先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究

为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率,研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒,使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒,脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系（DF-1）中并进行药物筛选,PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示：测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功;DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变,其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失（indel）效率为6.67%,均显著优于对照组的常规基因编辑（P<0.05）;MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性,为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。     

I型鸭肝炎病毒在鸭胚成纤维细胞系中的增殖特性研究

为研究I型鸭肝炎病毒(DHV-1)在鸭胚成纤维细胞系(DEF-h)中的增殖规律,本研究将DHV-1野毒株(ZJ-08株)接种DEF-h细胞,连续传代3次后,观察病毒对细胞的致病变效应(CPE),并对病毒核酸及其蛋白的表达和病毒增殖特性进行了鉴定。研究结果显示,DHV ZJ-08株能够在DEF-h中有效增殖,并产生典型的CPE,病毒蛋白在细胞中也获得了良好表达,并与DHV-1特异性抗体发生反应。一步生长曲线显示ZJ-08株病毒感染DEF-h 12 h开始增殖,36 h～60 h进入快速增殖期,72 h达到峰值,TCID50为10-4.3/mL。本实验为进一步的DHV-1的致病机理和细胞灭活疫苗的研制奠定了基础。     

鸡传染性支气管炎病毒弱毒株ZZ-V_(35)在鸡胚中的增殖规律

为了研究鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV ZZ-V35)在鸡胚中的增殖规律,用尿囊腔接种法给11日龄的SPF鸡胚接种IBV ZZ-V35弱毒,并构建了阳性质粒,采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time PCR)法建立了标准曲线,分别检测感染鸡胚尿囊液中36、48、52、56、60、64、68、72、76、80、88、96、120、144h的病毒含量。结果显示,在鸡胚发育不同的时间点IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数分别为1.416×106、1.791×106、2.056×106、3.027×106、3.664×106、1.854×106、1.380×106、1.109×106、7.976×105、5.408×105、2.958×105、2.512×105、4.365×104、1.130×104。研究发现,IBV ZZ-V35弱毒的拷贝数在60h达到最高值,即3.664×106。这为IBV ZZ-V35弱毒株疫苗的研究提供了新的依据。     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

禽呼肠孤病毒

1957年,Norman Olson博士等在西弗吉尼亚大学研究支原体滑液囊炎的病原时,自有滑液囊炎的肉鸡体内分离到一病原,此病原对氯霉素和呋喃唑酮不敏感.Olson在1959年报道这一特定病原对链霉素也不敏感.Kerr和Olson也观察到一滑液囊炎的新病原仅对幼龄鸡致病,而这种年龄性抵抗力在支原体引起的滑液囊炎是不常见的.随后,Olson和他的同事们鉴定出这一滑液囊炎的病原是病毒,他们称为"病毒性关节炎因子",最初,因为该病毒是双链核酸,将其错鉴定为痘病毒.最终由Walker等经电镜鉴定为呼肠孤病毒.     

禽呼肠孤病毒

随着养禽业的蓬勃发展,禽病的问题也日趋严重,一些原来并不重要的病原逐渐引人注目,禽呼肠孤病毒就是一例。除了已知的禽病毒性关节炎及滑液囊炎以外,近年来还发现它与所谓暂时性消化系统紊乱、蓝翅病等有关,并且由于它的混合感染,使一些常见病如马立克氏病、传染性法氏囊病等变得更加复杂和严重.     

鹅源禽痘病毒在鸡胚中的增殖及其理化特性鉴定

为填补国内外水禽源痘病毒培养特性和理化特性研究方面的空白,对国内检测并鉴定的鹅源禽痘病毒,用鸡胚进行分离培养和病毒理化特性研究。将鹅皮肤痘疹样本研磨后,接种SPF鸡胚进行连续传代培养。病理检查和PCR检测证实,病毒可在鸡胚中增殖,且经连续5轮传代后,鸡胚病变及病毒滴度趋于稳定。鸡胚中可以观察到绒毛尿囊膜水肿增厚及白色痘斑等禽痘特征性病变。对采集病变的绒毛尿囊膜进行电子显微镜观察,可见病毒包涵体和典型禽痘病毒粒子。利用建立的鸡胚培养体系,对该病毒理化特性进行鉴定,发现病毒对热(55℃)、酸(pH3)、碱(pH11)、胰蛋白酶、乙醚和氯仿敏感。本研究首次建立了鹅源禽痘病毒鸡胚培养体系并对其理化特性进行了鉴定,从而为系统开展该病毒生物学特性和防控技术研究提供了必要的技术基础。     

