秦岭细鳞鲑人工驯养繁殖及受精卵孵化技术

为了更好地养护秦岭细鳞鲑这一我国特有的冷水土著鱼类种质资源,本文总结了甘肃省张家川马鹿秦岭细鳞鲑驯养繁殖场多年以来开展秦岭细鳞鲑人工驯养繁殖及受精卵孵化的关键技术,通过相关集成技术的应用,实现规模化的人工繁育和养殖,促使该物种资源量在人工干预的条件下实现有效扩增。     

秦岭细鳞鲑资源现状及保护遗传学研究进展

秦岭细鳞鲑为我国特有的珍稀冷水性鱼类,被列为国家二级保护水生野生动物。近年来秦岭细鳞鲑人工繁育技术取得了突破性进展,种群数量也有一定的恢复。目前,秦岭细鳞鲑的相关研究主要侧重生态、形态、解剖、繁殖、胚胎发育、起源演化等宏观方面,而遗传学、生理生化、细胞、分子生物学等微观方面的研究较少。结合现有资料对目前秦岭细鳞鲑资源现状及保护遗传学的研究进展进行概述。     

秦岭细鳞鲑物种有效性的探讨

采用PCR技术获得细鳞鲑秦岭亚种25尾个体的线粒体DNA控制区598bp的序列,从Gene Bank下载黑龙江流域的尖吻细鳞鲑与钝吻细鳞鲑的同源序列,以近缘物种哲罗鲑为外类群,构建了中国细鳞鲑属的分子系统发育树,并结合形态特征讨论了细鳞鲑秦岭亚种的有效性。遗传结构分析显示,秦岭亚种与黑龙江流域两种细鳞鲑之间以及后两种细鳞鲑之间的遗传距离分别为:0.0202,0.0207,0.0199,明显大于细鳞鲑属种内遗传距离:0.0023,0.0033,0.0091。以邻接法(NJ)和最大简约法(MP)构建的系统发育树表明,秦岭地区的细鳞鲑单独构成一个单系群,而黑龙江流域的两种细鳞鲑构成一个大的支系。以上结论证明了秦岭细鳞鲑已经达到了亚种水平的分化,该研究的结果支持形态分类上秦岭亚种的分类地位。     

兰州鲇与秦岭细鳞鲑血清生化指标的比较研究

为了解兰州鲇(Silurus lanzhouensis)与秦岭细鳞鲑(Brachymystax lenok tsinlingensis)在血清生化指标等方面的异同,对兰州鲇和秦岭细鳞鲑血清主要生化指标进行了比较分析。结果表明,兰州鲇总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、白球比(A/G)、尿素(BUN)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、钙(Ca2)和磷(P)含量显著低于秦岭细鳞鲑(P0.05),血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)含量显著高于秦岭细鳞鲑(P0.05),两种鱼类的球蛋白(GLO)含量无显著差异(P0.05)。研究结果显示,兰州鲇与秦岭细鳞鲑在血清学上反映其在营养代谢上有较大差异,兰州鲇的蛋白质代谢强度相对较大,而秦岭细鳞鲑的糖脂代谢较为旺盛。     

细鳞鲑幼鱼对饲料中维生素E的需求量

本试验旨在研究饲料中不同水平的维生素E对细鳞鲑幼鱼生长性能、血清生化指标和机体维生素E积累量的影响,并确定细鳞鲑幼鱼对饲料中维生素E的需求量。选取初均质量为(40.2±3.6)g的细鳞鲑幼鱼270尾,随机分成6个组,每组3个重复,每个重复15尾。各组分别投喂不同维生素E水平(实测值分别为16.6、64.9、165.5、316.2、615.5和1 214.7 mg/kg)的6种等氮等能的试验饲料。试验期120 d。结果表明:1)细鳞鲑的末均质量(FW)、增重率(WGR)和特定生长率(SGR)均随着饲料维生素E水平的升高呈先升高后降低的趋势,165.5 mg/kg组细鳞鲑的FW显著高于其他各组(P0.05),165.5 mg/kg组细鳞鲑的WGR和SGR显著高于16.6和1 214.7 mg/kg组(P0.05)。各组间细鳞鲑的摄食率、饲料系数和蛋白质效率没有显著差异(P0.05)。2)随着饲料维生素E水平的升高,血清甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量均呈逐渐降低的趋势,且615.5和1 214.5 mg/kg组显著低于其他各组(P0.05)。随着饲料维生素E水平的升高,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量呈先升高后降低的趋势,且165.5 mg/kg组显著高于其他各组(P0.05),64.9和316.2 mg/kg组显著高于16.6、615.5和1 214.5 mg/kg组(P0.05);而血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量与HDL-C含量呈相反的趋势,且165.5和316.2 mg/kg组显著低于其他各组(P0.05)。各组间血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性没有显著差异(P0.05)。3)随着饲料维生素E水平的升高,细鳞鲑肝脏维生素E积累量除615.5与1 214.5 mg/kg组间无显著差异(P0.05)外,呈显著升高的趋势(P0.05);肌肉维生素E积累量也呈升高的趋势,在饲料维生素E水平大于165.5 mg/kg时恒定在一个水平,且165.5、316.2、615.5和1 214.5 mg/kg组肌肉维生素E沉积量显著高于16.6和64.9 mg/kg组(P0.05)。由此可见,饲料中添加适宜水平的维生素E可以改善细鳞鲑的生长性能和血清生化指标,增加肝脏和肌肉维生素E积累量。以增重率和肌肉维生素E积累量为评价指标,根据折线模型得出,细鳞鲑对饲料中维生素E的需求量分别为145.87和180.98 mg/kg。     

