迷迭香酸对哮喘小鼠氧化性肺损伤的保护作用

为评价迷迭香酸对哮喘小鼠模型氧化性肺损伤的保护作用,本研究用卵清蛋白（OVA）致敏、激发雌性BALB/c小鼠建立哮喘模型,并用OVA和H₂O₂联合激发小鼠作为氧化肺损伤阳性对照模型。在最后一次滴鼻激发24 h后,取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数并测定活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,取左侧肺脏固定做HE染色。结果显示,迷迭香酸可明显减少BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞数目,显著抑制肺组织和BALF中ROS的产生,升高SOD和GSH-Px水平,改善肺组织病理变化。本试验结果表明,迷迭香酸对氧化肺损伤起到明显的保护作用。     

猴头菇多糖对氧化应激的IPEC-J2细胞抗氧化能力及紧密连接蛋白ZO-1的影响

旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。     

UBC13对支气管哮喘模型小鼠Th2、Th17型细胞极化的影响

试验旨在探究UBC13蛋白对支气管哮喘小鼠体内Th2、Th17细胞极化的影响。18只BALB/c小鼠随机均分为3组:PBS组、哮喘模型(OVA)组和UBC13蛋白(UBC13)组,OVA组和UBC13组采用卵清蛋白(OVA)和脂多糖(LPS)进行致敏和雾化建立哮喘模型,其中UBC13组于每次雾化前0.5 h腹腔注射100μg UBC13蛋白。末次雾化激发24 h后处死小鼠,采集样品,通过HE染色观察肺脏切片病理学变化、PAS染色观察气道黏液的分泌,ELISA法检测血清IgE浓度和肺支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5和IL-17A的水平,实时荧光定量PCR法检测肺脏Th2型相关因子IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γmRNA和Th17型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-23 mRNA的相对表达量。结果显示,试验成功建立了哮喘模型,与PBS组相比,OVA组IgE浓度极显著上升(P0.01),肺脏病理切片炎性细胞浸润和中性黏液分泌现象明显,肺脏中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IL-17A mRNA相对表达量均极显著升高(P0.01),IL-5和IL-23 mRNA相对表达量显著升高(P0.05),IFN-γmRNA相对表达量极显著下降(P0.01),BALF中IL-4、IL-5和IL-17A的水平极显著上升(P0.01);与OVA组相比,UBC13组IgE浓度显著降低(P0.05),病理切片炎性细胞浸润现象减轻、黏液分泌减少,肺脏IL-1β、IL-4、IL-17A、IL-13和IL-23 mRNA相对表达量均显著下降(P0.05),IFN-γmRNA相对表达量显著升高(P0.05);IL-6 mRNA相对表达量极显著下降(P0.01),BALF中IL-5的水平极显著下降(P0.01),IL-4的水平显著下降(P0.05),IL-17A的水平无显著差异(P0.05)。由此可见,UBC13蛋白能下调Th2和Th17型细胞因子的表达量,影响哮喘模型Th2和Th17细胞的极化。     

大豆异黄酮对过氧化氢诱导IPEC-J2细胞氧化应激的影响

本文旨在研究大豆异黄酮(SIF)对缓解猪肠道细胞氧化应激损伤的影响。试验采用体外细胞培养方法,使用过氧化氢(H_2O_2)将猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)诱导为氧化应激状态后,分别用10、50、100μmol/L大豆异黄酮和100μmol/L乙氧基喹啉(EMQ)处理16 h。结果表明,经H_2O_2诱导的氧化模型组细胞存活率显著低于溶剂对照组、SIF 10组、SIF 50组和SIF 100组(P﹤0.05),细胞内ROS和MDA水平,SIF 10组、SIF 50组和SIF 100组均极显著低于氧化模型组(P﹤0.01),而细胞内SOD水平均高于氧化模型组,且SIF 100组达到极显著水平(P﹤0.01);乙氧基喹啉(EMQ)组与氧化模型组相比,细胞存活率和ROS显著降低(P﹤0.05),但细胞内MDA和SOD水平没有显著差异(P0.05)。结果提示大豆异黄酮具有缓解细胞氧化应激作用。     

