胞NO分泌量极显著提高(P0.01),各LPS+松针多糖组巨噬细胞TNF-α分泌量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),50、100和200μg/m L LPS+松针多糖组巨噬细胞IL-1β分泌量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),100和200μg/m L LPS+松针多糖组巨噬细胞IL-10分泌量极显著降低(P0.01)。由此可见,松针多糖通过发挥其促炎作用调节巨噬细胞的免疫功能,进而增强机体抗疾病的能力。     

苜蓿素对脂多糖刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响

本试验旨在研究苜蓿素对脂多糖(LPS)刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞活性和炎症相关基因表达的影响。将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成6组,对照组采用基础培养基,试验组在基础培养基中分别加入1μg/m L LPS(L组)、1μg/m L LPS和2.5μg/m L苜蓿素(L+2.5组)、1μg/m L LPS和5.0μg/m L苜蓿素(L+5组)、1μg/m L LPS和10.0μg/m L苜蓿素(L+10组)以及1μg/m L LPS和15.0μg/m L苜蓿素(L+15组),培养24 h。结果表明:1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞相对增殖率极显著降低(P0.01),而L+2.5组和L+10组则极显著升高(P0.01);2)与L组相比,L+10组和L+15组细胞超氧化物歧化酶活性显著升高(P0.05),而乳酸脱氢酶活性和一氧化氮浓度显著降低(P0.05);3)与L组相比,L+5组和L+10组细胞的白细胞介素8、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、Toll样受体2和Toll样受体4的相对表达量均极显著降低(P0.01),L+5组细胞的髓样分化因子88相对表达量均显著降低(P0.05)。结果提示,在LPS刺激下,添加苜蓿素能够提高奶牛乳腺上皮细胞活性和抗氧化性能,抑制炎症相关基因的表达,发挥抗炎作用。     

湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对乙醇诱导L02细胞氧化损伤的保护作用研究

研究湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(GEE)对乙醇诱导人正常肝细胞(L02)氧化损伤的保护作用及其机制。用400μmol/L乙醇诱导L02细胞建立体外细胞氧化损伤模型,加入GEE 25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL作用24 h,采用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化;DCFH-DA探针染色流式细胞仪检测细胞内ROS水平;DTNB-GR动力学循环法检测胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量变化。结果表明,400μg/mL乙醇诱导L02细胞24 h可建立肝细胞氧化损伤模型。GEE在25～100μg/mL对L02细胞无损伤。与模型组比较,GEE中剂量、高剂量组能显著提高L02细胞存活率(P0.001);降低细胞上清液中ALT、AST含量(P0.001);使细胞内SOD活力显著提高(P0.001);MDA含量明显降低(P0.001);同时使细胞内ROS水平降低(P0.01)、GSH/GSSG比值提高(P0.001)。提示GEE对乙醇诱导的L02细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其减轻氧化应激反应有关。     

体外培养中硒对黄曲霉毒素B_1损伤凡纳滨对虾肝胰腺细胞的影响

本试验旨在研究体外培养中硒(Se)对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺细胞抗氧化能力的影响以及对黄曲霉毒素B1(AFB1)毒性的缓解作用。在体外培养肝胰腺细胞的基础上,设定含不同浓度(0、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75μg/m L)Se的培养液,研究Se对肝胰腺细胞抗氧化能力的影响;另用浓度为1 600μg/L的AFB1侵染细胞,探究Se对AFB1毒性的缓解作用。结果表明:当Se浓度处于0~0.45μg/m L时,随着Se浓度的增加,丙二醛(MDA)含量呈现降低趋势,但各个浓度之间并没有显著差异(P0.05),过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力随着Se浓度的增加而增强,Se浓度为0.45μg/m L时GSH-Px活力显著高于其他浓度(除0.30μg/m L)时(P0.05);当Se浓度处于0.45~0.75μg/m L时,随着MDA含量升高的同时CAT、GSH-Px活力下降。当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1侵染后,随着培养时间的增加,MDA含量表现一直升高的趋势,同时CAT、GSH-Px活力都有一定程度的下降;当细胞受到浓度为1 600μg/L的AFB1和浓度为0.45μg/m L的Se共同作用后,随着培养时间的增加,MDA含量有一定程度的改善,CAT、GSH-Px活力得到一定程度的恢复。由此可见,在体外培养条件下,浓度为0.45μg/m L的Se有利于提高凡纳滨对虾肝胰腺细胞的抗氧化能力,且在一定程度上能缓解AFB1对肝胰腺细胞的毒性作用。     

硒增强二十二碳六烯酸在脂多糖诱导巨噬细胞炎性反应中的抗炎作用

为了探究硒是否影响二十二碳六烯酸(DHA)在脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎性反应中发挥的抗炎作用。小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分别经10μg/m L DHA、10μg/m L DHA+0.05μmol/L亚硒酸钠、1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS、10μg/m L DHA+1μg/m L LPS+0.05μmol/L亚硒酸钠诱导24 h,同时设置无添加的正常组。采用半定量反转录PCR检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)mRNA表达量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定培养液上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量。结果显示,添加亚硒酸钠(0.05μmol/L)不仅显著或极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW 264.7细胞中促炎细胞因子TNF-αmRNA表达(P0.05)和IL-1β生成(P0.01)的抑制作用,还极显著增强了DHA(10μg/m L)对LPS(1μg/m L)诱导RAW264.7细胞中抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达的促进作用(P0.01)。由此提示,硒可增强DHA在LPS诱导巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用。