一株分离自外观正常鸡胚的禽呼肠孤病毒的鉴定

从外观正常的鸡胚体内分离到一株病毒,其在鸡胚原代成纤维细胞上繁殖产生稳定的以合胞体为特征的CPE;病毒呈二十面体对称,无囊膜,有双层衣壳,直径为50～60nm;SDS-PAGE显示病毒基因组分为10个片段,呈3—3—1—3分布,与禽呼肠孤病毒(ARVS)FDO株基本相同。以上资料说明,鸡胚所带病毒为一株ARVS,其在CEF-2代上的TCID_(50)为10~(-6.16)/0.1ml。     

利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。     

鸡胚增殖病毒技术操作要点

目前病毒的培养有动物接种、组织培养和鸡胚培养3种方法,其中鸡胚培养是病毒培养中最常用的方法之一。鸡胚是正在发育中的机体,多种动物病毒能在鸡胚中增殖和传代。鸡胚的优点在于胚胎的组织分化程度低,而且可以选择不同的日龄和接种途径,病毒在鸡胚中易于增殖,部分病毒感染鸡胚以后可以产生疽斑,引起充血、出血、坏死灶和死亡等特异性的感染指征。感染病毒的鸡胚组织和液体中含有大量病毒,容易采集和处理,而且来源充足,设备和操作简便易行。     

影响病毒在鸡胚中增殖的因素

1.种蛋质量的选择:要想得到效价高、产量高的病毒液,首先要选择种蛋,SPF种蛋是最为理想的。其次是非免疫种蛋,种蛋要选择大小均匀,蛋壳比较光滑,没有粪便污染,无破损,蛋壳钙质比较好的,为合格种蛋。     

禽多元特异性抗体在鸡胚、鸡胚成纤维细胞上对鸡新城疫病毒的抑制性试验研究

利用自行研制的禽多元特异性抗体在鸡胚、鸡胚成纤维(CEF)细胞上对鸡新城疫(ND)病毒的抑制效果进行观察,结果表明:禽多元特异性抗体能有效抑制鸡ND病毒的生长繁殖,且对鸡胚和鸡CEF细胞无任何不良作用,在应用上其预防作用要优于其治疗作用。     

禽呼肠孤病毒研究进展

禽呼肠孤病毒（Avianreovirus,ARV）属于呼肠孤病毒科,呼肠孤病毒属的成员,是一种能引起关节炎、心包炎、肠炎、肝炎、法氏囊及胸腺萎缩、骨骼异常、产蛋下降和营养吸收障碍等疾病的双链RNA病毒。1957年Olson等首次分离到禽呼肠孤病毒,此后英国、美国、     

禽呼肠病毒分子生物学研究进展

禽呼肠病毒属于呼肠病毒科正呼肠病毒属,基因组为线性双股RNA,由分节段的10个基因片段组成,根据核酸电泳迁移率可分成3组,即大基因节段(L),中基因节段(M)和小基因节段(S),它们编码10种结构蛋白,4种非结构蛋白。目前,已完成了L3,M3,S1,S2,S3和S4基因的克隆表达,建立了重组σA蛋白,重组σNS蛋白的单克隆抗体McAb-ELISA以及σB-ELISA等分子诊断方法。文章阐述了禽呼肠病毒基因组的特性及病毒蛋白的结构和功能,旨在为禽呼肠病毒的诊断、预防和疫苗研制提供参考。     

氯化锂对新城疫病毒在鸡胚成纤维细胞内复制的影响

<正>锂是临床治疗双向情感障碍的有效药物,目前有关于锂在病毒感染中的运用和分子机制方面的研究,如用锂治疗鼠艾滋病(MAIDS)动物,抑制艾滋病病毒(HIV)在外周血单核细胞(PBMCs)内的复制[1-2],临床前期治疗可减少HIV荷载量。锂可以有效抑制GSK-3β的活性,导致β-catenin蛋白累积,激活Wnt/β-catenin信号通路[3-4],成为Wnt信号通路的     

禽呼肠病毒感染鸡胚成纤维细胞后Toll样受体mRNA转录水平的动态变化

为分析禽呼肠病毒(ARV)标准毒株S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后对相关鸡Toll样受体(ChTLRs)mRNA转录水平的影响作用,利用实时荧光定量PCR,测定和分析ARV-S1133感染CEF后ARV结构蛋白σC和ChTLRs的mRNA转录水平变化情况。结果表明,ARV-S1133感染CEF 10h后,ARVσC蛋白的mRNA相对表达量开始迅速上升,在48h达到峰值;同时,感染CEF中的ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21mRNA表达量发生显著变化,在感染72h内各个受体的mRNA表达量呈波浪式变化。5个不同滴度的ARV感染CEF 24 h后,ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21mRNA转录水平与病毒滴度均呈正线性相关。上述结果表明,ARV感染后可诱导CEF ChTLR3、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15、ChTLR21的mRNA转录水平发生变化,可能与禽呼肠病毒的复制和致病机制相关。