甘氨酸对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响

本实验旨在探究甘氨酸(Gly)对H_2O_2诱导氧化应激的小鼠胚胎抗氧化能力的影响。实验分为对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组,对照组胚胎不经H_2O_2处理培养于M16培养液中;其他2组胚胎均置于25μmol/L的H_2O_2中孵育30 min,然后,H_2O_2处理组和H_2O_2+Gly处理组分别在M16培养液和最佳浓度Gly的培养液中进行培养。通过2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCHFDA)法测定胚胎内部的活性氧水平和巢式PCR法检测内源抗氧化酶基因的表达。结果表明:胚胎经不同浓度Gly处理后,4 mmol/L Gly处理组的4-cell发育率(P0.05)和囊胚发育率(P0.05)均高于对照组;氧化应激胚胎经4 mmol/L的Gly处理后,胚胎的4-cell发育率(P0.01)和囊胚发育率(P0.05)显著高于H_2O_2处理组;H_2O_2+Gly处理组的活性氧水平显著低于H_2O_2处理组(P0.05);Gly能上调CAT(P0.05)和SOD1(P0.01)基因的表达,而对SOD2基因的表达无影响(P0.05)。综上可知,添加Gly可以有效提高胚胎的抗氧化能力,在胚胎体外培养过程中添加Gly的最适宜浓度为4 mmol/L。     

乳酸乳球菌对Caco-2细胞抗氧化功能的影响

本文旨在研究乳酸乳球菌对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。将培养好的Caco-2细胞分为3组:空白对照组和氧化应激组分别加入终浓度为0和100μmol/L H_2O_2,处理组在H_2O_2氧化应激条件下同时添加乳酸乳球菌(1×108CFU/m L)。培养至12 h和48 h时分别测定培养上清和细胞裂解液中的抗氧化指标。结果表明:与空白对照组相比,氧化应激12 h并没有对细胞造成明显的损伤;48 h时细胞发生了严重的氧化应激,培养上清中T-AOC(P0.05)、抗O_2-(P0.01)、GSH-Px(P0.01)和CAT(P0.05)活力均显著降低,MDA含量极显著增加(P0.01)。与氧化应激组相比,乳酸乳球菌处理12 h时显著提高了细胞培养上清中T-AOC、SOD、CAT活力(P0.01)和GSH含量(P0.01)以及细胞裂解液中SOD活力(P0.01)和GSH含量(P0.05);处理48 h时显著提高了上清中抗O_2~-、SOD、GSH-Px、CAT活力(P0.01),显著抑制了H_2O_2诱导的胞内SOD活性、GSH含量的升高和POD活性的降低(P0.01),虽然T-AOC无显著变化(P0.05),但培养上清中MDA含量显著减少(P0.01)。以上结果表明,在体外条件下,乳酸乳球菌可通过提高不同抗氧化酶活力,改善胞内抗氧化防御系统,增强Caco-2细胞抗氧化功能,减轻细胞的氧化应激损伤。     

肿节风三清颗粒抗炎和抗哮喘作用

本研究旨在考察肿节风三清颗粒的抗炎和平喘作用。MTT法检测200、400、800、1 600μg/mL肿节风三清颗粒对RAW264.7细胞活力的影响;用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,并采用400、800、1 600μg/mL肿节风三清颗粒处理,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;用卵清蛋白(OVA)致敏、激发雌性BALB/c小鼠建立哮喘模型,并采用100、200、300mg/kg肿节风三清颗粒处理,末次激发24h后,测定哮喘小鼠气道高反应性(AHR),取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞分类计数,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13浓度及血清中OVA-IgE水平。结果显示,200~16 00μg/mL肿节风三清颗粒对RAW 264.7细胞增殖有显著或极显著促进作用(P0.05;P0.01),与LPS组相比,800、1 600μg/mL肿节风三清颗粒能够极显著降低TNF-α和IL-6水平(P0.01);与哮喘模型组相比,肿节风三清颗粒明显改善了气道高反应性,明显减少了BALF中的炎症细胞数目及IL-4、IL-5和IL-13浓度,极显著降低了血清中OVA-IgE水平(P0.01)。综上所述,肿节风三清颗粒可通过抑制炎症因子的表达对炎症细胞模型和哮喘小鼠模型起到良好的保护作用。     