丁香油对孔雀鱼麻醉效果的研究

为了研究丁香油对孔雀鱼的麻醉效果,试验采用室内实验生态学方法研究丁香油浓度(30,90 mg/L)、水温(17,23和27℃)对孔雀鱼麻醉时间和苏醒时间的影响。结果表明:在(23±0.5)℃水温条件下,30~90 mg/L丁香油浓度范围内,孔雀鱼的麻醉时间随丁香油浓度的升高而缩短,苏醒时间随丁香油浓度的升高而延长;方差分析表明,水温和丁香油浓度对孔雀鱼麻醉时间和苏醒时间均有不同程度影响,二者间交互作用明显;在17~27℃水温范围内,孔雀鱼的麻醉时间和苏醒时间在30,90 mg/L丁香油浓度中均随温度的升高而缩短;在水温27℃,丁香油浓度30 mg/L条件下,孔雀鱼的麻醉效果符合理想麻醉剂标准,在养殖生产和科学研究等操作中应综合考虑丁香油麻醉浓度和水温之间的交互作用。     

清水县秦岭细鳞鲑种质资源调查

为全面系统的摸清秦岭细鳞鲑在清水县的分布状况和生态特征,进行了本次调查。结果表明:长沟河干流和支流、牛头河上游、汤峪河上游和后川河上游分布着一定数量的秦岭细鳞鲑,尤以长沟河干流和支流数量较多;其分布海拔下限明显提高,分布面积大幅缩小;分布区域的生态环境和水质优良;种群衰退和人为干扰严重。     

虹鳟肌肉中MS-222麻醉剂残留的HPLC-UV检测方法探究

本文研究了MS-222麻醉剂在虹鳟肌肉中残留的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)检测分析方法。虹鳟肌肉组织匀浆后置于Mcllvaine缓冲液与甲醇的混合提取液中超声提取,提取液浓缩溶解后经C₁₈固相萃取柱纯化;纯化定容样品以甲醇∶水∶乙酸=65∶35∶1为流动相,利用C₁₈色谱柱行等梯度洗脱分离,用紫外线检测器于223 nm波长处进行检测。MS-222的HPLC出峰时间为6.1 min左右,方法检测限为20 μg/kg,精密度在2.63%～4.74%之间;MS-222加标回收率均﹥88%,批内变异系数<1.2%,批间变异系数均<5%,方法的重复性和重现性好。该方法具有操作便捷、提取率高、重复性和重现性好等优点,具备良好的检测特异性和精密度,满足一般MS-222残留分析的需要,可为进一步研究MS-222在虹鳟体内的残留及其代谢规律提供技术支持。     

猪传染性胃肠炎病毒检测基因芯片的构建

采用PCR扩增制备TGEV的靶基因并进行纯化,对基因芯片的最佳靶基因点样质量浓度、探针质量浓度、杂交温度、杂交时间进行筛选,选择构建检测芯片的最适靶基因,进行基因芯片探针最佳标记方法试验.结果表明,质粒PCR扩增和采用异丙醇沉淀纯化的靶基因质量好,基因芯片最佳靶基因点样质量浓度为200mg/L,最佳探针质量浓度为3 000 μg/L,预杂交时间为1 h,杂交时间为3～6 h,杂交温度为48℃,以S、S3、sM、M、N、ORF7、POL等7个靶基因为构建TGEV检测芯片的最适靶基因,确定了多重PCR扩增标记TGEV探钟的最佳体系,Cy3-dCTP标记浓度为2.5 μmol/L,构建的TGEV检测芯片与标记的混合探针杂交效果好.     

鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿麻醉效果观察

为评价鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿的麻醉效果。试验选取6只本地成年梅花鹿,肌肉注射0.04 m L/kg体重的鹿特异性复合麻醉剂,连续监测全麻过程中梅花鹿的麻醉状态、镇痛、镇静和肌松效果。结果显示,注药后6.1±0.45min全部梅花鹿进入麻醉状态,麻醉可维持91.67±2.25 min,苏醒时间为33±2.0 min;在进入麻醉期全程中梅花鹿的镇痛、镇静和肌松效果良好。表明,鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿麻醉诱导迅速,维持时间较长,苏醒平稳,可适用于临床中梅花鹿的麻醉。     

丁香油对斑马鱼麻醉效果的研究

本试验研究了在不同浓度(20、40、60和80 mg/L)丁香油和温度(23℃和27℃)对斑马鱼的麻醉效果。研究结果表明,在本试验丁香油浓度范围内,斑马鱼的麻醉时间随丁香油浓度的增大而缩短,复苏时间则随丁香油浓度的增大而延长。在23℃和27℃下,斑马鱼的麻醉时间在20 mg/L浓度处理组最长,显著高于其他浓度处理组(P<0.05);复苏时间在20 mg/L浓度处理组下最短,显著低于其他浓度处理组(P<0.05)。同一浓度下,斑马鱼的麻醉时间和苏醒时间均随温度的升高而缩短。综上结果,本研究认为在浓度为40 mg/L下丁香油对斑马鱼麻醉效果较好,丁香油对斑马鱼的麻醉效果受温度影响显著。     

不同絮凝剂对光合细菌采收的影响

相对于高速离心分离,采用絮凝技术采收光合细菌,具有耗能少、成本低、操作简单等特点。因此,本试验旨在研究不同质量浓度的硫酸铝、聚合氯化铝、硫酸亚铁、氯化铁及酵母细胞壁絮凝采收光合细菌的效果。结果显示：5 种絮凝剂均能高效回收光合细菌,氯化铁采收光合细菌的最适质量浓度为 1000 mg/L,回收率高达（98.11±0.24）%|硫酸铝的最适质量浓度为1000 mg/L,回收率为（94.12±0.13）%|硫酸亚铁的最适质量浓度为 1500 mg/L,回收率为（90.56±0.16）%|酵母细胞壁的最适质量浓度为 80 mg/L,回收率为（77.65±0.33）%|聚合氯化铝的最适质量浓度为 2000 mg/L,回收率为（70.83±0.44）%。酵母细胞壁用量低、无毒害,更适合用于采收光合细菌|综合考虑,酵母细胞壁添加浓度以80 mg/L最宜,沉降浓缩时间为1 h。 [关键词] 光合细菌|絮凝|采收|硫酸铝|聚合氯化铝|硫酸亚铁|氯化铁|酵母细胞壁     

秦岭细鳞鲑消化系统的形态学观察

运用大体解剖和常规组织学方法对秦岭细鳞鲑消化系统的组织形态进行了系统观察。结果表明,秦岭细鳞鲑的消化道由口咽腔、食道、胃和肠等4部分组成,除口咽腔外,管壁由内向外分为黏膜、黏膜下层、肌层和浆膜。口咽腔宽大,上颌、犁骨及腭骨等处布有细齿,黏膜衬以复层扁平上皮,间有较多的黏液细胞和少量的杯状细胞及味蕾;食管粗而短,黏膜向管腔突出形成多个纵行皱襞,上皮由复层扁平上皮逐渐向单层柱状过渡,上皮细胞间可见到数量较多的粘液细胞和杯状细胞,食管腺不发达;胃体积较大,呈“U”形,包括贲门部、胃体和幽门部,胃体部小凹及胃底腺结构明显,肌层发达;胃与肠相接处有63-65个幽门盲囊,肠道粗短而略微盘曲,黏膜上皮为单层柱状,未见明显的肠腺。以上结果显示,秦岭细鳞鲑消化道组织结构与其肉食性功能密切相关。肝小叶界限不清;双列肝细胞围绕中央静脉呈放射状走行,肝细胞个体大、呈多边形,核呈圆形或卵圆形,1-2个。胰脏大部分环绕前肠边缘、呈细长条索状,另可见分散于幽门盲囊及胃周围的弥散部分;其外分泌部为管泡状腺,腺细胞呈锥体形,胰岛结构明显。     

鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿循环和呼吸系统的影响

为观察鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿循环和呼吸的影响,6只成年健康梅花鹿被肌注鹿特异性复合麻醉剂0.04 m L/kg,给药后全程监测动物的麻醉状态、呼吸频率(RR)、心率(HR)、收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP)、舒张压(DBP)、动脉血氧饱和度(SPO2)、体温(T)等参数。结果显示:鹿特异性复合麻醉剂作用梅花鹿的诱导时间为(6.10±0.45)min,麻醉时间为(91.67±2.25)min,苏醒时间(33.0±2.0)min;梅花鹿在诱导期HR、RR出现一过性升高,进入麻醉期后开始降低,与诱导前比较变化显著(P0.05);麻醉期DBP、SBP、MAP、T和SPO2与诱导前比较显著降低(P0.05)。结果提示:鹿特异性复合麻醉剂对梅花鹿麻醉期循环和呼吸部分指标有一定影响,但苏醒后各指标恢复正常。     