肿节风有效成分迷迭香酸对哮喘小鼠Th1/Th2型细胞因子水平的影响

为了探讨肿节风有效成分迷迭香酸对小鼠哮喘模型Th1/Th2细胞因子的调节作用,试验将50只雌性Balb/c小鼠随机分为5组,分别为正常对照组、迷迭香酸单药组、OVA哮喘模型组、迷迭香酸治疗组、地塞米松治疗组,采用ELISA方法对支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)和γ干扰素(IFN-γ)水平进行了研究。结果表明:与正常对照组比较,OVA哮喘模型组小鼠BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平极显著升高(P0.01),IFN-γ水平极显著降低(P0.01),IL-4/IFN-γ比例极显著升高(P0.01);与OVA哮喘模型组比较,迷迭香酸治疗组和地塞米松治疗组显著抑制了IL-4、IL-5和IL-13水平(P0.05),显著降低了IL-4/IFN-γ比值(P0.05)。说明肿节风有效成分迷迭香酸具有抑制哮喘Th2细胞因子和调节免疫平衡的作用。     

没食子酸对D-半乳糖致雄性小鼠肝脏损伤的保护作用

为研究没食子酸对D-半乳糖致小鼠肝脏损伤的保护作用,60只ICR雄性小鼠随机分为6组。保留10只为正常对照组,剩余小鼠以D-半乳糖诱导氧化应激模型,建模成功后将小鼠随机分为模型组、阳性对照组、没食子酸低、中和高剂量组。30 d连续灌胃后测定小鼠抗氧化性能指标。结果表明,与空白对照组比较,模型组小鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)含量显著降低,丙二醛(MDA)和过氧化氢(H_2O_2)含量显著升高(P<0.05);没食子酸能提高SOD、GSH-Px、T-AOC和CAT活性,降低MDA和H_2O_2含量(P<0.05),改善了D-半乳糖引起的Nrf2和HO-1 mRNA水平降低。表明没食子酸对D-半乳糖所致的肝组织损伤有一定的改善作用,机制可能与抗氧化作用同时激活Nrf2/HO-1信号通路有关。     

UBC13对支气管哮喘模型小鼠Th2、Th17型细胞极化的影响

试验旨在探究UBC13蛋白对支气管哮喘小鼠体内Th2、Th17细胞极化的影响。18只BALB/c小鼠随机均分为3组：PBS组、哮喘模型（OVA）组和UBC13蛋白（UBC13）组,OVA组和UBC13组采用卵清蛋白（OVA）和脂多糖（LPS）进行致敏和雾化建立哮喘模型,其中UBC13组于每次雾化前0.5 h腹腔注射100 μg UBC13蛋白。末次雾化激发24 h后处死小鼠,采集样品,通过HE染色观察肺脏切片病理学变化、PAS染色观察气道黏液的分泌,ELISA法检测血清IgE浓度和肺支气管肺泡灌洗液（BALF）上清中IL-4、IL-5和IL-17A的水平,实时荧光定量PCR法检测肺脏Th2型相关因子IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ mRNA和Th17型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17A、IL-23 mRNA的相对表达量。结果显示,试验成功建立了哮喘模型,与PBS组相比,OVA组IgE浓度极显著上升（P < 0.01）,肺脏病理切片炎性细胞浸润和中性黏液分泌现象明显,肺脏中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13和IL-17A mRNA相对表达量均极显著升高（P < 0.01）,IL-5和IL-23 mRNA相对表达量显著升高（P < 0.05）,IFN-γ mRNA相对表达量极显著下降（P < 0.01）,BALF中IL-4、IL-5和IL-17A的水平极显著上升（P < 0.01）;与OVA组相比,UBC13组IgE浓度显著降低（P < 0.05）,病理切片炎性细胞浸润现象减轻、黏液分泌减少,肺脏IL-1β、IL-4、IL-17A、IL-13和IL-23 mRNA相对表达量均显著下降（P < 0.05）,IFN-γ mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;IL-6 mRNA相对表达量极显著下降（P < 0.01）,BALF中IL-5的水平极显著下降（P < 0.01）,IL-4的水平显著下降（P < 0.05）,IL-17A的水平无显著差异（P > 0.05）。由此可见,UBC13蛋白能下调Th2和Th17型细胞因子的表达量,影响哮喘模型Th2和Th17细胞的极化。     

吡格列酮对MZT期小鼠胚胎发育阻滞的影响

本研究旨在了解活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、发育阻滞与抗氧化物吡格列酮(Pioglitazone,PIO)之间的关系。试验分3组:对照组、H_2O_2处理组和H_2O_2+PIO处理组。通过H_2O_2建立小鼠胚胎氧化损伤模型,添加抗氧化物质PIO对胚胎进行氧化修复,DCHFDA测定胚胎内部ROS水平,半定量PCR测定母型-合子型胚胎内部相关母性效应基因和合子型基因的表达。结果表明:(1)1-细胞和2-细胞胚胎H_2O_2处理组的ROS水平明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组的高(P0.05);(2)H_2O_2处理组的2-细胞向4-细胞过渡率明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组低(P0.05),但各处理组之间1-细胞向2-细胞过渡率差异不显著(P0.05);(3)H_2O_2处理组的母性效应基因Hsf1、Zfp3612、Zp3和合子型基因Eif1-α、Zscan4d和Muerv-L的表达明显比对照组和H_2O_2+PIO处理组低(P0.05)。综上表明,氧化应激通过下调2-细胞胚胎母型效应基因和合子型基因表达,导致小鼠胚胎2-细胞发育阻滞,抗氧化物质吡格列酮可促进胚胎发育,有效克服胚胎体外2-细胞发育阻滞现象。     

肿节风三清颗粒抗炎和抗哮喘作用

本研究旨在考察肿节风三清颗粒的抗炎和平喘作用。MTT法检测200、400、800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒对RAW264.7细胞活力的影响;用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,并采用400、800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒处理,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;用卵清蛋白（OVA）致敏、激发雌性BALB/c小鼠建立哮喘模型,并采用100、200、300 mg/kg肿节风三清颗粒处理,末次激发24 h后,测定哮喘小鼠气道高反应性（AHR）,取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞分类计数,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5和IL-13浓度及血清中OVA-IgE水平。结果显示,200~16 00 μg/mL肿节风三清颗粒对RAW 264.7细胞增殖有显著或极显著促进作用（P<0.05;P<0.01）,与LPS组相比,800、1 600 μg/mL肿节风三清颗粒能够极显著降低TNF-α和IL-6水平（P<0.01）;与哮喘模型组相比,肿节风三清颗粒明显改善了气道高反应性,明显减少了BALF中的炎症细胞数目及IL-4、IL-5和IL-13浓度,极显著降低了血清中OVA-IgE水平（P<0.01）。综上所述,肿节风三清颗粒可通过抑制炎症因子的表达对炎症细胞模型和哮喘小鼠模型起到良好的保护作用。     

钩吻素子对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞氧化应激和凋亡的影响

目的:探讨钩吻素子(koumine)对H_2O_2诱导的猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)损伤的保护作用及其机制。方法:通过MTT法检测koumine对IPEC-J2细胞增殖的影响,并用H_2O_2诱导IPEC-J2细胞建立细胞损伤模型,通过MTT和LDH比色法检测分析koumine保护IPEC-J2细胞免受H_2O_2损伤的效果;生化方法检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(western blot)技术检测凋亡相关蛋白bax和bcl-2的表达情况;用流式细胞仪检测氧自由基(ROS)释放量和细胞凋亡率。结果:检测浓度范围内koumine对IPEC-J2细胞没有毒性;koumine可以通过调控IPEC-J2细胞中SOD活性、LDH漏出率、MDA水平和ROS的产生,保护H_2O_2对IPEC-J2细胞的氧化损伤,抑制H_2O_2引起的IPEC-J2细胞凋亡;koumine在抑制H_2O_2引起的细胞凋亡过程中,减少了促凋亡蛋白Bax表达,增加了抑凋亡蛋白Bcl-2表达,使得Bax/Bcl-2的比值在药物作用时随剂量的增加逐渐降低。结论:koumine能够保护IPEC-J2细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的时间和剂量依赖关系,其作用机制与抑制细胞凋亡有关。     