复序橐吾组培再生体系研究

用复序橐吾(Ligularia jaluensis Kom.)种子获得无菌苗,取其叶片为外植体,以MS培养基为基础,通过添加不同浓度和种类的细胞分裂素及生长素,目的是筛选出叶片组织培养的最适培养基。结果表明:种子较好的灭菌时间为75%酒精30 s+1‰升汞4min;初代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L,由此获得的愈伤组织致密、颜色绿,具有很好的诱导效果,其诱导率达到90%;继代增殖的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,其增殖倍数高达3.9,并且苗生长状况良好;生根最适培养基为:1/2MS+NAA 0.5mg/L,生根率达100%。     

细鳞鲑疖疮病的病原鉴定及防治药剂筛选

自然发病的细鳞鲑(Brachymystax Lenok)出现鳃盖边缘、鳍条基部充血,鳍条溃烂,肛门红肿等症状。从病灶处分离得到的优势菌株,定名为BJSY-1、BJSY-2、BJSY-3。通过回归感染试验证明BJSY-1为致病菌,其LD_(50)为6.97×10~5CFU/mL。经生理生化鉴定和16S rDNA序列分析最终确定BJSY-1菌株为杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp.Salmonicida)。该菌对四环素类、喹诺酮类等药物高度敏感。选择氟苯尼考作为治疗药物,按20 mg/kg·bw的用药量拌饵投喂,每天投喂1次,连续投喂有较好的治疗效果,为杀鲑气单胞菌的治疗和防控提供了参考。     

多年生黑麦草种子愈伤组织诱导和植株再生

研究并建立了多年生黑麦草胚性愈伤组织诱导及其再生体系.结果表明:不同品种的愈伤组织诱导率不同,最适培养基是MS,愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度是5mg/L;继代培养时间对愈伤组织的分化率有很大影响;植物凝胶与国产琼脂相比固化效果更好;筛选剂G418对抗性愈伤的浓度在50mg/L和7mg/L时的筛选效果分别达10.31%和6.%.     

鲤鱼的人工繁育技术

正堵河鲤鱼是汉江堵河水域的重要经济鱼类之一,其黄鳞红尾、体形细长、脊背微凸,肉质细嫩,具有生长快、食性宽、饲料系数低、适应性强等养殖优点。近几年,由于对堵河鲤鱼的需求量增加,堵河鲤鱼苗种出现供需矛盾,为帮助养殖户解决苗种购买困难问题,现结合笔者20多年的人工繁殖经验,把堵河鲤鱼的人工繁育技术介绍如下,仅供参考。     

仙客来愈伤组织的诱导及其抗褐变的研究

该试验以仙客来的叶片、叶柄、花梗为外植体,分别以MS为基本培养基,并添加了不同种类和浓度的植物生长激素,对其进行愈伤组织的诱导.另外,还初步研究了活性炭(AC)、VC、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和黑暗培养对仙客来外植体抗褐变的作用.结果表明,以叶片为外植体诱导效率最高,叶柄、花梗次之.叶片愈伤组织诱导的最适培养基为1/2MS 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D 0.5 mg/L KT 0.25 mg/L;叶柄愈伤组织诱导的最适培养基是MS 6-BA 0.2mg/L NAA 2.5 mg/L;花梗愈伤组织诱导的最适培养基是MS 6-BA 0.2 mg/L 2,4-D0.5 mg/L.5种抗褐化处理方法中黑暗培养抗褐化效果最好.     

俄罗斯杂花苜蓿愈伤组织原生质体游离与培养条件的优化

对俄罗斯杂花苜蓿(Medicago varia)原生质体游离和培养条件进行优化,建立其原生质体融合的体细胞杂交体系.以下胚轴诱导所碍愈伤组织为材料进行原生质体游离,研究酶液组合、渗透压调节物甘露醇浓度、酶解时间、愈伤组织继代时间及预处理措施对原生质体游离效果的影响,以及激素浓度与培养密度对原生质体培养的影响.结果表明:最佳酶液组合为2％纤维素酶+0.5％果胶酶+0.3％离析酶,最佳渗透压为0.55mol/L,最佳酶解时间为12h,愈伤组织继代培养至14d的游离性最佳;固—液综合培养条件下最适激素组合为1.5mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA,最适原生质体培养密度为3×10 5个/mL.