替唑尼特对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激及炎症因子的影响

本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞(RAW264.7)建立氧化应激模型,探讨替唑尼特(TIZ)的抗氧化和抗炎效果。培养RAW264.7细胞,给予LPS(1μg/m L)刺激并用TIZ(25、50、75、100μmol/L)作用。MTT法检测细胞存活率;DCFH-DA荧光探针法检测TIZ对ROS生成的影响;同时,检测MDA的生成量以评估TIZ对脂质氧化的影响;检测GSH的含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性以评估TIZ对细胞抗氧化系统的影响;检测IL-6的分泌和COX-2的表达量以评估TIZ对炎症细胞因子的作用。结果显示LPS刺激后细胞表现出显著性的氧化应激效应,而给予TIZ处理后,ROS和MDA生成量呈剂量相关性的显著下降;细胞IL-6的分泌和COX-2的表达量也随TIZ处理而显著下降,而GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px活性在TIZ处理后却呈剂量相关性的显著性上升。因此,TIZ可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞氧化应激和炎症反应,这为TIZ的作用机制研究以及应用奠定了基础。     

3-硝基丙酸诱导小鼠卵巢氧化应激模型的建立

通过腹腔注射3-硝基丙酸(3-NPA),建立并评价小鼠卵巢氧化应激模型。雌性小鼠分为对照组和模型组,模型组腹腔注射3-NPA(20mg/kg),每日1次,对照组注射等量生理盐水。注射14d后观察小鼠增重、卵巢指数、卵泡发育、排卵数、生育能力和生发泡期(GV期)卵细胞线粒体分布情况,检测卵巢活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)浓度,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性,血清雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)浓度。结果表明,通过腹腔注射3-NPA,可显著提高小鼠卵巢ROS和MDA浓度,显著增加抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活性,表明卵巢氧化应激水平升高,导致闭锁卵泡比率显著增加,排卵数和生育能力显著降低,血清E_2和P_4水平显著降低,GV期卵细胞线粒体分布异常率显著增加。说明3-NPA可成功诱导建立小鼠卵巢氧化应激模型。     

肉牛肌肉细胞的分离培养和鉴定及其氧化应激模型的建立

本研究采用组织块法分离培养获得肉牛肌肉细胞并进行鉴定,利用过氧化氢(H_2O_2)构建氧化应激模型,为深入研究氧化应激对肉牛肌肉生长发育和肉品质的影响机制提供技术支撑。选用体重为252 kg的利鲁(利木赞×鲁西黄牛)杂交公牛背最长肌,利用组织块培养法分离培养肌肉细胞。通过形态学观察、免疫荧光法及流式细胞仪等手段对细胞进行鉴定。采用不同浓度(0、50、100、150、200、250、300、350、400、450μmol/L)的H_2O_2处理细胞24 h,通过观察细胞形态、检测细胞存活率及氧化还原状态,筛选适宜作用浓度。然后利用该浓度H_2O_2处理细胞不同时间(0、0.75、1.5、3、6、12、24 h),通过分析确定适宜作用时间。结果表明:1)分离获得的细胞长势良好,形状细长,呈纺锤体形和梭形。免疫荧光法和流式细胞仪鉴定肌肉细胞的特异性蛋白(生肌决定因子1和配对盒基因7)均得到较高表达。2)视野内细胞数量随H_2O_2浓度升高逐渐减少,至450μmol/L时,细胞发生明显死亡现象。细胞存活率随H_2O_2浓度的升高显著降低,与0浓度H202处理相比,300μmol/L时降至65.4%(P0.05),450μmol/L时仅为6.7%(P0.05)。细胞活性氧(ROS)水平先略微降低后逐渐升高(P0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性先升高后逐渐降低(P0.05),丙二醛(MDA)和蛋白质羰基(PC)含量逐渐升高(P0.05),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量先升高后降低(P0.05)。3)细胞存活率随300μmol/L H_2O_2处理时间的延长逐渐降低,与0 h相比,6 h降至61.2%(P0.05),12 h降至47.4%(P0.05),但在24 h时略有升高(P0.05)。随着处理时间的延长,细胞ROS水平先升高后逐渐降低(P0.05),SOD和CAT活性先升高后降低(P0.05),MDA、PC和8-OHdG含量均逐渐升高(P0.05)。综上所述,本研究通过组织块培养法分离培养获得较高纯度的肉牛肌肉细胞,并成功构建氧化应激模型,H_2O_2的适宜作用浓度和时间分别为300μmol/L和6 h。     

复方肿节风溶液抗炎和平喘作用的研究

为考察复方肿节风溶液的抗炎平喘作用,进行了该药的体外抗炎和体内平喘作用研究。用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,MTT法检测复方肿节风对RAW 264.7细胞活力的影响,ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-1和IL-6浓度,Griess法检测NO水平。体内试验通过卵清蛋白(OVA)致敏、激发Wistar大鼠建立哮喘模型,并灌服不同剂量(12、6、3g/kg)的复方肿节风溶液。ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-17、IFN-γ及IgE水平;瑞特-吉姆萨染色血涂片,用血细胞计数器计数血液白细胞总数和嗜酸性粒细胞数,肺组织HE染色,观察肺组织病理变化。体外抗炎试验结果表明,复方肿节风溶液在10μg/mL~40μg/mL的浓度范围内对RAW 264.7细胞活力无显著影响。10、20、40μg/mL的复方肿节风溶液能不同程度抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞产生TNF-α、IL-6、IL-1和NO的水平(P0.05),并存在一定的剂量依赖关系。体内平喘试验结果表明,与哮喘模型组相比,复方肿节风溶液能明显下调血清中IL-4、IL-17和IgE的高分泌,上调血清中IFN-γ水平(P0.05)。表明复方肿节风溶液抗炎平喘作可能通过抑制相关炎症因子的表达来实现的。     

鸡血藤黄酮乙酸乙酯部位对H_2O_2诱导RAW264.7细胞氧化应激的调节作用

为了探讨鸡血藤黄酮乙酸乙酯部位(the ethyl acetate fraction of spatholobus suberectdunn flavonoid,EFSF)的抗氧化应激作用,试验采用双氧水(H_2O_2)处理RAW264.7细胞,建立氧化应激模型,EFSF处理氧化应激细胞后,利用分光光度法检测一氧化氮(NO)分泌水平和细胞内活性氧自由基(ROS)水平的变化。结果表明:200μg/m L及以下浓度的EFSF对RAW264.7细胞无毒性作用;25,50,100μg/m L的EFSF均能明显降低H_2O_2诱导氧化应激细胞的NO分泌水平及细胞内ROS的含量。说明EFSF对H_2O_2处理RAW264.7细胞引起的氧化应激损伤具有一定的保护作用。     

SPF雏鸡感染REV引起脾脏氧化-抗氧化的平衡紊乱

为探究氧化-抗氧化平衡紊乱在禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)致病机制中的作用,对感染REV后3、7、14、21、28和35 d的SPF雏鸡脾脏进行过氧化氢(H_2O_2)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(total-antioxidante capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)蛋白含量及mRNA表达、脾脏器官指数的检测。结果显示,SPF雏鸡感染REV后,脾脏H_2O_2、MDA含量显著或极显著升高(P0.05或P0.01),T-AOC、抗氧化酶等抗氧化指标及器官指数分别于不同时间不同程度显著或极显著降低(P0.05或P0.01),表明SPF雏鸡感染REV后,脾脏发生氧化应激,抗氧化功能和免疫功能下降,氧化-抗氧化平衡紊乱可在REV致病机制中发挥作用。     

沃尼妙林对脂多糖诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

为了研究预先服用沃尼妙林对急性肺损伤(ALI)的作用,试验采用脂多糖(LPS)诱导建立了小鼠炎症ALI模型;制备支气管肺泡灌洗液(BALF)以检测蛋白浓度、细胞因子水平以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;收集肺组织测定湿干重(W/D)比率、髓过氧化物酶(MPO)活性,观察组织学的变化。结果表明:预先服用沃尼妙林显著降低了肺组织的W/D比率、蛋白浓度和白细胞数,组织学分析表明减弱了组织损伤;沃尼妙林使BALF中SOD的水平显著升高,减弱了肺脏中MPO的活性,抑制了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)等炎性细胞因子的产生。说明了沃尼妙林对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用。